Marcadores de superficie de linfocitos B

La prueba de la función inmune humoral es un tipo de prueba en la cual el laboratorio evalúa la función inmune humoral individual. La detección de la función inmune humoral se basa en los procesos básicos de la inmunidad humoral, incluida la detección de linfocitos B, la detección de Ig y la detección de funciones de producción de anticuerpos. Información básica Clasificación de especialistas: clasificación de verificación de crecimiento y desarrollo: examen inmunológico Género aplicable: si los hombres y las mujeres aplican en ayunas: no en ayunas Consejos: si no se puede observar la muestra en el día, las células se suspenderán en la solución de preservación de anticuerpos fluorescentes, se almacenarán a 4 ° C y se contarán al día siguiente. Valor normal La media de IgM fue de 11.2 ± 6.0%; la media de IgG fue de 7.5 ± 3.3%. Importancia clínica La disminución en el número de células B está relacionada con la deficiencia inmune humoral, y el aumento en el número de células B está relacionado con la proliferación maligna de las células B. Precauciones (1) La presencia de IgG aglomerada en el reactivo de anticuerpos fluorescentes, y la IgG aglomerada puede unirse falsamente positivo al receptor Fc en la superficie de la célula B. Por lo tanto, para evitar la aglomeración de IgG, es necesario prestar atención a: 1 No se pueden usar anticuerpos fluorescentes con una relación molar F / P excesiva, y generalmente se prefieren 1 a 3. 2 Los anticuerpos fluorescentes que contienen proteínas de baja concentración son inestables a baja temperatura y no deben ser inferiores a 2 mg / ml. 3 Los anticuerpos fluorescentes almacenados a baja temperatura no deben congelarse-descongelarse repetidamente y centrifugarse durante 30 minutos a 150,000 r / min antes de su uso para eliminar los agregados. (2) Cuando se usan linfocitos vivos para la tinción de inmunofluorescencia, se agrega NaN3 a todos los reactivos (anticuerpo marcado, solución de Hank, etc.) para limitar la fluidez de la membrana celular. De lo contrario, se producirá fluorescencia y fagocitosis en forma de tapa, y el número real de células fluorescentes disminuirá. (3) Cuando se tiñe con un anticuerpo fluorescente anti-IgG, el complejo inmune antígeno-anticuerpo (tipo IgG) contenido en la muestra se une al receptor Fc en la superficie de la célula B y es fluorescente positivo. Por esta razón, se ha sugerido teñir con anticuerpo anti-F (ab) 2 marcado con fluorescencia para excluir la tinción de los receptores Fc. En los últimos años, debido al advenimiento de los anticuerpos monoclonales contra las moléculas específicas de la superficie de las células B (CD19, CD20, etc.), se ha tendido a usar anticuerpos monoclonales marcados con fluoresceína contra CD19 o CD20 para reaccionar directamente con los linfocitos de sangre periférica; Los anticuerpos monoclonales (anticuerpos primarios) de CD19 y CD20 se hacen reaccionar primero con linfocitos, luego se combinan con IgG de conejo o cabra marcada con fluoresceína (segundo anticuerpo), contados por microscopía de fluorescencia o citometría de flujo para contar sangre periférica. B linfocitos. Proceso de inspección (1) Tome 2 ml de anticoagulante de heparina, agregue una cantidad igual de líquido Hank y mezcle bien. Repita la capa en la solución estratificada, 2000r / min, centrifugue durante 20 minutos. Se retiró la capa de linfocitos, se añadió la solución de Hank, se lavó 3 veces, 1200 r / min, se centrifugó durante 10 min, la concentración de linfocitos se ajustó a 1 x 107 / ml, y se dispensaron 0,1 ml en dos tubos. (2) Lave la suspensión de linfocitos una vez más con la solución de Hank, deseche el sobrenadante y use el papel de filtro para eliminar el líquido restante de la pared interna del tubo, y agregue 2 gotas de IgG anti-humano de conejo y anticuerpo fluorescente IgM anti-humano (aproximadamente 0.08 ml). Después de agitar suavemente, coloque la incubadora a 37 ° C durante 30 min. (3) Sacar de la incubadora y lavar dos veces con solución Hank, centrifugar a 1000r / min durante 10 minutos, absorber cuidadosamente todo el sobrenadante, agregar 1 gota de 50 ml de glicerina tamponada con PBS en el fondo del tubo, mezclar y tomar 1 gota para agregar En el portaobjetos, cubra el cubreobjetos y observe bajo un microscopio de fluorescencia. No apto para la multitud. No hay tabúes. Reacciones adversas y riesgos Sin complicaciones ni riesgos.