β-N-acetilglucosaminidasi

La β-N-acetilglucosaminidasi (NAG) idrolizza la β-N-acetilglucosaminide e idrolizza anche la β-N-acetilgalattosamina. L'enzima è ampiamente presente in vari tessuti, organi, fluidi corporei e cellule del sangue ed è un'idrolasi acida nei lisosomi. I metodi di misurazione sono colorimetria e fluorometria. Informazioni di base Classificazione specialistica: classificazione dell'esame urinario: esame biochimico Genere applicabile: se uomini e donne applicano il digiuno: il digiuno Risultati dell'analisi: Al di sotto del normale: Rare. Valore normale: Siero β-N-acetilglucosaminidasi: 15,14-27,94 U / L Sopra normale: I metalli pesanti della malattia tubulare renale (mercurio, piombo, cadmio, ecc.) E danni renali indotti da farmaci, ischemia, ipossia, perdita di sangue, shock, ecc. Possono causare un aumento dell'attività dei NAG. negativo: positivo: Suggerimenti: in base allo stato nutrizionale di tutto il corpo, durante il pasto vengono forniti latte, uova, frutta, latte di soia, ecc. Valore normale 1, metodo colorimetrico p-nitrofenolo: NAG sierico 21,54 ± 6,4 U / L, il NAG urinario è normalmente distribuito, la mediana è 9,13 U / g creatinina, il limite superiore del 95 ° percentile è 16,10 U / g creatinina. 2. Metodo di fluorescenza: Siero per adulti: 9,94 ± 2.O7U / L. Urina adulta: 6,39 ± 3,19 U / LCre. Significato clinico La determinazione dell'attività del NAG nel sangue e nelle urine è sensibile ai cambiamenti delle lesioni parenchimali renali, in particolare le lesioni acute e le malattie attive, ed è principalmente utilizzata per il monitoraggio precoce delle lesioni renali e l'osservazione della malattia. 1, i metalli pesanti della malattia tubulare renale (mercurio, piombo, cadmio, ecc.) E danni renali indotti da farmaci, ischemia, ipossia, perdita di sangue, shock, ecc. Possono causare un aumento dell'attività dei NAG. 2, la sindrome nefrosica NAG urinario spesso è aumentata in modo significativo, il periodo di remissione è diminuito, il recupero rapido in caso di recidiva, può essere utilizzato come indicazione per l'osservazione clinica. La fase acuta della glomerulonefrite varia notevolmente, ma il cambiamento è inferiore a quello della lesione tubulare renale. 3, la posizione della diagnosi di infezione del tratto urinario di aumento NAG urinario di pielonefrite acuta e cronica, può essere distinta dalla semplice cistite. Può essere utilizzato per la diagnosi delle infezioni precoci del tratto urinario superiore. 4, il rigetto del trapianto renale monitorando il rigetto del trapianto renale precoce NAG può essere aumentato, più sensibile delle proteine ​​delle urine, della creatinina sierica, della clearance della creatinina. 5, diagnosi precoce di nefropatia diabetica, nefropatia diabetica, NAG urinario elevato, diagnosi precoce di questa malattia è migliore dell'albumina urinaria e della β2-microglobulina. Alti risultati possono essere malattie: sindrome nefrosica, infezioni del tratto urinario (1) metodo colorimetrico del p-nitrofenolo: 1 Il substrato p-nitrofenolo deve essere purificato e preformato a 50 ° C per 24 ore. La concentrazione è stata regolata a 0,04 mmol / L con 10 mmol / L NaOH e la curva di assorbimento è stata scansionata con uno spettrofotometro a larghezza di banda stretta, λmax = 401 nm, secondo lo standard IFCC, Aλmax = 0,7316 a 0,7388 e Eλmax = 18380 ± 90 (25 ° C). 2 La solubilità del substrato è piccola: durante la preparazione, dovrebbe essere regolato su una pasta con una quantità appropriata di tampone pH 4.6, quindi aggiungere gradualmente il tampone alla quantità richiesta. 3 Quando i risultati della misurazione sono nell'intervallo ultra-lineare, il campione deve essere diluito con soluzione fisiologica e testato nuovamente, il risultato viene moltiplicato per il fattore di diluizione. 4 La concentrazione degli enzimi urinari è fortemente influenzata dal volume delle urine, il volume delle urine nelle 24 ore deve essere mantenuto. Se il tasso di escrezione dell'enzima è calcolato dal rapporto NAG / g di creatinina, cioè non è influenzato dalla concentrazione o dalla diluizione dell'urina e non è necessario lasciare 24 ore di urina. (2) Metodo di fluorescenza: 1 Il metodo di fluorescenza per misurare NAG ha un kit domestico, che ha un'alta sensibilità e non è influenzato dall'urina. 2 Può anche essere utilizzato con la Shanghai No.3 Analytical Instrument Factory per produrre 930 fotometro a fluorescenza, filtro di eccitazione 360 ​​e composito con filtro di emissione (400 + 450), con risultati soddisfacenti. 