Ensayo de transformación de linfocitos PHA

La prueba de transformación de linfocitos PHA es un cambio morfológico y bioquímico en el que los linfocitos T y los mitógenos se cultivan in vitro, y algunos linfocitos pequeños se transforman en células madre inmaduras y se someten a mitosis. Método Información básica Clasificación del especialista: clasificación del examen oncológico: examen inmune Género aplicable: si los hombres y las mujeres aplican en ayunas: no en ayunas Consejos: preste atención a una dieta saludable y mantenga un buen humor. Valor normal Recuento de linfocitos 200, identificación de linfoblastos (más de 2 a 4 veces más que los linfocitos normales, membrana nuclear transparente, placa nuclear suelta, núcleo fino, nucleolos obvios, citoplasma abundante, basófilo), transicional Linfocitos (menos cambios en el volumen, solo los cambios nucleares obvios mencionados anteriormente), linfocitos pequeños (ligeramente más grandes que los glóbulos rojos, cromatina nuclear densa, sin nucleolos), se contó la tasa de conversión. La tasa de conversión dermatológica normal es superior al 58%. Importancia clínica La disminución en la tasa de transformación de linfocitos PHA es una respuesta a una disminución en la función inmune celular. Este examen, la dermatología se usa principalmente para la clasificación de enfermedades (como la lepra), el juicio de la enfermedad (como los tumores malignos de la piel), la observación de la eficacia de los medicamentos y algunos estudios de inmunodeficiencia y enfermedades alérgicas de la piel. Resultado anormal Varios síntomas causados ​​por la función inmune disminuida. Se sospecha que la persona que necesita un examen presenta síntomas de lepra o malignidad de la piel. Precauciones 1. La composición del medio tiene una gran influencia en la tasa de conversión, preste atención a su período efectivo. 2. El suero de ternera debe inactivarse antes de su uso. 3. Al cultivar, asegúrese de que haya suficiente gas. En general, la cantidad total de líquido en la botella de cultivo de 10 ml no debe exceder los 2 ml. 4. La dosis excesiva de PHA es tóxica para las células, demasiado pequeña para estimular la transformación de linfocitos La dosis de la reacción de conversión de PHA debe determinarse antes de la prueba. 5. Se debe llevar a cabo una operación aséptica estricta en el experimento para evitar la contaminación. Tabú antes de la prueba: preste atención a una dieta saludable y mantenga un buen humor. Requisitos para la inspección: cooperar activamente con el médico. Proceso de inspección Método de operación: 1. Tome un anticoagulante aséptico de heparina 0.lml, agregue 1.8ml de medio de cultivo celular, agregue 1000μg / m1 PHA0.1m1, tubo de control sin PHA, cultive las células a 37 ° C, 5% CO2 para 3d, agite 1 por día Tiempos 2. Al final del cultivo, se desechó la mayor parte del sobrenadante y se añadieron y mezclaron 8,5 g / l de NH4Cl 4 ml y se colocaron en un baño de agua a 37 ° C durante 10 minutos. Centrifugue a 3.2500r / min durante 10 minutos, deseche el sobrenadante, agregue 5 ml de fijador al sedimento y déjelo reposar a temperatura ambiente durante 5 minutos. Centrifugar a 4.2500 r / min durante 10 min, desechar el sobrenadante, dejar 0.2 ml de células granuladas para la formación de tabletas y secar rápidamente. 5. La solución de tinción de Giemsa se tiñe durante 10-20 minutos, se lava con agua y se seca. 6. Espejo de aceite Cuenta el número de células transformadas en 200 linfocitos y calcula la tasa de conversión. El resultado se juzga: 1. Criterios morfológicos de los linfoblastos: el tamaño del núcleo, la relación de núcleo a citoplasma, la tinción del citoplasma y la estructura del núcleo y la presencia o ausencia de nucleolos. (1) Linfocitos pequeños maduros: el tamaño de los linfocitos pequeños no cultivados es de 6-8 μm, la tinción nuclear es densa, no tiene nucléolos, la proporción de citoplasma nuclear a grande es grande y el citoplasma se tiñe a basófilo leve. (2) Linfocitos de transición: más grandes que los linfocitos pequeños, aproximadamente 10 ~ 20 μm, la tinción nuclear es densa, pero aparecen nucleolos, que es el punto clave para la identificación de linfocitos pequeños maduros. (3) linfoblastos: el volumen celular aumenta, aproximadamente 20 ~ 30 μm, la forma no es limpia, a menudo protrusión pequeña, agrandamiento nuclear, manchas nucleares sueltas, hay 1 o 2 nucleolos, ensanchamiento del citoplasma, a menudo citoplasma Burbuja vacía (4) Otras células: por ejemplo, después del cultivo de neutrófilos durante 72 horas, la mayor parte de la descomposición o muerte es fragmentación. 2. Cálculo de la tasa de transformación de linfocitos La cabeza, el cuerpo y la cola se examinaron en la clasificación anterior, y se contaron 200 linfocitos para calcular el porcentaje. Los linfocitos transformados incluyen linfoblastos y linfocitos de transición, y los linfocitos no transformados se refieren a linfocitos pequeños maduros. En circunstancias normales, la tasa de transformación de linfocitos inducida por PHA es del 60 al 80%, y si es del 50 al 60%, es baja, y cuando es del 50% o menos, disminuye. Según los resultados, se obtiene el juicio correcto. No apto para la multitud. Muchedumbre inapropiada: temporalmente desconocida. Reacciones adversas y riesgos No hay complicaciones y riesgos relacionados.