Elettroforesi delle proteine ​​sieriche (SPE)

Le biomolecole come le proteine ​​trasportano una carica negativa o positiva in un buffer e si spostano verso un anodo o un catodo in un campo elettrico, che si chiama elettroforesi. A causa dei loro diversi punti isoelettrici, delle diverse dimensioni molecolari, forma e rapporto carica-massa, diverse molecole proteiche hanno diversa mobilità elettroforetica e varie proteine ​​possono essere separate in un certo mezzo di supporto. Le tecniche di elettroforesi comunemente usate includono l'elettroforesi su membrana di acetato di cellulosa, l'elettroforesi su gel di agarosio, l'elettroforesi su gel di poliacrilammide e l'immunoelettroforesi. Inoltre, il mieloma multiplo presenta spesso bande di globulina M tra la regione della beta globulina e la regione della gamma globulina; la doppia albuminemia mostra una doppia banda di albumina. Informazioni di base Classificazione specialistica: classificazione del controllo di crescita e sviluppo: esame biochimico Genere applicabile: se uomini e donne applicano il digiuno: il digiuno Compresi articoli: siero β2 microglobulina (β2-MG), siero α2-macroglobulina, siero α1-microglobulina Suggerimenti: digiuno 12 ore, analisi del sangue venoso, i campioni devono essere di sangue fresco. Prima del test, è necessario informare il medico in merito ai farmaci assunti di recente e ai recenti cambiamenti fisiologici. Valore normale Albumina di elettroforesi su membrana di acetato di cellulosa 0,61 ~ 0,71 (61% ~ 71%), α1 globulina 0,03 ~ 0,04 (3% ~ 4%), α2 globulina 0,06 ~ 0,10 (6% ~ 10%), beta globulina Da 0,07 a 0,11 (dal 7% all'11%) e gamma globuline da 0,09 a 0,18 (dal 9% al 18%). Significato clinico 1, la riduzione dell'albumina si trova nell'epatite cronica, nella cirrosi, nel cancro al fegato e così via. 2, α1 globulina (glicoproteina) aumentata nel carcinoma epatico primario. È ridotto in epatite grave, cirrosi e coma epatico ed è correlato positivamente con l'albumina. La determinazione dell'α1 globulina nelle malattie del fegato ha un valore di riferimento per giudicare la gravità e la prognosi dell'epatite. In generale, l'aumento di α1 globulina indica che la condizione è lieve e la diminuzione di α1 globulina indica che la condizione è più pesante.In caso di insufficienza epatica grave, il contenuto sierico può essere significativamente ridotto. 3. Non ci sono stati cambiamenti significativi nella fase iniziale dell'epatite virale α2-globulina e sono gradualmente aumentati dopo una settimana, riducendo l'epatite subacuta, la necrosi epatica acuta e la cirrosi scompensata. 4, beta globulina aumentata nel fegato grasso, iperlipidemia, sindrome nefrosica, diabete con ipercolesterolemia, ittero ostruttivo, tumori maligni. Nella malattia del fegato da colestasi, il suo contenuto è aumentato, parallelamente all'aumento della α2 globulina. Ridotta in modo significativo l'epatite acuta e cronica, la cirrosi, in particolare la cirrosi scompensata e la cirrosi necrotica. 5, la gamma globulina è aumentata nell'epatite cronica, nella cirrosi, nella malattia del fegato e della cistifellea. La cirrosi tipica può essere vista nella fusione delle bande β e γ per formare un ponte β-γ. I cambiamenti nella gamma globulina nei pazienti con malattia epatica possono riflettere la gravità della condizione. Man mano che la condizione migliora, il suo contenuto può gradualmente ridursi alla normalità: se continua a scendere ad un livello elevato, indica che la condizione è grave, la prognosi è scarsa e c'è una tendenza a sviluppare epatite cronica e cirrosi. Inoltre, possono essere elevati anche l'infezione, la schistosomiasi, il mieloma multiplo, la malattia del tessuto connettivo, ecc. Ridurre l'incidenza del deficit di gamma globulina, pazienti chemioterapici parziali. Inoltre, il mieloma multiplo presenta spesso bande di globulina M tra la regione della beta globulina e la regione della gamma globulina; la doppia albuminemia mostra una doppia banda di albumina. Bassi risultati possono essere malattie: alti risultati di ittero colestatico possono essere malattie: cirrosi epatica, carcinoma epatico primario, mieloma multiplo negli anziani 1, digiuno 12 ore, analisi del sangue venoso, i campioni devono essere sangue fresco. 2. Prima del test, è necessario informare il medico in merito ai farmaci assunti di recente e ai recenti cambiamenti fisiologici. 3. L'elevazione fisiologica può verificarsi nei seguenti casi: (1) L'aumento dell'α1-globulina può essere visto dopo 6 mesi di gestazione. (2) L'aumento dell'α2-globulina può essere osservato nei neonati nati da 1 a 6 mesi, con un moderato aumento da 4 a 6 mesi di gravidanza e un aumento significativo da 7 a 9 mesi. (3) L'elevazione della β-globulina è osservata nel bambino dopo la nascita, da 4 a 6 mesi di gravidanza. (4) L'aumento della γ-globulina si osserva dopo il vaccino per vaccinazione immunitaria. Processo di ispezione 1. Aggiungere il tampone al serbatoio di elettroforesi e regolare il tampone nei serbatoi su entrambi i lati per renderli sullo stesso piano. 