chylomicrons

Les chylomicrons sont les plus grosses particules de lipoprotéines dans le plasma humain et la CM est la majorité des TG alimentaires livrés du site d'absorption de l'intestin grêle à la circulation systémique. La vitesse de libération du CM est rapide, sa demi-vie est de 10 minutes et la personne normale ne peut pas la détecter au bout de 12 heures de jeûne.Lorsque la lipoprotéine est électrophorée, le CM est à l’origine. Il convient de noter que l’échantillon doit être frais lors de l’électrophorèse des lipoprotéines sériques et ne doit pas être conservé à l’état congelé. Informations de base Classification de spécialiste: Classification de l'examen digestif: examen sanguin Sexe applicable: si les hommes et les femmes appliquent le jeûne: le jeûne Résultats d'analyse: En dessous de la normale: Valeur normale: Non Au-dessus de la normale: Négatif: Normal Positif: Hyperlipoprotéinémie de type I, hyperlipoprotéinémie de type V. Conseils: Avant l'examen, le régime est léger et l'alcool est interdit. Valeur normale Négatif. Signification clinique Hyperlipoprotéinémie positive de type I, hyperlipoprotéinémie de type V. Des résultats positifs peuvent être des maladies: hyperlipoprotéinémie de type I, hyperlipoprotéinémie de type V, précautions 1. Méthode de turbidité immunoturbidimétrique: (1) Concernant l’antisérum: L’analyse turbidimétrique a des exigences plus élevées en antisérum que d’autres méthodes. Le procédé turbidimétrique est de préférence un anticorps polyclonal. L'antisérum doit être exempt d'antisérum. Il faut prêter une grande attention à l’apoA-I extraite du sérum humain pour obtenir une immunopureté, une pureté chromatographique et une pureté par électrophorèse, ce qui n’est pas possible en laboratoire. Le titre de l'antisérum (titre) ne doit pas être inférieur à 16. À l’heure actuelle, dans certains réactifs du marché national, l’antisérum apoA-I a un titre très bas; il faut donc faire très attention lors de l’achat du kit. Si vous n'avez pas d'expérience dans l'identification de la qualité des antisérums avant l'achat, vous devez demander à l'unité qualifiée de l'identifier. (2) Le spécimen de la méthode supérieure (sérum) est dilué 200 fois pour une opération manuelle (100 μl d’échantillon) et s’il s’agit d’un échantillonneur de précision, il peut être dilué 20 fois (avec 10 μl). Afin de s'adapter aux conditions de différents laboratoires (tels que différents types d'instruments automatisés), il convient de prendre en compte la proportion d'antigène-anticorps lors de toute modification appropriée. Il convient de noter qu'il ne doit pas y avoir d'excès d'antigène dans le système réactionnel et que la limite supérieure linéaire ne doit pas être inférieure à 2,5 g / L. En d'autres termes, la quantité d'antisérum doit être suffisante, sinon les résultats sont faibles lorsque l'apoA-I est élevé dans l'échantillon. À l’heure actuelle, certains kits médicamenteux nationaux ont non seulement un titre antisérum faible, mais le dosage des échantillons dans l’opération est trop important (comme 3 à 5 µl), l’anticorps est manifestement insuffisant et les résultats mesurés sont inévitablement inexacts. (3) Pour obtenir une mesure précise, les résultats du calcul de la courbe d'étalonnage doivent être réalisés dans les mesures turbidimétriques apoA-I et B (méthode du point final). Une certaine plage (faible dose d’échantillon) de concentration (X) est fondamentalement linéaire avec une turbidité (Y), et la régression linéaire calcule une certaine intersection sur l’axe des Y (valeur A <0,1), de sorte que l’écart du résultat du calcul est calculé par étalonnage en un point. Plus gros, les résultats mesurés ne peuvent pas refléter avec précision le niveau de haut (haut bas, bas haut). Ne négligez pas la précision de la mesure en raison de la simplicité de la méthode du point unique. Quel que soit le type d'instrument