Saggio di formazione di ghirlande di eritrociti di ratto

I linfociti B sono coinvolti nella sintesi di anticorpi e sono cellule effettrici delle risposte immunitarie umorali. La superficie delle cellule B trasporta immunoglobuline di superficie di membrana (SmIg), recettori Fc e recettori del complemento. Si lega fortemente alla porzione Fc del complesso antigene-anticorpo. I globuli rossi di pollo o di pecora sono selezionati e sensibilizzati in complessi EA con corrispondenti anticorpi anti-eritrociti.Il recettore Fc delle cellule B può formare una ghirlanda con EA, che si chiama ghirlanda EA. Se il complesso EA viene aggiunto al complemento e si lega al recettore del complemento delle cellule B, si forma una rosetta EAC. Ci sono recettori RBC murini sulla superficie delle cellule B, che possono legarsi ai globuli rossi del topo per formare rosette di eritrociti di topo (M-RFC), che si legano principalmente alle cellule B con recettori IgM, e le M-RFC sono per lo più cellule B ingenue. Questo test viene utilizzato principalmente per rilevare il numero di linfociti B e per determinare il livello di immunità umorale. Informazioni di base Classificazione specialistica: classificazione dell'esame: esame del sangue Genere applicabile: se uomini e donne applicano il digiuno: il digiuno Risultati dell'analisi: Al di sotto del normale: Tuttavia, la percentuale di rosette ME era ridotta o assente senza agammaglobulinemia e immunodeficienza combinata grave. Valore normale: Percentuale di ME nel sangue periferico femminile: 5% -10% Sopra normale: La percentuale di corone ME nel sangue periferico di pazienti con leucemia linfatica cronica va dal 60% all'80%. negativo: positivo: Suggerimenti: si prega di rilassarsi durante il controllo. Valore normale Risultati Sono stati conteggiati al microscopio 200 linfociti, i linfociti che hanno adsorbito 3 o più globuli rossi di topo erano linfociti B ed è stata calcolata la percentuale di ghirlande di cellule di topo (ghirlande ME). La percentuale di rosetta ME nel normale sangue periferico umano è compresa tra il 5% e il 10%. Significato clinico La percentuale di corone ME nel sangue periferico di pazienti con leucemia linfatica cronica è alta dal 60% all'80%, ma non vi è gamma globulinemia, immunodeficienza combinata grave, ecc. E la percentuale di ghirlande ME è ridotta o assente. I risultati bassi possono essere malattie: l' assenza di gammaglobulinemia legata all'X nei bambini, un'alta incidenza di immunodeficienza secondaria nei bambini può essere una malattia: precauzioni per la leucemia linfatica cronica (1) Tempo di incubazione: la percentuale di ME è aumentata gradualmente con il tempo di incubazione Dopo l'incubazione per 1 ora, la percentuale di ME è stata del 7,4 ± 3,1% e l'incubazione è stata aumentata al 18,3 ± 3,8% dopo 18 ore. Dopo 72 ore di incubazione, è stato aumentato il numero di ghirlande. È sceso gradualmente al 3,4 ± 7,1%. (2) Soluzione di coltura: è più adatto utilizzare la soluzione di coltura Tc199 e i risultati e la ripetibilità sono buoni. Il lavaggio e la risospensione dei linfociti e dei globuli rossi con terreno RPMl1640 tamponato con Hepes ha portato a cellule che tendono ad aggregarsi e a formare cellule grandi, con risultati inaffidabili. (3) Quando il rapporto ottimale tra globuli rossi e linfociti è di circa 35: 1, il rapporto è> 60: 1 o il rapporto è <25: 1, il numero di corone ME può essere ridotto. (4) Conservazione della soluzione di coltura MRBC: nella soluzione Alsever, l'MRBC conservato a 4 ° C per 1 settimana produce ancora un numero stabile di ghirlande, mentre l'MRBC immagazzinato in PBS, soluzione salina o terreno di coltura Tc199, con il tempo di conservazione prolungato, il numero di ghirlande A poco a poco, dopo 72 ore di conservazione, si possono vedere solo cellule piccole o che formano ghirlande. Processo di ispezione (1) Prendi 1 ml della sospensione di globuli rossi del topo sopra, aggiungi 3 ml di soluzione fisiologica salina, mescola bene, 1500r / min, centrifuga per 10 minuti, lava un totale di 3 volte e infine prepara l'1% di sospensione di globuli rossi del topo con soluzione fisiologica (circa 1,4 × 108 cellule / ml). (2) Sono stati prelevati 1,5 ml di eparina per anticoagulanti, i linfociti sono stati separati mediante stratificazione dei linfociti e la concentrazione cellulare è stata regolata a 2 × 10 7 / ml con una soluzione di Hank di siero al 20% di vitello. (3) Prendi 0,1 ml di sospensione di linfociti, aggiungi una quantità uguale di 1% di sospensione di globuli rossi del topo, mescola e metti in un bagno d'acqua a 37 ° C per 10 minuti, 500 giri / min, centrifuga per 10 minuti, metti il ​​frigorifero a 4 ° C per 2 ~ 3 ore. (4) Pipettare 0,05 ml di surnatante, aggiungere 1 goccia di soluzione blu 2g / L, ruotare delicatamente per miscelare, prendere 1 goccia della miscela sul vetrino, coprire il vetrino, dopo che le cellule affondano, Verificare con un microscopio ad alta potenza. Non adatto alla folla Non c'è folla inappropriata. Reazioni e rischi avversi È un controllo sicuro ed è innocuo per il corpo.