Ensayo de cultivo mixto de linfocitos

El cultivo mixto de linfocitos (MLC) es un método de prueba para determinar el grado de compatibilidad entre un receptor y el antígeno de histocompatibilidad principal del donante (antígeno HLA), y se usa comúnmente para la coincidencia de tejidos antes del trasplante de órganos. El cultivo de linfocitos mixtos es un cultivo mixto bidireccional de linfocitos donantes y receptores, o la inactivación de linfocitos donantes a un cultivo mixto, y el grado de respuesta celular se correlaciona negativamente con el grado de compatibilidad donante-receptor. Información básica Clasificación de especialistas: clasificación de verificación de crecimiento y desarrollo: examen inmunológico Género aplicable: si los hombres y las mujeres aplican en ayunas: no en ayunas Consejos: Las personas con alto rechazo no deben hacer esta verificación. Valor normal La tasa de conversión del método de conteo morfológico es <10%. El método de conteo de isótopos compara cpm para obtener P> 0.05. Importancia clínica Resultados anormales: En el trasplante de riñón, la tasa de conversión de los donantes vivos debe ser <10%; la tasa de conversión de los donantes cadavéricos debe ser> 10%. La coincidencia de baja reacción solo se puede usar en el mismo lote de experimentos. Una tasa de conversión de linfocitos del 10% es compatible entre tejidos de diferentes cuerpos. La prueba de cultivo mixto de linfocitos se usa para detectar el estado inmune del paciente. Cuando se reduce el número de linfocitos T, la tasa de conversión también se reduce. Se puede usar como un método compatible para el trasplante de órganos y médula ósea para seleccionar un donante adecuado. Si la tasa de conversión es alta, se utiliza para la diferencia entre el destinatario y el destinatario. La tasa de conversión es baja y la tasa de éxito después del trasplante es alta. Necesidad de detectar personas: Personas con inmunidad deteriorada o desaparecidas. Precauciones En el momento del examen: esta prueba se puede usar como un método para evaluar a los donantes para el trasplante de órganos. Aquellos con una tasa de conversión baja tienen una tasa de éxito alta y aquellos con una tasa de conversión alta tienen una tasa de éxito baja. Proceso de inspección 1. Preparación de linfocitos de donantes: Se añadió sangre venosa periférica fresca a un tubo de centrífuga que contiene una solución de separación de linfocitos con una gravedad específica de 1.077 en una proporción de 1: 1, y se aplicó suavemente a la superficie del líquido. Centrifugue a 2000 r / min durante 20 minutos para absorber la capa intermedia de linfocitos halo. Lavar dos veces. Tinción con azul de tripán, recuento en placa de conteo. Ajustar la densidad celular a 2 × 109 / L, dividir en 3 tubos, centrifugar por separado y dejar un precipitado. Agregar 250 μL de mitomicina a cada tubo (concentración final 50 mg / L) Y 1.75 mL de solución salina fisiológica, baño de agua a 37 ° C durante 40 min, y se lavó dos veces con solución salina fisiológica. Ajuste la densidad celular a 1 × 10 10 / L con solución RPMI1640 que contiene 100 mL / L de suero fetal bovino. Agregue el anticuerpo para bloquear el antígeno. Marque como D. 2. Preparación de linfocitos receptores: Se añadió sangre venosa periférica fresca a un tubo de centrífuga que contiene una solución de separación de linfocitos con una gravedad específica de 1.077 en una proporción de 1: 1, y se aplicó suavemente a la superficie del líquido. Centrifugue a 2000 r / min durante 20 minutos para absorber la capa intermedia de linfocitos halo. Lavar dos veces. Ajustar la densidad celular a 1 × 1010 / L con medio RPMI1640 que contiene 120 ml / L de suero fetal bovino. 3. Cultivo mixto de linfocitos: Los R y D preparados se añadieron a la placa de 96 pocillos de la siguiente manera, y se cultivaron en una incubadora de CO2 de 50 ml / L durante 24 ha 37ºC. Grupo A: R50 μL + D 50 μL; Grupo B: R50 μL + D50 μL + IL 2 purificación y neutralización de mAb 15 μL ; Grupo C: R50μL + IL? 2 mAb purificado y neutralizado 15μL; Grupo D: R50μL. Cada grupo tenía 3 pocillos duplicados, y el grupo de control en blanco era 100μL de medio RPMI1640. No apto para la multitud. No apto para personas: personas con alto rechazo. Reacciones adversas y riesgos No hay complicaciones y riesgos relacionados.