β-N-acétylglucosaminidase

La β-N-acétylglucosaminidase (NAG) hydrolyse le β-N-acétylglucosaminide et hydrolyse la β-N-acétylgalactosamine. L'enzyme est largement présente dans divers tissus, organes, liquides organiques et cellules sanguines et constitue une hydrolase acide dans les lysosomes. Les méthodes de mesure sont la colorimétrie et la fluorométrie. Informations de base Classification de spécialiste: classification de l'examen urinaire: examen biochimique Sexe applicable: si les hommes et les femmes appliquent le jeûne: le jeûne Résultats d'analyse: En dessous de la normale: Rare. Valeur normale: Β-N-acétylglucosaminidase sérique: 15,14-27,94 U / L Au-dessus de la normale: Les métaux lourds (mercure, plomb, cadmium, etc.) et les lésions rénales d'origine médicamenteuse, l'ischémie, l'hypoxie, la perte de sang, le choc, etc. induits par le médicament peuvent entraîner une augmentation de l'activité de la NAG. Négatif: Positif: Conseils: Selon le statut nutritionnel de tout le corps, du lait, des œufs, des fruits, du lait de soja, etc. sont donnés au repas. Valeur normale 1, méthode colorimétrique au p-nitrophénol: sérum NAG21,54 ± 6,4U / L, le NAG urinaire est normalement distribué, la médiane est de 9,13U / g de créatinine, la limite supérieure du 95ème percentile est de 16,10U / g Créatinine. 2. Méthode de fluorescence: Sérum adulte: 9,94 ± 2,07U / L. Urine adulte: 6,39 ± 3,19 U / Lre. Signification clinique La détermination de l'activité NAG dans le sang et l'urine est sensible aux modifications des lésions du parenchyme rénal, en particulier des lésions aiguës et des maladies actives, et est principalement utilisée pour la surveillance précoce des lésions rénales et l'observation de la maladie. 1, les métaux lourds (mercure, plomb, cadmium, etc.) et les lésions rénales d'origine médicamenteuse, l'ischémie, l'hypoxie, la perte de sang, le choc, etc. peuvent entraîner une augmentation de l'activité du NAG. 2, le syndrome de NAG urinaire syndrome néphrotique souvent augmenté de manière significative, la période de rémission a diminué, la récupération rapide lors de la récidive, il peut être utilisé comme une indication pour l'observation clinique. La phase aiguë de la glomérulonéphrite varie beaucoup, mais le changement est plus petit que celui de la lésion tubulaire rénale. 3, l'emplacement du diagnostic d'infection des voies urinaires de pyélonéphrite aiguë et chronique urinaire augmentation de NAG, peut être distingué d'une simple cystite. Peut être utilisé pour le diagnostic des infections précoces des voies urinaires supérieures. 4, le rejet de greffe rénale suivi le rejet de greffe rénale précoce NAG peut être augmenté, plus sensible que la protéine d'urine, la créatinine sérique, clairance de la créatinine. 5, le diagnostic précoce de la néphropathie diabétique, la néphropathie diabétique, la NAG urinaire élevée, le diagnostic précoce de cette maladie est préférable à l'albumine urinaire et à la β2-microglobuline. Des résultats élevés peuvent être des maladies: syndrome néphrotique, infections des voies urinaires (1) méthode colorimétrique au p-nitrophénol: 1 Le substrat p-nitrophénol doit être purifié et préformé à 50 ° C pendant 24 h. La concentration a été ajustée à 0,04 mmol / L avec 10 mmol / L de NaOH et la courbe d'absorption a été balayée avec un spectrophotomètre à bande passante étroite, λmax = 401 nm, conformément à la norme IFCC, Aλax = 0,7316 à 0,7388, et Eλmax = 18380 ± 90 (25 ° C). 2 La solubilité du substrat est faible. Lors de la préparation, réglez-le sur une pâte avec une quantité appropriée de tampon pH 4,6, puis ajoutez progressivement le tampon à la quantité requise. 3 Lorsque les résultats de mesure se situent dans la plage ultra-linéaire, il convient de diluer l'échantillon avec du sérum physiologique, de le tester à nouveau et de le multiplier par le facteur de dilution. 4 La concentration enzymatique dans l'urine est fortement influencée par le volume urinaire. Le volume urinaire sur 24h doit être conservé. Si le taux d'excrétion de l'enzyme est calculé par le rapport NAG / g de créatinine, il n'est pas affecté par la concentration ou la dilution de l'urine et il n'est pas nécessaire de laisser 24 heures d'urine. (2) méthode de fluorescence: 1 La méthode de fluorescence pour mesurer le NAG consiste en un kit domestique très sensible qui n’est pas affecté par l’urine. 2 Il peut également être utilisé avec l’usine d’instruments analytiques Shanghai No.3 pour produire un photomètre à fluorescence 930, un filtre d’excitation 360 et un composite de filtre à émission (400 + 450), avec des résultats satisfaisants. 