血清タンパク質電気泳動 (SPE)

タンパク質などの生体分子は、バッファー内で負または正の電荷を運び、電界内でアノードまたはカソードに向かって移動します。これは電気泳動と呼ばれます。 異なる等電点、異なる分子サイズ、形状、電荷質量比のため、異なるタンパク質分子は異なる電気泳動移動度を持ち、さまざまなタンパク質を特定の支持媒体で分離できます。 一般的に使用される電気泳動技術には、酢酸セルロース膜電気泳動、アガロースゲル電気泳動、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、および免疫電気泳動が含まれます。 さらに、多発性骨髄腫では、ベータグロブリン領域とガンマグロブリン領域の間にMグロブリンバンドが存在することが多く、ダブルアルブミン血症はダブルアルブミンバンドを示します。 基本情報 専門家分類：成長および発達チェック分類：生化学検査 該当する性別：男性と女性が断食を適用するかどうか：断食 含まれる項目：血清β2ミクログロブリン（β2-MG）、血清α2-マクログロブリン、血清α1-ミクログロブリンヒント：断食12時間、静脈血検査、検体は新鮮な血液でなければなりません。 テストの前に、最近服用した薬と最近の生理的変化について医師に知らせる必要があります。 正常値 セルロースアセテート膜電気泳動アルブミン0.61〜0.71（61％〜71％）、α1グロブリン0.03〜0.04（3％〜4％）、α2グロブリン0.06〜0.10（6％〜10％）、βグロブリン0.07から0.11（7％から11％）およびガンマグロブリン0.09から0.18（9％から18％）。 臨床的意義 1、アルブミンの減少は慢性肝炎、肝硬変、肝臓癌などに見られます。 2、原発性肝癌ではα1グロブリン（糖タンパク質）が増加しました。 重度の肝炎、肝硬変、肝性a睡で減少し、アルブミンと正の相関があります。 肝疾患におけるα1グロブリンの測定には、肝炎の重症度と予後を判断するための基準値があります。 一般に、α1グロブリンの増加は状態が軽度であることを示し、α1グロブリンの減少は状態が重度であることを示します。重度の肝不全では、血清含有量を大幅に減らすことができます。 3.α2グロブリンウイルス性肝炎の初期段階に大きな変化はなく、1週間後に徐々に増加し、亜急性肝炎、急性肝壊死、非代償性肝硬変は減少した。 4、ベータグロブリンは、脂肪肝、高脂血症、ネフローゼ症候群、高コレステロール血症を伴う糖尿病、閉塞性黄und、悪性腫瘍で増加しました。 胆汁うっ滞肝疾患では、α2グロブリンの上昇と並行して、その含有量が増加します。 急性および慢性肝炎の減少、肝硬変、特に非代償性肝硬変および壊死性肝硬変が最も顕著に減少しました。 5、ガンマグロブリンは慢性肝炎、肝硬変、肝臓、胆嚢疾患で増加しました。 典型的な肝硬変は、βバンドとγバンドの融合で見られ、β-γブリッジを形成します。 肝疾患患者のガンマグロブリンの変化は、状態の重症度を反映する可能性があります。 状態が改善されると、その内容は徐々に正常に低下する可能性があります。高レベルで低下し続ける場合、状態が深刻であり、予後が不良であり、慢性肝炎および肝硬変を発症する傾向があります。 さらに、感染症、住血吸虫症、多発性骨髄腫、結合組織病なども上昇する可能性があります。 ガンマグロブリン欠乏症、部分化学療法患者の発生率を減らします。 さらに、多発性骨髄腫では、ベータグロブリン領域とガンマグロブリン領域の間にMグロブリンバンドが存在することが多く、ダブルアルブミン血症はダブルアルブミンバンドを示します。 低い結果は病気かもしれません： 胆汁うっ滞性黄undの 高い結果は病気かもしれません： 肝硬変、原発性肝癌、高齢者の多発性骨髄腫 1、空腹時12時間、静脈血検査、検体は新鮮な血液でなければなりません。 2.テストの前に、最近服用した薬と最近の生理的変化について医師に知らせる必要があります。 3.次の場合に生理的な上昇が起こる可能性があります。 （1）妊娠6か月後にα1-グロブリンの増加が見られます。 （2）1から6か月生まれの乳児ではα2グロブリンの増加が見られ、妊娠4から6か月で中程度の増加、7から9か月での有意な増加が見られます。 （3）出生後、妊娠4〜6ヶ月の赤ちゃんにβグロブリンの上昇が見られます。 （4）γ-グロブリンの増加は、予防接種ワクチン接種後に見られます。 検査プロセス 1.緩衝液を電気泳動タンクに追加し、両側のタンクの緩衝液を調整して、それらが同じ平面になるようにします。 2.酢酸セルロースフィルムの準備：酢酸セルロースフィルム（2 cm×8 cm）を取り、粗い表面の1.5 cm（マイナス側の片側）に鉛筆で水平線を引き、点線のマークを作成します。 正と負の電極に番号を付けて表示した後、フィルムをバルビツール酸-バルビタールナトリウム緩衝液に浸し、十分に飽和させた後（通常20分）、きれいなろ紙を挟んで過剰な緩衝液を除去しました。 3.セルロースアセテートフィルムの毛を電気泳動タンクホルダーに取り付け、まっすぐにします。 マイクロピペットで3〜5μlの非溶血性血清をピペットし、水平線に沿って水平線に沿って追加します。サンプルは、電気泳動パターンのタンパク質バンドの変形を避けるために、フィルムの端から一定の距離を保ってください。明るい側を上に向けて、電気泳動タンクブラケットに平らに貼り付け、2層のろ紙または4層のガーゼでフィルムの両端をバッファーに接続し、しばらく待ちます。 4、電源を入れ、セルロースアセテートフィルムの正と負の電極に注意を払い、間違って接続しないでください。 電圧90〜150v、電流0.4〜0.6mA / cm（異なる電気泳動に必要な電圧、電流は異なる場合があります、柔軟でなければなりません）、夏の電源45分、冬の電源オン時間はわずかに長い、約60分、電気泳動ゾーンの拡張約25 〜35mmは可能です。 5、染色：電源が完了したら、フィルムを取り外して、Lichunhong S色素溶液またはアミノブラック10B染色溶液に直接浸漬し、5〜10分間（アルブミンゾーンで）染色し、残りをすすぎ溶液で洗い流します。背景が無色になるまで染色します。 6、定量的： 1比色法：すすいだフィルムを吸い取り、染色されたタンパク質領域を対応するチューブに切り、アルブミンチューブに0.6ml / L水酸化ナトリウム6mlを加え（吸光度に2を掛けて計算）、残り各チューブに3 mlを加え、数回振って、37°C​​の水槽に20分間入れて、色が浸出します。 アミノブラック10B染色各チューブの吸光度を分光光度計を使用して620 nmで読み取り、各チューブの内容物を計算しました（ブランクチューブの同時コントロール）。 Lichunhong Sが染色されると、浸出液は0.1 mol / L水酸化ナトリウムで処理され、その量は上記と同じでした。 10分後、アルブミンチューブに0.6mlの400ml / L酢酸を加え（吸光度に2を掛けます）、0.3mlを他のチューブに加えて水酸化ナトリウムの一部を中和し、色を濃くします。必要に応じて、遠心分離して上清を取ります。各チューブの吸光度を520 nmで分光光度計（同時ブランクコントロール）で読み取り、それぞれの内容を計算しました。 2濃度計のスキャン方法：A.透明：フィルム上のリンス液を吸引し（透明な液体が希釈されて透明な結果に影響するのを防ぐため）、フィルムを透明な液体に2〜3分間浸漬し、取り出してローリングで平らにします。傷のないガラス片をきれいにし（泡を作らないでください）、スライドをしばらくセットし、余分な透明な液体を取り除き、90°Cから100°Cの一定温度のオーブンに入れ、10から15分間焼き、取り外して冷却します室温では、この方法で透明なタンパク質領域は明確で、膜は平らで、直接スキャンして永久保存できます（水素ナフタレンまたは流動パラフィンで透明です。すすぎ膜は乾燥して透明である必要があり、透明膜は透明にできません）それは長い間続き、しわになりやすいです）。 B.スキャンの定量化：透明フィルムは、スキャン分析のために全自動濃度計または他の濃度計暗箱に入れられます。 群衆に適していない いや 副作用とリスク いや