유세포 분석 DNA 분석

유세포 분석 DNA 분석은 간세포를 연구 할 수있는 검사 방법이며 세포 증식 상태에 영향을받지 않으며 흉막 삼출액에서 악성 세포를 검출하는 데 중요합니다. 유세포 분석 검출 범위 : 1. 유세포 분석은 세포 크기, 세포 크기, 세포 표면적, 핵질 비율, DNA 함량 및 세포주기, RNA 함량, 단백질 함량을 포함한 세포 구조를 검출 할 수있다. 2. 유세포 분석은 세포 표면 / 세포질 / 핵 특이 적 항원, 세포 활성, 세포 내 사이토 카인, 효소 활성, 호르몬 결합 부위 및 세포 수용체를 포함한 세포 기능을 검출 할 수있다. 기본 정보 전문가 분류 : 심혈관 검사 분류 : 혈액 검사 해당 성별 : 남성과 여성의 금식 적용 여부 : 금식 팁 : 정상적인 사고 방식을 유지하십시오. 정상 값 몸은 질병없이 역동적으로 균형을 이룹니다. 임상 적 의의 유세포 분석의 임상 적 적용 : 1. 종양학에서 유세포 분석의 적용 유세포 분석은 종양 세포 증식주기를 검출하고, 종양 세포 표면 마커, 종양 유전자 발현 생성물을 검출하고, 다제 내성 분석을 수행하고, 아 pop 토 시스를 검출 할 수있다; 2. 백혈병 및 림프종 세포, 활성화 된 혈소판, 조혈 줄기 세포 (CD34 +) 수, 백혈병 및 림프종의 면역 표현, 망상 적혈구 수, 세포 이식의 교차 매칭을 검출하기 위해 혈액학에서 유동 세포 계측법의 적용 면역 상태 모니터링; 3. 면역학에서의 유세포 분석은 림프구 및 그의 하위 군 분석, 림프구 면역 표현형, 사이토 카인의 검출에 사용될 수있다. 비정상 결과 71 례의 흉막 삼출액에 대한 유세포 분석법에 대한 데이터가 있었으며, 악성 흉막 삼출액의 민감도는 52 %, 특이도는 100 %였다. 일상적인 테스트와 함께 사용하면 진단 감도가 94 %까지 높아질 수 있습니다. 암 흉막 삼출 세포의 DNA 분석은 이수성 및 S 기, G2 / M 기 세포의 비율의 증가를 보여 주었다. 검사가 필요한 사람들은 암 흉막 삼출 및 기타 관련 질병이 의심됩니다. 주의 사항 유세포 분석은 완전 자동화 된 기기가 아니므로 정확한 실험 결과에는 정확한 수동 기술이 필요하므로 시편 준비에는 사양이 필요하고 기기 자체에는 품질 관리가 필요합니다. (1) 유세포 분석 면역 학적 검출의 영향 요인 및 품질 관리 유동 세포 계측법은 면역학에 광범위하게 적용됩니다. 면역 준비 중 인위적인 비특이적 형광 간섭 (특히 간접 면역 형광 염색) 또는 낮은 세포 농도의 발생으로 인해 면역 형광 염색 표본의 준비가 매우 중요합니다. 테스트 결과. 이러한 영향 요인에 대한 솔루션은 다음과 같습니다. (1) 기계가 감지되기 ​​전에 시료의 농도가 1X106 cells / ml이고 세포 농도가 너무 낮아서 감지 결과에 직접 영향을 미치는지 확인하십시오. (2) 비특이적 결합 부위를 차단하기위한 단백질 차단제의 사용은 특히 간접 면역 형광 표지에 필요하다. 