3 La concentration de chaque composant dans la solution de réaction enzymatique est la suivante: 1,33 mmol / L de substrat, 20 mmol / L d’acide citrique et 432 mmol / L de Na2HPO. 4 Les solvants utilisés dans les réactifs doivent être de l'eau distillée, le substrat doit être exempt de 4-MU, la BSA doit être exempte de l'enzyme ou chauffée à 50 ° C pendant 2h. 5 NAG dans le sérum est stable pendant plusieurs heures à plusieurs jours à 4 ° C et stable pendant plusieurs mois à -20 ° C. Le spécimen d'urine était stable à 4 ° C pendant une semaine et un plasma anticoagulé au citrate était également utilisé. Le 6β-N-acétylglucosaminide peut être catalysé par deux enzymes, l'une est la β-N-acétylglucosaminidase (EC 3.2.1.30) et l'autre, la β-N-acétylglucosidase (EC3). .2.1.52) Seuls les EC3.2.1.30 ou EC3.2.1.52 peuvent être définis pour les enzymes purifiées. Le NAG, auquel il est souvent fait référence dans la littérature nationale, porte strictement le nom du substrat utilisé, plutôt que la spécificité de l’enzyme pour le substrat. Par conséquent, la littérature étrangère actuelle est souvent appelée β-N-acétylglucosaminidase. Processus d'inspection (1) Mélange colorimétrique p-nitrophénol, à 405 nm de longueur d'onde, chemin optique de 1 cm, eau distillée nulle, lisez l'absorbance de chaque tube et vérifiez la courbe d'étalonnage avec la différence de (AU-AC). 1 Le substrat p-nitrophénol doit être purifié et préformé à 50 ° C pendant 24 h. La concentration a été ajustée à 0,04 mmol / L avec 10 mmol / L de NaOH et la courbe d'absorption a été balayée avec un spectrophotomètre à bande passante étroite, λmax = 401 nm, conformément à la norme IFCC, Aλax = 0,7316 à 0,7388, et Eλmax = 18380 ± 90 (25 ° C). Coefficient d'absorption molaire selon le p-nitrophénol 2 La solubilité du substrat est faible. Lors de la préparation, réglez-le sur une pâte avec une quantité appropriée de tampon pH 4,6, puis ajoutez progressivement le tampon à la quantité requise. 3 Lorsque les résultats de mesure se situent dans la plage ultra-linéaire, il convient de diluer l'échantillon avec du sérum physiologique, de le tester à nouveau et de le multiplier par le facteur de dilution. 4 La concentration enzymatique dans l'urine est fortement influencée par le volume urinaire. Le volume urinaire sur 24h doit être conservé. Si le taux d'excrétion de l'enzyme est calculé par le rapport NAG / g de créatinine, il n'est pas affecté par la concentration ou la dilution de l'urine et il n'est pas nécessaire de laisser 24 heures d'urine. (2) Spectrophotométrie de fluorescence: tout d'abord, diluez le sérum ou l'urine avec un tampon ne contenant pas de sérum albumine bovine (BSA), Mix, la longueur d'onde d'excitation est de 364 nm, la longueur d'onde d'émission est de 448 nm, afin d'arrêter l'ajustement du zéro liquide, et l'intensité de fluorescence du tube 4-MU à 6 μmol / L est ajustée à 100, et l'intensité de fluorescence du tube à blanc et du tube de mesure est respectivement mesurée. 1 La méthode de fluorescence pour mesurer le NAG consiste en un kit domestique très sensible qui n’est pas affecté par l’urine. 2 Il peut également être utilisé avec l’usine d’instruments analytiques Shanghai No.3 pour produire un photomètre à fluorescence 930, un filtre d’excitation 360 et un composite de filtre à émission (400 + 450), avec des résultats satisfaisants. 3 La concentration de chaque composant dans la solution de réaction enzymatique est la suivante: 1,33 mmol / L de substrat, 20 mmol / L d’acide citrique et 432 mmol / L de Na2HPO. 4 Les solvants utilisés dans les réactifs doivent être de l'eau distillée, le substrat doit être exempt de 4-MU, la BSA doit être exempte de l'enzyme ou chauffée à 50 ° C pendant 2h. 5 NAG dans le sérum est stable pendant plusieurs heures à plusieurs jours à 4 ° C et stable pendant plusieurs mois à -20 ° C. Le spécimen d'urine était stable à 4 ° C pendant une semaine et un plasma anticoagulé au citrate était également utilisé. Le 6β-N-acétylglucosaminide peut être catalysé par deux enzymes, l'une est la β-N-acétylglucosaminidase (EC 3.2.1.30) et l'autre, la β-N-acétylglucosidase (EC3). .2.1.52) Seuls les EC3.2.1.30 ou EC3.2.1.52 peuvent être définis pour les enzymes purifiées. Le NAG, auquel il est souvent fait référence dans la littérature nationale, porte strictement le nom du substrat utilisé, plutôt que la spécificité de l’enzyme pour le substrat. Par conséquent, la littérature étrangère actuelle est souvent appelée β-N-acétylglucosaminidase.