혈청 단백질 전기영동(SPE)

단백질과 같은 생체 분자는 완충액에서 음 또는 양전하를 띠고 전기장에서 전기 영동 (electrophoresis)이라고하는 양극 또는 음극으로 이동합니다. 상이한 등전점, 상이한 분자 크기, 형상 및 전하 대 질량 비로 인해, 상이한 단백질 분자는 상이한 전기 영동 이동성을 가지며, 다양한 단백질이 특정지지 매질에서 분리 될 수있다. 일반적으로 사용되는 전기 영동 기술에는 셀룰로스 아세테이트 막 전기 영동, 아가 로스 겔 전기 영동, 폴리 아크릴 아미드 겔 전기 영동 및 면역 전기 영동이 포함됩니다. 또한, 다발성 골수종은 종종 베타 글로불린 영역과 감마 글로불린 영역 사이에 M 글로불린 밴드를 가지며, 이중 알부민 혈증은 이중 알부민 밴드를 나타낸다. 기본 정보 전문가 분류 : 성장 및 개발 확인 분류 : 생화학 검사 해당 성별 : 남성과 여성의 금식 적용 여부 : 금식 포함 항목 : 혈청 β2 마이크로 글로불린 (β2-MG), 혈청 α2- 마크로 글로불린, 혈청 α1- 마이크로 글로불린 팁 : 공복 12 시간, 정맥혈 검사, 표본은 신선한 혈액이어야합니다. 검사 전에 최근에 복용 한 약과 최근 생리 학적 변화에 대해 의사에게 알려야합니다. 정상 값 셀룰로오스 아세테이트 막 전기 영동 알부민 0.61 ~ 0.71 (61 % ~ 71 %), α1 글로불린 0.03 ~ 0.04 (3 % ~ 4 %), α2 글로불린 0.06 ~ 0.10 (6 % ~ 10 %), 베타 글로불린 0.07 내지 0.11 (7 % 내지 11 %) 및 감마 글로불린 0.09 내지 0.18 (9 % 내지 18 %). 임상 적 의의 1, 알부민 감소는 만성 간염, 간경변, 간암 등에서 발견됩니다. 2, α1 글로불린 (당 단백질)은 원발성 간암에서 증가했습니다. 심한 간염, 간경변 및 간장 혼수 상태에서 감소하며 알부민과 양의 상관 관계가 있습니다. 간 질환에서 α1 글로불린의 결정은 간염의 중증도 및 예후를 판단하기위한 기준값을 갖는다. 일반적으로 α1 글로불린의 증가는 상태가 경미 함을 나타내며 α1 글로불린의 감소는 상태가 더 심함을 나타냅니다. 심한 간부전의 경우 혈청 함량이 크게 감소 될 수 있습니다. 3. α2 글로불린 바이러스 성 간염의 초기 단계에는 큰 변화가 없었으며 일주일 후에 점차적으로 증가하였고 아 급성 간염과 급성 간 괴사 및 비 보상 간경변이 감소되었다. 4, 베타 글로불린은 지방간, 고지혈증, 신 증후군, 고 콜레스테롤 혈증이있는 당뇨병, 폐쇄성 황달, 악성 종양에서 증가했습니다. 담즙 정체 간 질환에서 α2 글로불린의 상승과 병행하여 그 함량이 증가합니다. 급성 및 만성 간염에서 감소, 간경변, 특히 비 보상 간경변 및 괴사 간경변이 가장 크게 감소했습니다. 5, 감마 글로불린은 만성 간염, 간경변, 간 및 담낭 질환에서 증가했습니다. 전형적인 간경변은 β와 γ 밴드의 융합에서 β-γ 브릿지를 형성 할 수 있습니다. 간 질환 환자에서 감마 글로불린의 변화는 상태의 중증도를 반영 할 수 있습니다. 상태가 호전됨에 따라 그 함량은 점차 정상으로 떨어질 수 있으며, 계속 높은 수준으로 떨어지면 상태가 심각하고 예후가 나쁘고 만성 간염 및 간경변이 발생하는 경향이 있음을 나타냅니다. 또한, 감염, 신경 병증, 다발성 골수종, 결합 조직 질환 등도 상승 될 수 있습니다. 감마 글로불린 결핍, 부분 화학 요법 환자의 발생률을 줄입니다. 또한, 다발성 골수종은 종종 베타 글로불린 영역과 감마 글로불린 영역 사이에 M 글로불린 밴드를 가지며, 이중 알부민 혈증은 이중 알부민 밴드를 나타낸다. 낮은 결과는 질병 일 수 있습니다 : 담낭 황달 의 높은 결과는 질병 일 수 있습니다 : 간경변, 원발성 간암, 노인의 다발성 골수종 1, 공복 12 시간, 정맥 혈액 검사, 표본은 신선한 혈액이어야합니다. 2. 검사 전에 최근에 복용 한 약과 최근 생리 학적 변화에 대해 의사에게 알려야합니다. 3. 