혐기성 박테리아의 분리 및 식별

혐기성 박테리아의 분리 및 동정은 높은 산소 민감도를 갖는 박테리아의 분리 및 동정을위한 시험으로, 혐기성 미생물은 자연적으로 널리 분포되어 있고 다양성이 있기 때문에 생리 학적 기능에 대한 관심이 높아지고 있습니다. 완전 혐기성 박테리아는 산소에 매우 민감하므로 분리, 배양 및 생존 카운트의 핵심은 산소가없고 산화 환원 가능성이 낮은 배양 환경을 제공하는 것입니다. 기본 정보 전문가 분류 : 성장 및 개발 확인 분류 : 생화학 검사 해당 성별 : 남성과 여성의 금식 적용 여부 : 금식 팁 : 식민지가 너무 작은 경우 돋보기를 사용하여 식민지를 관찰하십시오. 정상 값 신체의 식물 군의 유형과 비율은 정상이며 인체는 역동적 균형과 건강 상태에 있습니다. 임상 적 의의 Hengate 혐기성 롤링 튜브 기술, Hengate 혐기성 롤링 튜브 기술은 1950 년 미국 미생물 학자 Hengate가 처음 제안한 혐기성 배양 기술로, 반추위 혐기성 미생물 연구에 적용됩니다. 비정상 결과 : 가스 괴저, 파상풍, 보툴리누스 등과 같은 클로 스트 리듐 혐기성 물질로 인한 특수 질환 검사를 받아야하는 사람들 : 당뇨병, 심한 간 질환, 간경변, 요독증, 치질 궤양, 사지 괴저, 보툴리누스 및 기타 증상이있는 환자. 주의 사항 혐기성 박테리아의 분리 및 식별 과정에서 다음 사항에 유의해야합니다. (1) 혐기성 표본은 수집 및 운송 중에 공기와 격리되어야하며 정상적인 식물 군의 오염을 피하면서 30 분 이내에 완료해야합니다. (2) 배지는 신선하게 준비해야하며 너무 오래 보관하면 표면에 산소가 용해되거나 과산화물이 배지에 혐기성 박테리아의 성장에 도움이되지 않습니다. (3) 식민지가 너무 작은 경우, 식민지는 돋보기로 관찰해야합니다. (4) 산소 내성 검사를 수행하려면 각 한천 플레이트에서 4 ~ 5 개의 다른 특성을 가진 콜로니를 선택하고 호기성 및 혐기성 혈액 한천 플레이트를 접종하여 호기성, 이산화탄소 및 혐기성 환경에 배치해야합니다. (5) 세포 외 효소 식별을 수행하는 경우 충분한 박테리아 농도가 있어야합니다. 검사 과정 분리 (1) 번호 멸균 된 물 튜브 5 개를 가져 와서 10-1, 10-2, ... 10-5를 나타내는 마커로 표시하십시오. (2) 희석 비 산소 멸균 초 청정 혐기성 ​​글러브 박스에서 멸균 주사기를 사용하여 잘 혼합 된 액체 시료 1mL를 채취하여 미리 환원 된 생리 식염수가 포함 된 혐기성 시험관에 넣고 발진기와 균일하게 혼합합니다. 10-1 희석하십시오. 1mL 10-1 희석액을 멸균 주사기를 사용하여 생리 식염수 9mL를 함유하는 별도의 혐기성 튜브에 피펫 팅하여 10-2 희석액을 제조 하였다. 다른 시료 희석을 위해 10 ~ 10-6으로 연속 희석합니다. 튜브 수는 일반적으로 10-4, 10-5 및 10-6의 3 가지 희석으로 선택됩니다. (3) 롤러 분리 1) 롤링 튜브 혐기성 멸균 한천 배지를 끓는 수조에 용해시키고, 46 내지 50 ℃의 항온 수조에 넣고, 배지로부터 병을 꺼낼 때 배지에서 N 2로 팽창시켰다. 그런 다음 테스트 튜브에서 N2를 팽창시키고 튜브 내부의 모든 공기를 제거한 다음 튜브에 매체를 추가하고 즉시 스토퍼를 막습니다. 스토퍼가 튜브에 삽입되면 인플레이션 니들이 제때 당겨집니다. 사용할 10-4, 10-5 및 10-6 희석액 0.1 mL를 시험관에 피펫 팅 한 다음 얼음물이 담긴 도자기 접시에 평평하게 놓고 빠르게 굴립니다. 가용화 된 한천은 시험관의 내벽에 즉시 응고 층을 형성한다. 2) 분리 및 정제 결과 식민지는 선택과 형태와 순도를 검사해야합니다. 순수한 배양액을 얻지 못한 경우 튜브를 다시 희석하고 순수한 배양액을 얻을 때까지 결장을 다시 선택하십시오. 