2. Preparazione del film di acetato di cellulosa: prendere un film di acetato di cellulosa (2 cm × 8 cm) e tracciare una linea orizzontale con una matita a 1,5 cm (un lato del lato negativo) della superficie ruvida per lasciare un segno punteggiato. Dopo aver numerato e indicato gli elettrodi positivi e negativi, il film è stato immerso nella soluzione tampone di sodio barbiturico-barbitale e dopo essere stato sufficientemente saturo (di solito 20 minuti), il tampone in eccesso è stato rimosso inserendo la carta da filtro pulita. 3. I peli di pellicola di acetato di cellulosa sono fissati al supporto del serbatoio per elettroforesi e stirati. Pipettare 3 ~ 5μl di siero non emolitico con una micropipetta e aggiungerlo lungo la linea orizzontale sulla linea orizzontale. Il campione deve essere tenuto ad una certa distanza dal bordo del film per evitare la deformazione della banda proteica nel modello di elettroforesi. Dopo che il siero penetra nel film, il film viene invertito. Con il lato chiaro rivolto verso l'alto, appiattilo sulla staffa del serbatoio dell'elettroforesi e collega le due estremità del film al tampone con carta da filtro a doppio strato o quattro strati di garza e attendi qualche istante. 4, accendere l'alimentazione, prestare attenzione agli elettrodi positivi e negativi sul film di acetato di cellulosa, non collegare in modo errato. Tensione 90 ~ 150 v, corrente 0,4 ~ 0,6 mA / cm (diversa tensione richiesta per elettroforesi, la corrente può essere diversa, dovrebbe essere flessibile), potenza estiva 45 minuti, tempo di accensione invernale leggermente più lungo, circa 60 minuti, espansione della zona di elettroforesi circa 25 ~ 35mm può essere. 5, colorazione: dopo aver completato l'alimentazione, rimuovere il film e immergere direttamente nella soluzione di colorante Lichunhong S o nella soluzione di colorazione 10B di aminoacidi, colorare per 5-10 minuti (dalla zona dell'albumina), quindi sciacquare il resto nella soluzione di risciacquo. Tingi fino a quando lo sfondo è incolore. 6, quantitativo: 1 metodo colorimetrico: asciugare il film risciacquato, tagliare l'area della proteina tinta nella provetta corrispondente, aggiungere 0,6 ml / L di idrossido di sodio 6 ml nella provetta di albumina (calcolare l'assorbanza moltiplicata per 2), il resto Aggiungi 3 ml a ogni provetta, agitalo più volte e posizionalo in un serbatoio d'acqua a 37 ° C per 20 minuti per rendere lisciante il colore. Colorazione Amino Black 10B L'assorbanza di ciascuna provetta è stata letta a 620 nm usando uno spettrofotometro, quindi sono stati calcolati i contenuti di ciascuna provetta (controllo simultaneo delle provette vuote). Quando il Lichunhong S è stato tinto, il percolato è stato trattato con 0,1 mol / L di idrossido di sodio e la quantità era la stessa di cui sopra. Dopo 10 minuti, aggiungere 0,6 ml di acido acetico 400 ml / L alla provetta di albumina (moltiplicare l'assorbanza per 2) e aggiungere 0,3 ml alle altre provette per neutralizzare parte dell'idrossido di sodio per rendere il colore più profondo. Se necessario, centrifugare e prendere il surnatante. L'assorbanza di ciascuna provetta è stata letta a 520 nm da uno spettrofotometro (controllo in bianco simultaneo), quindi sono stati calcolati i rispettivi contenuti. 2 Metodo di scansione del densitometro: A. Trasparente: aspirare il liquido di risciacquo sul film (per evitare che il liquido trasparente venga diluito per influire sul risultato trasparente), immergere il film nel liquido trasparente per 2-3 minuti, quindi estrarlo e appiattirlo in modo rotolante. Pulire il pezzo di vetro privo di graffi (non creare bolle), posizionare il vetrino per un po ', rimuovere il liquido trasparente in eccesso, metterlo in un forno a una temperatura costante da 90 ° C a 100 ° C, infornare per 10-15 minuti, rimuovere e raffreddare per A temperatura ambiente, le aree proteiche trasparenti con questo metodo sono distinte, il film è piatto e può essere scansionato direttamente e permanentemente conservato (trasparente con idrogeno naftalene o paraffina liquida. Il film sciacquato deve essere essiccato e trasparente e il film trasparente non può essere trasparente) Dura a lungo ed è incline alle rughe). B. Quantificazione della scansione: la pellicola trasparente viene posizionata in un densitometro completamente automatico o in un'altra scatola scura di densitometro per l'analisi della scansione. Non adatto alla folla Nessuno. Reazioni e rischi avversi Nessuno.