automatisé, vous devez d'abord essayer la courbe d'étalonnage. Si le test est répété dans les conditions de l'instrument et dans les conditions spécifiques, l'interception de la droite de régression n'est pas évidente, alors la méthode d'étalonnage en un point peut être utilisée. Lorsque la quantité d'échantillon est comprise entre 3 et 5 µl, même si la quantité d'antisérum est augmentée, la concentration et la turbidité ne sont pas linéaires et ne peuvent être calculées qu'une fois la courbe convertie de manière linéaire. (4) Le principal facteur d'interférence est la turbidité du sérum lui-même (tel qu'un sérum riche en graisses), et les méthodes de prétraitement telles que l'ultracentrifugation ou l'hydrolyse de la lipase ne sont pas pratiques. L'effet de la turbidité avec les tensioactifs étant également limité, un tube vierge doit être créé dans le test. En plus de la méthode en deux points utilisée dans l'analyse automatisée, c'est une erreur d'utiliser manuellement un seul réactif sans soustraire le blanc de l'échantillon. Afin de réduire l'effet des effets de matrice sur la réponse à la turbidité, le sérum à valeur fixe doit être utilisé comme étalonneur. De plus, les interférences telles que les particules de poussière et les égratignures dans la plaque doivent être exclues. (5) Certains kits commerciaux (y compris certains produits importés) ont des valeurs de sérum d’étalonnage inexactes, qui sont des sources d’erreur importantes. 2. électrophorèse Rocket: (1) Le choix du facteur de dilution de l'antigène et de la quantité d'antisérum doit être clair, la pente de la courbe d'étalonnage est modérée et la courbe d'alignement est appropriée. La méthode mesure simultanément apoA-I et apoB, et la quantité des deux antisérums doit être ajustée de manière à ce que leurs hauteurs maximales soient différentes et que la hauteur maximale des apoB ne soit pas inférieure à 1 cm. (2) Antisérums provenant de différents types de sources (tels que le lapin et le mouton), testés à un prix équivalent, les résultats seront différents. Le test apoA-I est de préférence un antisérum de lapin. Lorsque le sérum de lapin est utilisé, la forme du pic est nette et le pic produit par le sérum de mouton est épais, la pointe du pic est ronde et émoussée, et parfois une image fantôme apparaît avant le pic. La pente de la courbe d'étalonnage pour le sérum d'étalonnage est également différente. Cependant, quel que soit l'antisérum utilisé, les résultats quantitatifs ne sont pas très différents. (3) L'électrophorèse dans certaines conditions, la hauteur de pic du sérum d'étalonnage de différentes dilutions ne changera pas de manière significative, et la pente de la courbe d'étalonnage est fondamentalement la même. Si la hauteur maximale de l'échantillon dépasse la plage de la courbe d'étalonnage, le facteur de dilution de l'échantillon doit être ajusté et testé à nouveau. Le CV inter-conseils est généralement inférieur à 5%. (4) Les résultats de l'électrophorèse sur fusée peuvent être observés par coloration ou observation visuelle directe du sommet de la fusée. Le premier utilise moins de spécimens et enregistre l'antisérum, mais si les spécimens et l'antisérum sont augmentés de manière appropriée, il est plus pratique de ne pas tacher. L'agarose utilisé doit être standard, électroosmotique ou hypotonique, car l'ajout d'une quantité appropriée de dextrane ou de polyéthylène glycol au gel clarifiera le pic de la fusée. (5) La mesure du pic de la fusée permet de calculer la surface ou la hauteur du pic, et la surface correspond à la hauteur du pic multipliée par la largeur du pic (la largeur à mi-hauteur du pic). La précision de la mesure va de préférence jusqu'à 0,1 mm. Un équipement d'amplification mécanique ou électronique doit être utilisé. La hauteur du pic dans la plage de la courbe standard est de préférence de 1 à 4 cm. (6) La présente loi s’applique