3 La concentrazione di ciascun componente nella soluzione di reazione enzimatica è: 1,33 mmol / L di substrato, 20 mmol / L di acido citrico e 432 mmol / L di Na2HPO. 4 I solventi utilizzati nei reagenti devono essere acqua distillata, il substrato deve essere privo di 4 MU, la BSA deve essere priva dell'enzima o riscaldata a 50 ° C per 2 ore. 5 NAG nel siero è stabile per diverse ore a diversi giorni a 4 ° C e stabile per diversi mesi a -20 ° C. Il campione di urina è stato stabile a 4 ° C per 1 settimana e è stato utilizzato anche plasma anticoagulato con citrato. La 6β-N-acetilglucosaminide può essere catalizzata da due enzimi, uno è la β-N-acetilglucosaminidasi (EC 3.2.1.30) e l'altro è la β-N-acetilglucosidasi (EC3) .2.1.52) Per gli enzimi purificati è possibile definire solo EC3.2.1.30 o EC3.2.1.52. Il NAG, a cui si fa spesso riferimento nella letteratura domestica, prende il nome rigorosamente dal substrato utilizzato, piuttosto che dalla specificità dell'enzima per il substrato. Pertanto, l'attuale letteratura straniera viene spesso definita β-N-acetilglucosaminidasi. Processo di ispezione (1) miscelazione colorimetrica del p-nitrofenolo, a lunghezza d'onda di 405 nm, percorso ottico di 1 cm, acqua distillata zero, leggere l'assorbanza di ciascun tubo e controllare la curva standard con la differenza di (AU-AC). 1 Il substrato p-nitrofenolo deve essere purificato e preformato a 50 ° C per 24 ore. La concentrazione è stata regolata a 0,04 mmol / L con 10 mmol / L NaOH e la curva di assorbimento è stata scansionata con uno spettrofotometro a larghezza di banda stretta, λmax = 401 nm, secondo lo standard IFCC, Aλmax = 0,7316 a 0,7388 e Eλmax = 18380 ± 90 (25 ° C). Coefficiente di assorbimento molare secondo p-nitrofenolo 2 La solubilità del substrato è piccola: durante la preparazione, dovrebbe essere regolato su una pasta con una quantità appropriata di tampone pH 4.6, quindi aggiungere gradualmente il tampone alla quantità richiesta. 3 Quando i risultati della misurazione sono nell'intervallo ultra-lineare, il campione deve essere diluito con soluzione fisiologica e testato nuovamente, il risultato viene moltiplicato per il fattore di diluizione. 4 La concentrazione degli enzimi urinari è fortemente influenzata dal volume delle urine, il volume delle urine nelle 24 ore deve essere mantenuto. Se il tasso di escrezione dell'enzima viene calcolato dal rapporto NAG / g di creatinina, cioè non è influenzato dalla concentrazione o dalla diluizione dell'urina e non è necessario lasciare 24 ore di urina. (2) spettrofotometria a fluorescenza: diluire innanzitutto siero o urina con un tampone che non contiene albumina sierica bovina (BSA), Miscelare, la lunghezza d'onda di eccitazione è 364 nm, la lunghezza d'onda di emissione è 448 nm, per fermare la regolazione dello zero liquido e l'intensità della fluorescenza del tubo 6 μmol / L 4-MU è regolata su 100, e rispettivamente l'intensità di fluorescenza del tubo bianco e del tubo di misurazione. 1 Il metodo di fluorescenza per misurare NAG ha un kit domestico, che ha un'alta sensibilità e non è influenzato dall'urina. 2 Può anche essere utilizzato con la Shanghai No.3 Analytical Instrument Factory per produrre 930 fotometro a fluorescenza, filtro di eccitazione 360 ​​e composito con filtro di emissione (400 + 450), con risultati soddisfacenti. 3 La concentrazione di ciascun componente nella soluzione di reazione enzimatica è: 1,33 mmol / L di substrato, 20 mmol / L di acido citrico e 432 mmol / L di Na2HPO. 4 I solventi utilizzati nei reagenti devono essere acqua distillata, il substrato deve essere privo di 4 MU, la BSA deve essere priva dell'enzima o riscaldata a 50 ° C per 2 ore. 5 NAG nel siero è stabile per diverse ore a diversi giorni a 4 ° C e stabile per diversi mesi a -20 ° C. Il campione di urina è stato stabile a 4 ° C per 1 settimana e è stato utilizzato anche plasma anticoagulato con citrato. La 6β-N-acetilglucosaminide può essere catalizzata da due enzimi, uno è la β-N-acetilglucosaminidasi (EC 3.2.1.30) e l'altro è la β-N-acetilglucosidasi (EC3) .2.1.52) Per gli enzimi purificati è possibile definire solo EC3.2.1.30 o EC3.2.1.52. Il NAG, a cui si fa spesso riferimento nella letteratura domestica, prende il nome rigorosamente dal substrato utilizzato, piuttosto che dalla specificità dell'enzima per il substrato. Pertanto, l'attuale letteratura straniera viene spesso definita β-N-acetilglucosaminidasi.