선택 될 단일 콜로니는 미리 돋보기 아래에서 관찰되고 표시된다. 이어서, 중간 시험 튜브를 적합한 홀더에 고정시키고, 시험 튜브 고무 마개를 개방하고, 적절한 공기 흐름 및 화염으로 죽인 박테리아를 갖는 가스 충전 질소 니들을 튜브에 신속하게 삽입한다. 동시에, 다른 액체 혐기성 튜브가 고무 플러그에서 제거되어 다른 멸균 된 환기 바늘에 삽입됩니다. 준비된 팔꿈치 모세관을 고체 매체에 조심스럽게 삽입하고, 집을 식민지를 식별하고, 부드럽게 흡인하고, 액체 시험관으로 옮기고 마개로 옮깁니다. 배양액의 탁도를 확인한 후, 24 시간 이상 37 ℃에서 배양하고, 단리 배양의 순도를 조사했다. 3) 대시 분리 테스트 튜브 고무 마개의 한쪽 끝이 화염에서 연소되고 가스 흡입 바늘이 노즐을 막는 데 사용됩니다. 바늘을 빠르게 제거하기 전에 공기가 15-20 초 동안 환기되고 튜브의 한쪽 끝이 화염에서 잠시 동안 연소됩니다. 파이프 플러그를 조이고 코일 파이프를 세우고 절연합니다 CO2 : H2 = 80 : 20 사용 CO2가 공기보다 무겁기 때문에 파이프 플러그는 개봉 후에 공기 잔류 물이 없습니다. 스 크라이 빙 튜브는 34-37 도로 성장하여 식민지를 자랄 수 있습니다. 균주의 식별 1 설탕 발효 시험 설탕 발효 실험은 가장 일반적으로 사용되는 생화학 반응이며 장내 박테리아를 식별하는 데 특히 중요합니다. 대부분의 박테리아는 설탕을 탄소원과 에너지 원으로 사용할 수 있지만 설탕 분해 능력에 큰 차이가 있으며 일부 박테리아는 설탕을 분해하고 산 (예 : 젖산, 아세트산, 프로피온산 등)과 가스 (예 : 수소, 메탄, 이산화탄소 등 일부 박테리아는 산만 생산하고 가스는 생산하지 않습니다. 예를 들어, 대장균은 유당과 포도당을 분해하여 산을 생성하고 가스를 생성 할 수 있습니다; 살모넬라 티피 무리 움은 포도당을 분해하여 산을 생성하고 가스를 생성하지 않을 수 있으며, 유당을 분해 할 수 없습니다. 산의 생성은 지표를 사용하여 결정할 수 있습니다. 배지를 제조 할 때 브로 모 크레졸 퍼플 [pH 5.2 (노란색)-6.8 (보라색)]을 미리 첨가하고, 발효에 의해 산을 제조 할 때, 배지를 자주색에서 황색으로 변화시켰다. 발효 튜브의 역 Dehan 튜브에 기포가 있는지 여부에 따라 가스가 생성 될 수 있습니다. 구체적인 실험 단계 : 1 박테리아 액체를 적절히 희석 한 다음 멸균 환경에서 일정량의 희석 용액을 생화학 적 식별 튜브에 주입하고 멸균 밀봉 필름으로 밀봉합니다. 2 접종 된 식별 튜브를 혐기성 탱크에 넣고 충분한 질소를 가진 37 ° C 항온 인큐베이터에 넣습니다. 각 튜브의 색 변화 및 가스 생성은 324 시간 후에 관찰되었다. 단백질 분해 실험 1 박테리아 액체를 적절히 희석 한 다음 멸균 환경에서 일정량의 희석 용액을 생화학 적 식별 튜브에 주입하고 멸균 밀봉 필름으로 밀봉합니다. 2 접종 된 식별 튜브를 혐기성 탱크에 넣고 충분한 질소를 가진 37 ° C 항온 인큐베이터에 넣습니다. 324 시간 후, 튜브를 각각 미렌 반응, 히드라진 반응, 황색 반응 및 구강 세정 반응에 적용시켰다. 3 전분 가수 분해 실험 1 박테리아 액체를 적절히 희석 한 다음 멸균 환경에서 일정량의 희석 용액을 생화학 적 식별 튜브에 주입하고 멸균 밀봉 필름으로 밀봉합니다. 2 접종 된 식별 튜브를 혐기성 탱크에 넣고 충분한 질소를 가진 37 ° C 항온 인큐베이터에 넣습니다. 324 시간 후, 전분의 가수 분해를 관찰하기 위해 적절한 양의 루골 요오드 용액을 각 튜브에 첨가 하였다. 군중에게 적합하지 않음 관련 정보가 없습니다. 부작용 및 위험 관련된 합병증과 위험은 없습니다.