à l’analyse d’un petit nombre de spécimens. Convient également pour la détermination de apoAII, CI, CII, CIII, D, E et Lp (a). Processus d'inspection 1. Méthode de turbidité immunoturbidimétrique: (1) Le spécimen doit être un sérum à séparation rapide, séparable dans le temps, au réfrigérateur à une température comprise entre 2 et 6 ° C, mesuré en une semaine et à -20 ° C pendant six mois. (2) Lors de l'utilisation d'un analyseur entièrement automatique, le rapport antigène / anticorps et le temps de réaction doivent être raisonnablement choisis en fonction de différents paramètres de conception de l'instrument. Il peut également être utilisé comme néphélométrie à diffusion de débit, telle que le système de turbidimètre Beckman de Beckman ou le système de protéagrographie). (3) Instruments utilisés dans la méthode manuelle: photomètre de précision avec filtre (ou séparateur) de 340 nm, le volume de l'échantillon est de préférence de 0,5 ml (pour préserver l'antisérum), de préférence avec la coupe à circulation, la dilution de l'échantillon est optimale Échantillonneur corrigé. (4) Traitement de l’échantillon: l’échantillon de sérum et le sérum de contrôle de qualité sont dilués au 1: 200 avec un diluant pour échantillon, c’est-à-dire dilués d’abord à 1:20 (5,0 μl de sérum + 95 μl de diluant), puis dilués à 1/10. Sérum en excès 1:20 pour la détermination de l'apoB). Après mélange, on a laissé reposer à 25 à 37 ° C pendant 30 min et était trouble à une longueur d'onde de 340 nm Le résultat a été lu sur une courbe standard selon la valeur A de U-UB. Cette méthode a un CV de <5%. (5) Courbe d'étalonnage: pour chaque lot d'opération manuelle et semi-automatique, une courbe d'étalonnage est requise et le sérum d'étalonnage peut être dilué en quatre concentrations de 1: 100, 1: 200, 1: 300 et 1: 400, identiques à celles de l'échantillon. Opération, calculez la concentration en CM de chaque tube étalon en fonction de la valeur fixée et tracez la concentration (X) avec la valeur A correspondante (Y) (calculée par régression linéaire), qui est fondamentalement droite, mais présente une certaine intersection sur l’axe des Y. Donc, vous ne pouvez pas utiliser une norme de point unique. Lorsque l'opération est précise, le coefficient de corrélation entre la concentration et la valeur A doit être supérieur à 0,985. S'il y a trois sérums d'étalonnage à haute, moyenne et basse concentration, il peut être utilisé de la même manière que l'échantillon et peut être utilisé pour l'étalonnage à trois points. Il peut également être utilisé pour l'étalonnage à cinq points (c'est-à-dire, mélange de sérum à concentration moyenne-élevée, moyenne et faible) Les concentrations de sérum ont été mélangées en quantités égales pour devenir les deux autres sérums d’étalonnage). La gamme linéaire de cette méthode: 0.4 ~ 2.5g / L. 2. électrophorèse Rocket: (1) plaque de versement: 10 g / L d'agarose, 10 ml par plaque, faire fondre dans un bain-marie bouillant, bien mélanger, ajouter 50 µl d'antisérum CM et un antisérum apoB 8 µl à une température comprise entre 50 et 55 ° C (la quantité dépend du titre de l'antisérum) ), mélanger rapidement et verser sur la plaque de verre préréglée sur la plate-forme à eau, refroidir et ensuite placé à 4 ° C, après 20 min, percer les trous, le trou se trouve à la cathode du bout de la plaque, le diamètre du trou est de 3 mm, la distance des trous est de 5 mm au minimum, et la capacité du trou est de 5 μl. Placez la plaque dans le réservoir d'électrophorèse et pontez avec du papier filtre. (2) Dilution de l'antigène: Le sérum d'étalonnage a été dilué à 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 et 1: 400 (pour la courbe d'étalonnage) avec une solution de 0,15 mol / L de NaCl, et l'échantillon de sérum était de 1: Dilué dans 200, placez le réfrigérateur à 4 ° C pendant au plus 3 jours. (3) Chargement: 5 µl (exact) du sérum