Marcatori di superficie dei linfociti B

Il test della funzione immunitaria umorale è un tipo di test in cui il laboratorio valuta la funzione immunitaria individuale umorale. Il rilevamento della funzione immunitaria umorale si basa sui processi di base dell'immunità umorale, tra cui il rilevamento dei linfociti B, il rilevamento di Ig e il rilevamento delle funzioni di produzione di anticorpi. Informazioni di base Classificazione degli specialisti: classificazione dei controlli di crescita e sviluppo: esame immunologico Genere applicabile: se uomini e donne applicano il digiuno: non il digiuno Suggerimenti: se il campione non può essere osservato durante il giorno, le cellule verranno sospese nella soluzione di conservazione dell'anticorpo fluorescente, conservate a 4 ° C e conteggiate il giorno successivo. Valore normale L'IgM media era dell'11,2 ± 6,0%; l'IgG media era del 7,5 ± 3,3%. Significato clinico La diminuzione del numero di cellule B è correlata alla deficienza immunitaria umorale e l'aumento del numero di cellule B è correlato alla proliferazione maligna delle cellule B. precauzioni (1) La presenza di IgG agglomerate nel reagente anticorpale fluorescente e le IgG agglomerate possono essere legate in modo falso-positivo al recettore Fc sulla superficie della cellula B. Pertanto, al fine di evitare l'agglomerazione di IgG, è necessario prestare attenzione a: 1 Gli anticorpi fluorescenti con un rapporto molare F / P eccessivo non possono essere utilizzati e generalmente sono preferiti da 1 a 3. 2 Gli anticorpi fluorescenti contenenti proteine ​​a bassa concentrazione sono instabili a bassa temperatura e non devono essere inferiori a 2 mg / ml. 3 Gli anticorpi fluorescenti conservati a bassa temperatura non devono essere scongelati ripetutamente e centrifugati per 30 minuti a 150.000 giri / min prima dell'uso per rimuovere gli aggregati. (2) Quando si usano linfociti viventi per la colorazione di immunofluorescenza, NaN3 viene aggiunto a tutti i reagenti (anticorpo marcato, soluzione di Hank, ecc.) Per limitare la fluidità della membrana cellulare. Altrimenti, si verificheranno fluorescenza e fagocitosi a forma di cap e il numero effettivo di cellule fluorescenti diminuirà. (3) Se colorato con un anticorpo fluorescente anti-IgG, il complesso immunitario antigene-anticorpo (tipo IgG) contenuto nel campione si lega al recettore Fc sulla superficie della cellula B ed è fluorescente positivo. Per questo motivo, è stato suggerito di colorare con anticorpo anti-F (ab) 2 marcato in modo fluorescente per escludere la colorazione dei recettori Fc. Negli ultimi anni, a causa dell'avvento di anticorpi monoclonali contro molecole specifiche della superficie delle cellule B (CD19, CD20, ecc.), Si è tendenzialmente usato anticorpi monoclonali marcati con fluoresceina contro CD19 o CD20 per reagire direttamente con i linfociti del sangue periferico; Gli anticorpi monoclonali (anticorpi primari) di CD19 e CD20 vengono prima fatti reagire con i linfociti, quindi combinati con IgG anti-topo o di capra marcati con fluoresceina (secondo anticorpo), conteggiati mediante microscopia a fluorescenza o citometria a flusso per contare il sangue periferico. Linfociti B. Processo di ispezione (1) Prendi l'anticoagulante eparinico 2 ml, aggiungi una quantità uguale di liquido Hank e mescola bene Ripeti lo strato sulla soluzione stratificata, 2000r / min, centrifuga per 20 minuti. Lo strato di linfociti è stato rimosso, la soluzione di Hank è stata aggiunta, lavata 3 volte, 1200 giri / min, centrifugata per 10 minuti, la concentrazione di linfociti è stata regolata a 1 × 107 / ml e 0,1 ml sono stati dispensati in due provette. (2) Lavare nuovamente la sospensione di linfociti con la soluzione di Hank, scartare il surnatante e utilizzare la carta da filtro per rimuovere il liquido rimanente dalla parete interna della provetta e aggiungere 2 gocce di IgG anti-umano di coniglio e di anticorpo fluorescente di IgM anti-umano (circa 0,08 ml). Dopo aver agitato delicatamente, posizionare l'incubatrice a 37 ° C per 30 minuti. (3) Estrarre dall'incubatore e lavare due volte con la soluzione di Hank, centrifugare a 1000 r / min per 10 minuti, assorbire con attenzione tutto il surnatante, aggiungere 1 goccia di glicerina tamponata con PBS da 50 ml sul fondo della provetta, mescolare e prendere 1 goccia per aggiungere Sul vetrino, coprire il vetrino e osservare al microscopio a fluorescenza. Non adatto alla folla Non ci sono tabù. Reazioni e rischi avversi Nessuna complicazione o pericolo.