嫌気性細菌の分離と同定

嫌気性微生物の分離と同定は、酸素感受性の高い細菌の分離と同定のテストであり、嫌気性微生物は自然界に広く分布し、多種多様であるため、その生理機能はますます注目されています。 偏性嫌気性細菌は酸素に非常に敏感であるため、分離、培養、生菌数の鍵は、酸素と低酸化還元電位のない培養環境を提供することです。 基本情報 専門家分類：成長および発達チェック分類：生化学検査 該当する性別：男性と女性が断食を適用するかどうか：断食 ヒント：コロニーが小さすぎる場合は、虫眼鏡を使用してコロニーを観察します。 正常値 体内の植物相の種類と割合は正常であり、人体は動的なバランスと健康状態にあります。 臨床的意義 Hengate嫌気性ローリングチューブテクノロジー、Hengate嫌気性ローリングチューブテクノロジーは、1950年にアメリカの微生物学者Hengateによって最初に提案され、ルーメン嫌気性微生物研究に適用された嫌気性培養テクノロジーです。 異常な結果：ガス壊gang、破傷風、ボツリヌス中毒などのクロストリジウム嫌気性物質によって引き起こされる特殊な病気 検査が必要な人：糖尿病、重度の肝疾患、肝硬変、尿毒症、hemo潰瘍、手足の壊gang、ボツリヌス中毒などの症状がある患者。 注意事項 嫌気性細菌の分離と同定のプロセスでは、次の事項に注意する必要があります。 （1）嫌気性検体は、収集および輸送中に空気から隔離し、通常のフローラの汚染を避けながら30分以内に完了する必要があります。 （2）培地は新たに調製する必要があります。長期間保存すると、酸素が表面に溶けたり、過酸化物が培地に混入したりして、嫌気性細菌の増殖につながりません。 （3）コロニーが小さすぎる場合は、虫眼鏡でコロニーを観察する必要があります。 （4）酸素耐性試験を実行するには、各寒天プレートから異なる形質の4から5コロニーを選択し、好気性および嫌気性の血液寒天プレートに接種し、好気性、二酸化炭素および嫌気性環境に配置する必要があります。 （5）細胞外酵素の同定を行う場合、十分な細菌濃度が必要です。 検査プロセス 分離 （1）番号 5本の滅菌水チューブを用意し、10-1、10-2、... 10-5を示すマーカーでマークします。 （2）希釈 非酸素滅菌超清浄嫌気性グローブボックスで、滅菌シリンジを使用して、よく混合された液体サンプル1 mLを吸引し、事前に還元された生理食塩水を含む嫌気性試験管に加え、オシレーターと均等に混合します。 10-1希釈します。 1 mLの10-1希釈液を、滅菌シリンジを使用して9 mLの生理食塩水を含む別の嫌気性チューブにピペットで注入し、10-2希釈液を作成しました。 さまざまなサンプル希釈を行うために、10倍に10倍に連続希釈しました。 チューブ数は通常、10-4、10-5、および10-6の3つの希釈によって選択されます。 （3）ローラー分離 1）ローリングチューブ 嫌気性滅菌寒天培地を沸騰水浴に溶解し、46-50°Cの一定温度の水浴に入れて使用し、培地をボトルから取り出したときに培地中のN 2で膨張させた。 次に、試験管内でN2を膨張させ、管内のすべての空気を取り除き、培地を管に加え、すぐに栓を差し込みます。 ストッパーをチューブに挿入すると、インフレーションニードルが時間内に引き抜かれます。 使用するテストチューブに10-4、10-5、および10-6希釈液のそれぞれ0.1 mLをピペットで入れ、氷水を入れた磁器プレートに平らに置き、すばやく転がします。可溶化した寒天は、試験管の内壁にすぐに固化層を形成します。 2）分離と精製 得られたコロニーを拾い、その形態と純度を調べる必要があります。 純粋な培養物が得られていない場合は、チューブを再度希釈し、純粋な培養物が得られるまで再び結腸を摘みます。 摘まれる単一のコロニーは、虫眼鏡の下で事前に観察され、マークされます。 次に、培地試験管を適切なホルダーに固定し、試験管のゴム栓を開き、適切な空気の流れと火炎で殺菌した細菌を含むガス入り窒素針を素早く試験管に挿入します。 同時に、別の液体嫌気性チューブをゴム栓から取り外し、別の滅菌済み通気針に挿入します。 準備した肘毛細血管を固体培地に慎重に挿入し、採取するコロニーを特定し、優しく吸引し、液体試験管に移し、栓をします。 培養物を37℃で24時間以上、または培養液の濁度を確認した後に培養し、単離された培養物の純度を調べた。 3）ダッシュ分離 試験管のゴム栓の一端を火炎で燃やし、ガス吸引針を使用してノズルを塞ぎます。針をすばやく取り外す前に、空気を15〜20秒間換気し、管の一端を火炎でしばらく燃やします。 パイププラグを締め、コイル状のパイプを立てて断熱しますCO2：H2 = 80：20を使用しますCO2は空気よりも重いため、パイププラグを開いた後、空気が残っていません。 スクライビングチューブは、コロニーを成長させるために34〜37度で成長させることができます。 株の同定 1糖発酵試験 糖発酵実験は、最も一般的に使用される生化学反応であり、腸内細菌の同定に特に重要です。 ほとんどの細菌は糖を炭素源およびエネルギー源として使用できますが、糖を分解する能力に大きな違いがあります。一部の細菌は糖を分解し、酸（乳酸、酢酸、プロピオン酸など）およびガス（水素、メタン、二酸化炭素など;一部の細菌は酸のみを生成し、ガスを生成しません。 たとえば、大腸菌はラクトースとグルコースを分解して酸を生成し、ガスを生成できます。ネズミチフス菌はグルコースを分解して酸を生成し、ガスを生成できず、ラクトースを分解できません。一般的なプロテウスはグルコースを分解して酸を生成し、ラクトースを分解できないガスを生成します。 インジケーターを使用して、酸の生成を判断できます。 ブロモクレゾールパープル[pH 5.2（黄色）-6.8（紫色）]は、培地の調製時に事前に添加し、発酵によって酸が生成されると、培地は紫色から黄色に変化しました。 ガスの発生は、発酵チューブ内の倒立デハンチューブ内の気泡の有無によって証明できます。 具体的な実験手順： 1細菌液を適切に希釈し、滅菌環境で一定量の希釈液を生化学的識別チューブに注入し、滅菌シールフィルムでシールします。 2接種した識別チューブを嫌気性タンクに入れ、十分な窒素を含む37°Cの恒温インキュベーターに入れます。 各チューブの色の変化とガスの生成が324時間後に観察されました。 2タンパク質分解実験 1細菌液を適切に希釈し、滅菌環境で一定量の希釈液を生化学的識別チューブに注入し、滅菌シールフィルムでシールします。 2接種した識別チューブを嫌気性タンクに入れ、十分な窒素を含む37°Cの恒温インキュベーターに入れます。 324時間後、チューブをそれぞれミレン反応、ヒドラジン反応、黄色反応およびうがい薬反応にかけた。 3澱粉加水分解実験 1細菌液を適切に希釈し、滅菌環境で一定量の希釈液を生化学的識別チューブに注入し、滅菌シールフィルムでシールします。 2接種した識別チューブを嫌気性タンクに入れ、十分な窒素を含む37°Cの恒温インキュベーターに入れます。 324時間後、デンプンの加水分解を観察するために、各チューブに適量のルゴールヨウ素溶液を加えました。 群衆に適していない 関連情報はありません。 副作用とリスク 関連する合併症と危険性は発見されていません。