dilué et des échantillons ont été prélevés à faible intensité de courant (10 mA / plaque) et ajoutés au puits d'échantillon de gel d'agarose. Chaque conseil doit établir une série de normes. (4) Mise sous tension: débit constant 24 mA / plaque, tension terminale 6 ~ 8V / cm, refroidissement à l'eau courante pour maintenir l'agarose à 15 ° C, électrophorèse 3 ~ 4h. (5) Déprotéinisation et film sec: La plaque d'agarose après électrophorèse a été immergée dans 0,15 mol / L de NaCl pendant 30 min, et le film a été placé sur le film de polyester et séché à une légère pression sur un papier filtre multicouche. L'humidité dans la colle est ensuite séchée naturellement avec le papier filtre, le film et le film de polyester, ou bien séchée à l'aide d'un souffleur à air chaud. Après séchage, le film est naturellement séparé du papier filtre et du film de polyester. (6) Teinture: Le film d'agarose a été immergé dans la solution de coloration pendant 20 à 30 minutes. (7) Décoloration: Trempez le film coloré avec une solution décolorante jusqu'à ce que le pic de la fusée soit clair et que l’arrière-plan soit à la base incolore. Il peut être bloqué dans deux morceaux de cellophane dans de l'eau et peut être stocké longtemps après séchage. Il peut également être trempé dans l'eau courante pour éliminer le fond. Note: 1 Le taux de dilution de l'antigène et la quantité d'antisérum doivent être choisis de manière à ce que le pic de la fusée soit dégagé, la pente de la courbe d'étalonnage soit modérée et la ligne adaptée. La méthode mesure simultanément apoA-I et apoB, et la quantité des deux antisérums doit être ajustée de manière à ce que leurs hauteurs maximales soient différentes et que la hauteur maximale des apoB ne soit pas inférieure à 1 cm. 2 Différents types d'antisérums (tels que le lapin et le mouton) sont testés au prix équivalent et les résultats seront différents. Le test apoA-I est de préférence un antisérum de lapin. Lorsque le sérum de lapin est utilisé, la forme du pic est nette et le pic produit par le sérum de mouton est épais, la pointe du pic est ronde et émoussée, et parfois une image fantôme apparaît avant le pic. La pente de la courbe d'étalonnage pour le sérum d'étalonnage est également différente. Cependant, quel que soit l'antisérum utilisé, les résultats quantitatifs ne sont pas très différents. 3 Electrophorèse dans certaines conditions, la hauteur de pic du sérum d'étalonnage de différentes dilutions ne changera pas de manière significative, et la pente de la courbe d'étalonnage est fondamentalement la même. Si la hauteur maximale de l'échantillon dépasse la plage de la courbe d'étalonnage, le facteur de dilution de l'échantillon doit être ajusté et testé à nouveau. Le CV inter-conseils est généralement inférieur à 5%. 4 Les résultats de l'électrophorèse des fusées peuvent être observés par coloration ou observation visuelle directe du pic de la fusée. Le premier utilise moins de spécimens et enregistre l'antisérum, mais si les spécimens et l'antisérum sont augmentés de manière appropriée, il est plus pratique de ne pas tacher. L'agarose utilisé doit être standard, électroosmotique ou hypotonique, car l'ajout d'une quantité appropriée de dextrane ou de polyéthylène glycol au gel clarifiera le pic de la fusée. 5 La mesure du pic de la fusée permet de calculer l'aire ou la hauteur du pic. L'aire est la hauteur du pic multipliée par la largeur du pic (la largeur à mi-hauteur du pic). La précision de la mesure va de préférence jusqu'à 0,1 mm. Un équipement d'amplification mécanique ou électronique doit être utilisé. La hauteur du pic dans la plage de la courbe standard est de préférence de 1 à 4 cm. 6 Cette méthode est applicable à l'analyse d'une petite quantité de spécimens. Convient également pour la détermination de apoAII, CI, CII, CIII, D, E et Lp (a). Ne convient pas à la foule Non Effets indésirables et risques Non