Électrophorèse des protéines sériques (SPE)

Les biomolécules telles que les protéines portent une charge négative ou positive dans un tampon et se dirigent vers une anode ou une cathode dans un champ électrique, appelé électrophorèse. En raison de leurs différents points isoélectriques, de leur taille moléculaire, de leur forme et de leur rapport charge-masse, les différentes molécules de protéines ont une mobilité électrophorétique différente, et diverses protéines peuvent être séparées dans un certain support. Les techniques d'électrophorèse couramment utilisées comprennent l'électrophorèse sur membrane en acétate de cellulose, l'électrophorèse sur gel d'agarose, l'électrophorèse sur gel de Polyacrylamide et l'immunoélectrophorèse. En outre, le myélome multiple présente souvent des bandes de M globuline situées entre la région des bêta-globulines et la région des gamma-globulines; la double albuminémie présente une bande double albumine. Informations de base Classification de spécialiste: classification de contrôle de croissance et de développement: examen biochimique Sexe applicable: si les hommes et les femmes appliquent le jeûne: le jeûne Comprend les éléments suivants: β2 microglobuline sérique (β2-MG), α2-macroglobuline sérique, α1-microglobuline sérique. Conseils: à jeun, 12 heures, prise de sang veineux, échantillons prélevés sur du sang frais. Avant le test, vous devez informer le médecin des médicaments que vous avez pris récemment et des modifications physiologiques récentes. Valeur normale Cellulose acétate électrophorèse sur membrane albumine 0,61 ~ 0,71 (61% ~ 71%), α1 globuline 0,03 ~ 0,04 (3% ~ 4%), α2 globuline 0,06 ~ 0,10 (6% ~ 10%), beta globuline 0,07 à 0,11 (7% à 11%) et la gamma globuline 0,09 à 0,18 (9% à 18%). Signification clinique 1, la réduction de l'albumine se retrouve dans les cas d'hépatite chronique, de cirrhose, de cancer du foie, etc. 2, α1 globuline (glycoprotéine) accrue dans le cancer primitif du foie. Il est réduit en cas d'hépatite sévère, de cirrhose et de coma hépatique et présente une corrélation positive avec l'albumine. La détermination de la globuline α1 dans les maladies du foie a une valeur de référence pour juger de la gravité et du pronostic de l’hépatite. En général, l'augmentation de la globuline α1 indique que la maladie est bénigne et la diminution de la globuline α1 indique que la maladie est plus lourde: en cas d'insuffisance hépatique grave, la teneur en sérum peut être significativement réduite. 3. Le stade initial de l'hépatite virale α2 globuline n'a pas changé de façon significative et a augmenté progressivement au bout d'une semaine, l'hépatite subaiguë, la nécrose hépatique aiguë et la cirrhose décompensée ont été réduites. 4, la bêta-globuline a augmenté dans le foie gras, l'hyperlipidémie, le syndrome néphrotique, le diabète avec l'hypercholestérolémie, la jaunisse obstructive, les tumeurs malignes. Dans les maladies du foie liées à la cholestase, son contenu augmente, parallèlement à la hausse de l'α2 globuline. Les hépatites aiguës et chroniques, la cirrhose, en particulier la cirrhose décompensée et la cirrhose nécrotique ont diminué le plus significativement. 5, la gamma globuline a augmenté dans l'hépatite chronique, la cirrhose, les maladies du foie et de la vésicule biliaire. Une cirrhose typique peut être observée lors de la fusion des bandes β et γ pour former un pont β-γ. Les modifications de la gamma globuline chez les patients atteints d'une maladie du foie peuvent refléter la gravité de la maladie. Lorsque son état s'améliore, son contenu peut progressivement revenir à la normale et indiquer qu'il s'agit d'un problème grave, d'un pronostic sombre et d'une tendance à développer une hépatite chronique et une cirrhose. En outre, l'infection, la schistosomiase, le myélome multiple, la maladie du tissu conjonctif, etc. peuvent également être surélevés. Réduire l'incidence de carence en gamma globuline chez les patients en chimiothérapie partielle. En outre, le myélome multiple présente souvent des bandes de M globuline situées entre la région des bêta-globulines et la région des gamma-globulines; la double albuminémie présente une bande double albumine. Les maladies peuvent entraîner de faibles résultats: la jaunisse cholestatique peut entraîner des maladies: cirrhose du foie, cancer primitif du foie, myélome multiple chez les personnes âgées 1, à jeun 12 heures, test sanguin veineux, les échantillons doivent être du sang frais. 2. Avant le test, vous devez informer le médecin des médicaments que vous avez pris récemment et des modifications physiologiques récentes. 