다음과 같은 경우 생리 학적 상승이 발생할 수 있습니다. (1) α1- 글로불린의 증가는 임신 6 개월 후에 볼 수 있습니다. (2) α2- 글로불린의 증가는 1-6 개월에 태어난 영아에서 볼 수 있으며 임신 4-6 개월이 약간 증가하고 7-9 개월이 크게 증가합니다. (3) β- 글로불린 상승은 출생 후 아기, 임신 4-6 개월에 나타납니다. (4) 백신 접종 면역 백신 후 γ- 글로불린의 증가가 보인다. 검사 과정 1. 전기 영동 탱크에 버퍼를 추가하고 양쪽 탱크의 버퍼를 조정하여 동일한 평면에 만듭니다. 2. 셀룰로오스 아세테이트 필름의 제조 : 셀룰로오스 아세테이트 필름 (2cm × 8cm)을 취하고 거친 표면의 1.5cm (음의 한쪽면)에 연필로 수평선을 그려 점선으로 표시합니다. 양극 및 음극의 번호를 매기고 지시 한 후, 막을 바르 비투 레이트-바르 비탈 나트륨 완충 용액에 침지시키고, 충분히 포화 된 후 (보통 20 분), 깨끗한 여과지를 샌드위치하여 과량의 완충액을 제거 하였다. 3. 셀룰로스 아세테이트 필름 모발을 전기 영동 탱크 홀더에 부착하고 곧게 펴십시오. 마이크로 피펫이있는 비용 혈성 혈청 3 ~ 5μl 피펫을 수평선의 수평선을 따라가합니다 전기 영동 패턴에서 단백질 밴드의 변형을 피하기 위해 필름 가장자리에서 일정 거리를 유지해야합니다. 빛의면이 위를 향한 상태에서 전기 영동 탱크 브래킷에 평평하게 붙이고 필름의 두 끝을 이중 필터 종이 또는 4 층의 거즈로 버퍼에 연결하고 잠시 기다리십시오. 4, 전원을 켜고, 셀룰로오스 아세테이트 필름의 양극과 음극에주의를 기울이고 잘못 연결하지 마십시오. 전압 90 ~ 150v, 전류 0.4 ~ 0.6mA / cm (서로 다른 전기 영동 필요 전압, 전류가 다를 수 있고 유연해야 함), 여름 전원 45 분, 겨울 전원 켜기 시간이 약간 더 길다, 약 60 분, 전기 영동 구역 확장 약 25 ~ 35mm가 될 수 있습니다. 5, 염색 : 전원이 완료된 후, 필름을 제거하고 Lichunhong S 염색 용액 또는 아미노 블랙 10B 염색 용액에 직접 담그고 5-10 분 동안 (알부민 영역에 의해) 염색 한 다음, 헹굼 용액에 남아있는 물을 헹구십시오. 배경이 무색이 될 때까지 염색하십시오. 6, 정량적 : 1 비색법 : 헹굼 된 필름을 지우고 염색 된 단백질 영역을 해당 튜브에 자르고 알부민 튜브에 0.6ml / L 수산화 나트륨 6ml를 첨가하십시오 (2를 곱한 흡광도 계산), 나머지 각 튜브에 3ml를 넣고 여러 번 흔든 다음 37 ° C 물 탱크에 20 분 동안 두어 색 침출을 만듭니다. 아미노 블랙 10B 염색 각 튜브의 흡광도를 분광 광도계를 사용하여 620 nm에서 판독 한 후, 각 튜브의 함량을 계산 하였다 (동시 블랭크 튜브 제어). Lichunhong S가 염색 될 때, 침출 물은 0.1 mol / L 수산화 나트륨으로 처리되었으며, 그 양은 상기와 동일 하였다. 10 분 후, 알부민 튜브에 0.6ml의 400ml / L 아세트산을 첨가하고 (흡수에 2를 곱함) 다른 튜브에 0.3ml를 첨가하여 일부 수산화 나트륨을 중화시켜 색상을 더 깊게 만듭니다. 필요한 경우 원심 분리하고 상청액을 취합니다. 각 튜브의 흡광도를 분광 광도계 (동시 블랭크 대조군)에 의해 520 nm에서 판독 한 후, 각각의 함량을 계산 하였다. 2 농도계 스캐닝 방법 : A. 투명성 : 투명 액체가 희석되어 투명 결과에 영향을 미치지 않도록 필름에 헹굼 액체를 흡입하고, 투명 액체에 필름을 2 ~ 3 분 동안 담근 후 롤링 방식으로 평평하게합니다. 스크래치가없는 유리 조각을 청소하고 (기포를 만들지 않음) 슬라이드를 잠시 동안 설정하고, 여분의 투명한 액체를 제거하고, 90 ° C ~ 100 ° C의 일정한 온도의 오븐에 놓고 10-15 분 동안 굽고, 제거하고 식히십시오. 실온에서,이 방법에 의해 투명한 단백질 영역은 명확하고, 필름은 평평하며, 직접 스캔되고 영구적으로 보존 될 수있다 (수소 나프탈렌 또는 액체 파라핀으로 투명하다. 헹군 필름은 건조되고 투명해야하며, 투명 필름은 투명 할 수 없다) 그것은 오래 지속되며 주름지기 쉽습니다). B. 스캔 정량 : 투명 필름은 스캔 분석을 위해 완전 자동 농도계 또는 기타 농도계 어두운 상자에 배치됩니다. 군중에게 적합하지 않음 아니 부작용 및 위험 아니