일반적으로 사용되는 단백질 차단제는 0.5 % 소 혈청 알부민 및 1 % 태아 소 혈청입니다. (3) 형광 항체는 염색 후 철저히 세척하고, 혼합 및 원심 분리 속도에주의하고, 중첩되는 세포 및 세포 잔해를 줄입니다. (4) 대조군 샘플은 동일한 항체 공급원과 일치하는 비 관련 대조군 및 형광 항체의 백그라운드 대조군을 사용하여 설정되었다. (5) 결과를 판단 할 때, 배경 형광을 빼는 데주의를 기울여야하며, 면역 형광의 정량 분석을보다 정확하게하기 위해, 컴퓨터 프로그램 소프트웨어는 피팅 곡선 법에 의해 실험군의 곡선 피크에서 대조군의 곡선 피크를 빼는 데 사용됩니다. 보다 정확한 면역 형광 정량적 결과를 얻을 수 있습니다. (6) 염색 후 빛을 피하여 세포 면역 형광의 안정성을 확보하십시오. (2) DNA 배수성 분석의 품질 관리에 대한 통일 된 표준은 아직 없으며, 다양한 문헌에보고 된 실험 결과는 상당히 다르다 1993 년 10 월, 미국 암 연구소는 FCM DNA 결정을위한 통일 ​​된 표준을 개발하여이 표준에 따라 결합시켰다. 숙련 된 전문가들은 FCM의 DNA 분석 기술의 품질 관리 및 예방 조치를 설명하기 위해 수년간 연습 해 왔습니다. (1) 외과 적 절제 또는 생검 바늘을위한 새로운 표본을 채취 할 때, 출혈성 괴사 조직은 피해야한다. (2) 시편은자가 분해 및 DNA 분해를 피하기 위해 수집 후 정해진 시간에 고정 또는 동결 보존되어야하며 시험 결과에 오류가 발생합니다. (3) 고정 제는 조직 세포에 높은 침투력을 가져야하며 에탄올의 70 %가 더 좋습니다. (4) 단일 세포 현탁액을 준비하는 동안 검사 할 세포의 구성 요소를 분리하고 다른 구성 요소의 간섭을 줄이며 세포가 손상되지 않도록주의하십시오. (5) 세포 샘플의 수집은 충분한 세포 농도, 즉 1x10 6 세포 / ml, 불순물, 잔해, 덩어리 및 겹치는 세포가 <2 %이어야하고, 종양 세포 DNA 이수성 체 샘플의 20 % 이상을 분석해야합니다. 종양 세포가 존재합니다. (6) 파라핀 포매 된 조직의 단일 세포를 제조 할 때,자가 분해 및 괴사없이 조직의 선택에주의를 기울여야한다. 종양 조직 표본의 경우, 종양 세포를 함유하는 영역이 선택되고, 파라핀 조직 시트의 두께가 바람직해야한다. 40 내지 50 μm. 너무 얇거나 너무 두꺼운 슬라이스는 테스트 결과에 영향을 미치며, 잔류 파라핀이 효소의 소화 활동에 영향을 미치지 않도록 철저히 탈랍됩니다. 자일 렌을 버리고 100 % 에탄올을 첨가하여 탈랍이 완료되었는지 확인하십시오. 부유는 왁스가 제거되었음을 나타냅니다. 수화는 조직을 신선한 조직과 유사한 상태로 복원하기에 충분합니다. 소화 시간과 소화 효소의 활성에주의하십시오. 0.5 % 펩신을 일상적으로 pH 1.5로 사용 하였다. (3) 운영 측면 (1) 유세포 분석기는 작업 공정 전반에 걸쳐 최적의 상태에 있으며, 이는 정량적 검출의 정확성과 정확성을 보장 할 수 있습니다. 표준 샘플을 사용하여 계측기의 변동 계수를 최소 범위로 조정하면 측정 프로세스 중 계측기 조건의 변화로 인한 감지 오류를 피하기 위해 분해능이 최상의 상태입니다. (2) 기기의 정확도를 평가하기위한 중요한 지표는 기기의 변동 계수 (CV)이며, 교정 샘플의 경우 CV 값이 작을수록 CV 값이 작아 져 기기 교정의 정확도가 높다는 것을 나타냅니다. 캘리브레이션 샘플에는 비 생물학적 샘플 (형광 미세 구)과 생물학적 세포 샘플 (인간 림프구, 닭 적혈구 등)이 포함됩니다. 