3. Une élévation physiologique peut survenir dans les cas suivants: (1) L'augmentation de l'α1-globuline peut être observée après 6 mois de gestation. (2) L'augmentation de l'α2-globuline est visible chez les nourrissons nés entre 1 et 6 mois, avec une augmentation modérée entre 4 et 6 mois de grossesse et une augmentation significative entre 7 et 9 mois. (3) Une élévation de la β-globuline est observée chez le bébé après la naissance, soit entre 4 et 6 mois de grossesse. (4) L'augmentation de la γ-globuline est observée après la vaccination par vaccination. Processus d'inspection 1. Ajoutez le tampon dans le réservoir d'électrophorèse et ajustez le tampon dans les réservoirs des deux côtés pour les placer dans le même plan. 2. Préparation du film d'acétate de cellulose: Prenez un film d'acétate de cellulose (2 cm × 8 cm) et tracez un trait horizontal avec un crayon à 1,5 cm (un côté du côté négatif) de la surface rugueuse pour faire une marque en pointillé. Après numérotation et indication des électrodes positive et négative, le film a été immergé dans la solution tampon barbiturate-barbital sodique et, après avoir été suffisamment saturé (habituellement 20 min), le tampon en excès a été éliminé en prenant en sandwich le papier filtre propre. 3. Les cheveux en film d'acétate de cellulose sont fixés au support de la cuve d'électrophorèse et redressés. Pipeter 3 ~ 5μl de sérum non hémolytique avec une micropipette et l'ajouter le long de la ligne horizontale le long de la ligne horizontale.L'échantillon doit être maintenu à une certaine distance du bord du film pour éviter toute déformation de la bande protéique dans le schéma d'électrophorèse.Lors du sérum pénètre dans le film, le film est inversé. Avec le côté de la lumière orienté vers le haut, collez-le à plat sur le support du réservoir d'électrophorèse et connectez les deux extrémités du film au tampon avec du papier filtre double couche ou quatre couches de gaze et attendez un instant. 4, allumez l'alimentation, faites attention aux électrodes positives et négatives sur le film d'acétate de cellulose, ne vous connectez pas mal. Tension 90 ~ 150V, courant 0.4 ~ 0.6mA / cm (tension différente requise électrophorèse, le courant peut être différent, doit être flexible), puissance estivale 45min, durée de mise sous tension en hiver est légèrement plus longue, environ 60min, expansion de la zone d'électrophorèse environ 25 ~ 35mm peut être. 5, teinture: Une fois l’alimentation terminée, retirez le film et immergez-vous directement dans la solution de colorant Lichunhong S ou dans la solution de coloration du noir d’amino 10B, colorez-le pendant 5 à 10 minutes (à proximité de la zone albumine), puis rincez le reste de la solution de rinçage. Teindre jusqu'à ce que le fond soit incolore. 6, quantitatif: 1 méthode colorimétrique: éponger le film rincé, couper la zone de la protéine colorée dans le tube correspondant, ajouter 0,6 ml / L d'hydroxyde de sodium 6 ml dans le tube d'albumine (calculer l'absorbance multipliée par 2), le reste Ajoutez 3 ml à chaque tube, agitez-le plusieurs fois et placez-le dans un réservoir d'eau à 37 ° C pendant 20 minutes pour lixiviation de la couleur. Coloration au noir d'amino 10B L'absorption de chaque tube a été lue à 620 nm à l'aide d'un spectrophotomètre, puis le contenu de chaque tube a été calculé (contrôle simultané du tube à blanc). Lorsque le Lichunhong S a été teint, le lixiviat a été traité avec 0,1 mol / L d'hydroxyde de sodium et la quantité était la même que ci-dessus. Après 10 minutes, ajoutez 0,6 ml d'acide acétique à 400 ml / L dans le tube d'albumine (multipliez l'absorbance par 2), puis ajoutez-en 0,3 ml dans les autres tubes pour neutraliser une partie de l'hydroxyde de sodium afin de rendre la couleur plus foncée, puis centrifuger et prélever le surnageant. L'absorbance de chaque tube a été lue à 520 nm par un spectrophotomètre (témoin à blanc simultané), puis les contenus respectifs ont été calculés. 2 Méthode de balayage au densitomètre: A. Transparent: Aspirer le liquide de rinçage sur le film (pour éviter que le liquide transparent ne soit dilué afin d’affecter le résultat transparent), plonger le film dans le liquide transparent pendant 2 à 3 minutes, puis le retirer et l’aplatir de manière lissante. Nettoyez le morceau de verre exempt de rayures (ne créez pas de bulles), réglez la diapositive pendant un moment, retirez le liquide transparent en excès, placez-le dans un four à une température constante de 90 ° C à 100 ° C, laissez cuire pendant 10 à 15 minutes, retirez et laissez refroidir À la température ambiante, les zones protéiques transparentes de cette méthode sont distinctes, le film est plat et peut être scanné directement et conservé en permanence (transparent avec de l'hydrogène naphtalène ou de la paraffine liquide. Le film rincé doit être séché et transparent, et le film transparent ne peut pas être transparent). Il dure longtemps et est sujet aux rides). B. Quantification par balayage: Le film transparent est placé dans un densitomètre entièrement automatique ou une autre boîte noire de densitomètre pour l'analyse par balayage. Ne convient pas à la foule Non Effets indésirables et risques Non