Saggio di trasformazione dei linfociti PHA

Il test di trasformazione dei linfociti PHA è un cambiamento morfologico e biochimico in cui i linfociti T e i mitogeni vengono co-coltivati ​​in vitro e alcuni piccoli linfociti vengono trasformati in cellule madri immature e sottoposti a mitosi. metodo. Informazioni di base Classificazione specialistica: Classificazione dell'esame oncologico: esame immunitario Genere applicabile: se uomini e donne applicano il digiuno: non il digiuno Suggerimenti: prestare attenzione a una dieta sana e mantenere un buon umore. Valore normale Conteggio dei linfociti 200, identificazione dei linfoblasti (da 2 a 4 volte più dei linfociti normali, membrana nucleare libera, placca nucleare sciolta, nucleo sottile, nucleoli evidenti, citoplasma abbondante, basofilo), di transizione Linfociti (minore variazione di volume, solo le ovvie alterazioni nucleari sopra menzionate), piccoli linfociti (leggermente più grandi dei globuli rossi, densa cromatina nucleare, nessun nucleolo), è stato conteggiato il tasso di conversione. Il normale tasso di conversione dermatologica è superiore al 58%. Significato clinico La diminuzione del tasso di trasformazione dei linfociti PHA è una risposta a una diminuzione della funzione immunitaria cellulare. Questo esame, la dermatologia viene principalmente utilizzato per la classificazione della malattia (come la lebbra), il giudizio sulla malattia (come i tumori della pelle maligni), l'osservazione dell'efficacia del farmaco e alcuni studi di immunodeficienza e malattie allergiche della pelle. Risultato anormale Vari sintomi causati dalla ridotta funzione immunitaria. La persona che necessita di un esame è sospettata di soffrire di sintomi di lebbra o malignità della pelle. precauzioni 1. La composizione del mezzo ha una grande influenza sul tasso di conversione, prestare attenzione al suo periodo effettivo. 2. Il siero di vitello deve essere inattivato prima dell'uso. 3. Durante la coltura, assicurarsi che vi sia abbastanza gas, in genere la quantità totale di liquido nel flacone di coltura da 10 ml non deve superare i 2 ml. 4. Una dose eccessiva di PHA è tossica per le cellule, troppo piccola per stimolare la trasformazione dei linfociti La dose della reazione di conversione del PHA deve essere determinata prima del test. 5. L'esperimento asettico dovrebbe essere effettuato nell'esperimento per prevenire l'inquinamento. Tabù prima del test: presta attenzione a una dieta sana e mantieni il buon umore. Requisiti per l'ispezione: collaborare attivamente con il medico. Processo di ispezione Metodo di funzionamento: 1. Prendi l'anticoagulante asettico 0.lml, aggiungi 1,8 ml di terreno di coltura cellulare, aggiungi 1000μg / m1 PHA0,1m1, provetta di controllo senza PHA, coltiva le cellule a 37 ° C, 5% CO2 per 3d, agita 1 al giorno volte. 2. Alla fine della coltura, la maggior parte del surnatante è stata scartata e sono stati aggiunti e miscelati 8,5 ml / L di NH4Cl 4 ml e collocati a bagnomaria a 37 ° C per 10 minuti. Centrifugare a 3.2500 r / min per 10 minuti, scartare il surnatante, aggiungere 5 ml di fissativo al pellet e lasciarlo riposare a temperatura ambiente per 5 minuti. Centrifugare a 4.2500 giri / min per 10 minuti, scartare il surnatante, lasciare 0,2 ml di cellule pellettizzate per la compressa e asciugare rapidamente. 5. La soluzione di tintura Giemsa viene colorata per 10-20 minuti, lavata con acqua ed essiccata. 6. Specchio d'olio Conta il numero di cellule trasformate in 200 linfociti e calcola il tasso di conversione. Il risultato è valutato: 1. Criteri morfologici dei linfoblasti: dimensione del nucleo, rapporto tra nucleo e citoplasma, colorazione del citoplasma e struttura del nucleo e presenza o assenza di nucleoli. (1) Piccoli linfociti maturi: la dimensione dei piccoli linfociti non coltivati ​​è di 6-8 μm, la colorazione nucleare è densa, nessun nucleolo, il rapporto tra nucleare e citoplasma è grande e il citoplasma è colorato da lieve basofilo. (2) Linfociti di transizione: più grandi dei piccoli linfociti, circa 10 ~ 20 μm, la colorazione nucleare è densa, ma compaiono i nucleoli, che è il punto chiave per l'identificazione dei piccoli linfociti maturi. (3) linfoblasti: il volume delle cellule aumenta, circa 20 ~ 30μm, la forma non è ordinata, spesso piccola sporgenza, allargamento nucleare, colorazione nucleare libera, ci sono 1 o 2 nucleoli, allargamento del citoplasma, spesso citoplasma Bolla vuota. (4) Altre cellule: ad esempio, dopo una coltura di neutrofili per 72 ore, la maggior parte del decadimento o della morte è frammentazione. 2. Calcolo del tasso di trasformazione dei linfociti La testa, il corpo e la coda sono stati esaminati nella classificazione precedente e sono stati contati 200 linfociti per calcolare la percentuale. I linfociti trasformati comprendono linfoblasti e linfociti di transizione e i linfociti non trasformati si riferiscono a piccoli linfociti maturi. In circostanze normali, il tasso di trasformazione dei linfociti indotto dal PHA è compreso tra il 60 e l'80% e, se è compreso tra il 50 e il 60%, è basso e quando è del 50% o inferiore, viene ridotto. Secondo i risultati, si ottiene il giudizio corretto. Non adatto alla folla Folla inappropriata: temporaneamente sconosciuta. Reazioni e rischi avversi Non ci sono complicazioni e pericoli correlati.