Saggio di coltura mista di linfociti

La coltura di linfociti misti (MLC) è un metodo di prova per determinare il grado di compatibilità tra un recettore e l'antigene principale di istocompatibilità di un donatore (antigene HLA) ed è comunemente usato per l'abbinamento dei tessuti prima del trapianto di organi. La coltura di linfociti misti è una coltura mista bidirezionale di linfociti del donatore e del ricevente, o inattivazione dei linfociti del donatore in una coltura mista, e l'estensione della risposta cellulare è negativamente correlata con il grado di compatibilità donatore-ricevente. Informazioni di base Classificazione degli specialisti: classificazione dei controlli di crescita e sviluppo: esame immunologico Genere applicabile: se uomini e donne applicano il digiuno: non il digiuno Suggerimenti: le persone con un rifiuto elevato non devono eseguire questo controllo. Valore normale Il tasso di conversione del metodo di conteggio morfologico è <10%. Il metodo di conteggio degli isotopi confronta cpm per ottenere P> 0,05. Significato clinico Risultati anormali: Nel trapianto di rene, il tasso di conversione dei donatori viventi dovrebbe essere <10%; il tasso di conversione dei donatori cadavere dovrebbe essere> 10%. La corrispondenza a bassa reazione può essere utilizzata solo nello stesso lotto di esperimenti. Un tasso di conversione dei linfociti del 10% è compatibile tra tessuti di diversi corpi. Il test di coltura mista di linfociti viene utilizzato per rilevare lo stato immunitario del paziente. Quando il numero di linfociti T viene ridotto, anche il tasso di conversione viene ridotto. Può essere utilizzato come metodo di abbinamento per il trapianto di organi e midollo osseo per selezionare un donatore adatto. Se il tasso di conversione è elevato, viene utilizzato per la differenza tra il destinatario e il destinatario. Il tasso di conversione è basso e il tasso di successo dopo il trapianto è alto. Necessità di rilevare persone: Persone con immunità compromessa o dispersa. precauzioni Al momento dell'esame: questo test può essere utilizzato come metodo per lo screening dei donatori per il trapianto di organi: quelli con un basso tasso di conversione hanno un alto tasso di successo e quelli con un alto tasso di conversione hanno un basso tasso di successo. Processo di ispezione 1. Preparazione dei linfociti del donatore: Il sangue venoso periferico fresco è stato aggiunto a una provetta da centrifuga contenente una soluzione di separazione dei linfociti con un peso specifico di 1,077 in un rapporto di 1: 1, e delicatamente applicato sulla superficie del liquido. Centrifugare a 2000 r / min per 20 minuti per assorbire lo strato intermedio dell'alone linfocita. Lavare due volte. Trypan colorazione blu, conteggio delle piastre. Regolare la densità cellulare su 2 × 109 / L, dividere in 3 provette, centrifugare separatamente e lasciare un precipitato. Aggiungere 250 μL di mitomicina in ciascuna provetta (concentrazione finale 50 mg / L) E 1,75 ml di soluzione fisiologica, bagnomaria a 37 ° C per 40 minuti e lavati due volte con soluzione fisiologica. Regolare la densità cellulare a 1 × 10 10 / L con soluzione RPMI1640 contenente 100 ml / L di siero bovino fetale. Aggiungere l'anticorpo per bloccare l'antigene. Contrassegnare come D. 2. Preparazione dei linfociti del recettore: Il sangue venoso periferico fresco è stato aggiunto a una provetta da centrifuga contenente una soluzione di separazione dei linfociti con un peso specifico di 1,077 in un rapporto di 1: 1, e delicatamente applicato sulla superficie del liquido. Centrifugare a 2000 r / min per 20 minuti per assorbire lo strato intermedio dell'alone linfocita. Lavare due volte Regolare la densità cellulare su 1 × 1010 / L con terreno RPMI1640 contenente 120 mL / L di siero bovino fetale. 3. Colture linfocitarie miste: Le R e D preparate sono state aggiunte alla piastra a 96 pozzetti come segue e coltivate in un incubatore di CO2 da 50 ml / L per 24 ore a 37 ° C. Gruppo A: R50 μL + D 50 μL; Gruppo B: R50 μL + D50 μL + IL 2 purificazione e neutralizzazione di mAb 15 μL ; Gruppo C: R50μL + IL? 2 mAb purificato e neutralizzato 15μL; Gruppo D: R50μL. Ciascun gruppo aveva 3 pozzetti duplicati e il gruppo di controllo del bianco era 100μL di terreno RPMI1640. Non adatto alla folla Non adatto a persone: persone con alto rifiuto. Reazioni e rischi avversi Non ci sono complicazioni e pericoli correlati.