현재, 비생 발광성 미소 구는 상업적 시약을 가지며, CV는 일반적으로 <2 % 내지 3 %이다. (4) 데이터 분석 (1) 시료에 잔해 나 덩어리가 너무 많으면 측정 된 세포의 수가 20 % 미만이므로 막대 그래프의 기준선을 버려야합니다. (2) 세포주기 분석을 수행 할 때 이물질, 불순물 및 응집물을 제외하고 샘플 세포의 수는 10,000이어야하며, 이수성 세포의 수가 총 세포 수의 10 % 미만을 차지할 경우 다른 진단 지표를 결합해야합니다. 결론적으로, 적어도 이수성 세포는 총 세포 수의 20 % 이상을 차지하며, 이수성의 존재가 결정될 수있다. (3) DNA 분석에서, 정상 이배체 세포 그룹의 CV 값이> 8 % 인 경우, 분석은 중단되었지만, 종양 세포의 CV 값은> 8 %였으며, 이는 종양 세포의 이질성과 관련이 있었다. 또한 DNA 배수성 분석에서 상 동성 조직에있는 개인의 10 %가 표류 할 것입니다. (4) 동일한 개별 상 동성 정상 조직, 동일한 고정 방법, 동일한 시료 처리 방법, 동일한 염색 방법, 동시 염색, 동일한 기기 검출 조건, 정상 이배체 조직을 사용한 DNA 배수성 표준의 품질 관리 내부 표준. 검사 과정 유세포 분석 : 흉막액의 세포를 형광 염료 (예 : 요오드화 프로피 디움)로 직접 염색하고, 흉막액 세포의 DNA 함량, 세포주기 분포 및 DNA 배수성을 유세포 분석법으로 분석했습니다. 유세포 분석에 의한 일상적인 테스트를위한 샘플 준비 (1) 직접 면역 형광 표지 특정 양의 세포 (약 1X106 세포 / ml)를 취하고 면역 표지 반응을 위해 플루오 레세 인-접합 항체를 직접 추가하십시오 (예 : 이중 표지 또는 다중 표지 염색, 동시에 다른 플루오 레세 인으로 표지 된 여러 항체 추가), 배양 20 ~ 60 분 후 PBS (pH 7.2 ~ 7.4)로 1 ~ 2 회 씻고 완충액에 재현 탁한 후 기기에서 테스트합니다. 이 방법은 간단한 조작, 정확한 결과 및 쉬운 분석의 장점을 가지며 동일한 셀 그룹의 여러 매개 변수를 동시에 결정하는 데 적합합니다. 직접 표지 된 항체 시약의 비용은 높지만, 간접 표지법에서 강한 비특이적 형광의 간섭을 감소 시키므로 임상 표본의 검출에 더 적합하다. (2) 간접 면역 형광 표지 일정량의 세포 현탁액 (약 1X106 세포 / ml)을 취한 후, 먼저 특정 제 1 항체를 첨가하고, 반응이 완료된 후 결합되지 않은 항체를 세척 한 다음, 형광 표지 된 이차 항체를 첨가하여 항원-항체-항체 복합체를 형성하십시오 FCM은 여기 된 후에 라벨이 붙은 플루오 레세 인에 의해 방출 된 형광을 검출합니다. 이 방법은 비용이 저렴하고 이차 항체가 널리 사용되며 과학 표본의 탐지에 주로 사용됩니다. 그러나, 이차 항체는 일반적으로 폴리 클로 날 항체이기 때문에 특이성이 떨어지고 비특이적 형광 배경이 강하여 실험 결과에 쉽게 영향을 미친다. 따라서 시험편을 준비 할 때 음성 또는 양성 대조군을 추가해야한다. 또한, 표준 라벨링 방법에서 많은 단계로 인해 세포 손실이 증가하고 적은 수의 세포로 표본을 측정하는 것은 적합하지 않습니다. 군중에게 적합하지 않음 아니