헬리코박터 파일로리의 면역학적 검출

헬리코박터 파일로리 (Helicobacter pylori) 면역 학적 검사는 수동 적혈구 응집 분석법, 면역 블 롯팅 기술 및 효소 결합 면역 흡착 분석법 (ELISA)을 포함하여 혈청에서 헬리코박터 파일로리 항체를 측정하여 H. pylori 감염을 탐지합니다. 환자는 뇌척수액을 취하고 96- 웰 V- 형 적혈구 응집 플레이트로 항원을 희석하여 JE 항원을 희석하여 각각의 웰이 25 uL를 함유하도록하고, 시험 할 혈청을 각각의 희석으로 1:10으로 희석시켰다. 25uL을 첨가하고, 동결 건조 된 일본 뇌 단일 클론 항체를 첨가하여 양 적혈구 25uL을 민감하게하고, 37 ℃에서 몇 시간 동안 방치 한 후 결과를 관찰한다. 기본 정보 전문가 분류 : 성장 및 발달 시험 분류 : 혈액 검사 해당 성별 : 남성과 여성의 금식 적용 여부 : 금식 팁 : 시험에서 공복을 유지하십시오. 정상 값 결과는 부정적이었습니다. 임상 적 의의 비정상 결과 : 1. 시험의 혈청 응집 역가가 항원 대조군보다 4 배 또는 4 배 이상 높다. 회수 기간 동안의 혈청 항원 역가는 급성기보다 4 배 이상 높았으며 양성이었다. 2. 특별한 색 반응이 있는데, 이는 특정 단백질이 존재 함을 증명합니다. 3. 알려진 네거티브 혈청 (P / N) ≥ 2.1에 대한 테스트 할 혈청의 비율과 테스트 할 혈청의 OD 값이 ≥ 0.4이면 양성으로 판단됩니다. 소화성 궤양 환자 : 군중을 확인해야합니다. 주의 사항 검사 전 금기 사항 : 뇌 보호에주의를 기울이고 다양한 포장 액체를 준비하고 농도를 구성하십시오. 점검시 금기 : 1. 환자는 뇌척수액을 잡고 머리를 다 치지 않도록 앉습니다. 2. 사용 전에 양 적혈구를 동결 건조시키기 위해 감작하는데 사용되는 단일 클론 항체. 3. 1 차 및 2 차 항체의 희석, 작용 지속 시간 및 온도는 다른 단백질에 대한 최적 조건을 결정하기 위해 사전 실험되어야한다. 4. 발색 용액을 새로 구성하고 최종적으로 H2O2에 첨가해야합니다. 5. DAB는 암을 유발할 가능성이 있으므로 취급시주의하십시오. 6. 온도, 시간, pH, 효소 및 항체 양과 같은 표지의 효율에 영향을 미치는 엄격하게 제어 요소. 7. 컬럼을 설치할 때 컬럼을 균일하게 만들고 실린더 표면이 평평하며 기포 나 균열이 없습니다. 검사 과정 첫째, 수동 혈액 응고 환자는 뇌척수액을 취하고 96- 웰 V- 형 적혈구 응집 플레이트로 항원을 희석하여 JE 항원을 희석하여 각각의 웰이 25 uL를 함유하도록하고, 시험 할 혈청을 각각의 희석으로 1:10으로 희석시켰다. 동결 건조 된 일본 뇌 단일 클론 항체에 의해 25 uL을 첨가하고, 민감화 된 양 적혈구 25 uL를 첨가하고, 37 ℃에서 몇 시간 동안 방치 한 후 결과를 관찰한다. 둘째, 면역 블 롯팅 기술 (A) 수득 된 단백질 샘플 : 박테리아 발현의 유도 후, 세포는 전기 영동 로딩 완충제, 진핵 세포 + 균질화 완충제, 기계적 또는 초음파 실온 균질 물 0.5-1 분에 의해 직접 용해 될 수있다. 이어서, 4 ℃에서 15 분 동안 13,000g에서 원심 분리 하였다. 샘플로 상청액을 가져 가라. (2) 전기 영동 : 전기 영동 겔을 제조하고 SDS-PAGE를 수행 하였다. (3) 전송 : (반건식 전송) 1. 전기 영동이 완료된 후 스트립을 적절한 크기로 자르고 5 분 × 3 회 막 완충액과 평형을 이루십시오. 2. 막 처리 : 스트립과 동일한 크기의 여과지 및 NC 막을 사전 절단하고 전사 완충제에 10 분 동안 침지시켰다. 3. 전사 필름 : 필름 전사 장치는 양극 카본 플레이트, 24 층의 여과지, NC 필름, 젤, 24 층의 여과지 및 음극 카본 플레이트의 순서에 따라 아래에서 위로 순서대로 배치됩니다. 필터 페이퍼, 겔 및 NC 필름은 정확하게 정렬됩니다. 기포를 한번에 제거하고, 500g의 중량을 가하여 카본 플레이트상의 과량의 액체를 건조시켰다. 전원을 켜고 정전류 1mA / cm2를 1.5 시간 동안 전송합니다. 이송이 완료된 후, 전력이 제거되고 막이 제거되고, 시험 될 스트립은 면역 블 롯팅을 위해 절단된다. 단백질 표준 스트립을 염색하고, 50 초 동안 막 염색 용액에 넣은 다음, 50 % 메탄올에서 맑은 배경으로 여러 번 탈색 한 후, 이중 증류수로 세척하고, 두 층의 여과지에서 공기 건조시키고, 채색 하였다 결과가 비교됩니다. (4) 면역 반응 : 1. 막을 0.01 M PBS로 5 분 x 3 회 세척한다. 2. 코팅 용액을 넣고 실온에서 2 시간 동안 부드럽게 흔 듭니다. 3. 용액을 버리고 막을 0.01 M PBS로 5 분 × 3 회 세척한다. 4. 1 차 항체 (적절한 희석 비율로 0.01 M PBS로 희석, 액체는 모든 막을 덮어야 함)를 첨가하고 4 ℃에서 12 시간 이상 방치합니다. 음성 대조군에서, 1 차 항체는 1 % BSA로 대체되었고, 나머지 단계는 실험 그룹에서와 동일 하였다. 5. 1 차 항체 및 1 % BSA를 버리고, 막을 0.01 M PBS로 5 분 × 4 회 세척한다. 6. 양 고추 냉이 퍼 옥시 다제-접합 된 이차 항체 (적절한 희석 비율에서 0.01 M PBS로 희석 됨)를 첨가하고 실온에서 2 시간 동안 부드럽게 진탕시킨다. 7. 이차 항체를 폐기하고 막을 0.01 M PBS로 5 분 × 4 회 세척한다. 8. 착색 용액을 넣고 빛을 피하고 밴드가 나타날 때까지 발색 한 후 이중 증류수에 넣어 반응을 중지시킵니다. 셋째, 효소 결합 흡착 측정 일반적으로 사용되는 ELISA 방법은 이중 항체 샌드위치 방법 및 간접 방법, 거대 분자 항원 검출 용 전자 및 특정 항체 측정 용 후자를 포함한다. 간접 ELISA 이 방법은 주로 항체를 탐지하는 데 사용됩니다. 간접 ELISA 절차는 다음과 같습니다. (1) 재료 1 도포 액, 세정액, 보온 액, 기판 액 및 정지 액; 2DVH 코팅 된 항원, 효소-표지 된 항체, 음성 및 양성 DVH 기준 혈청; 3 ELISA 검출기, 샘플러, 폴리스티렌 마이크로 플레이트. (2) 방법 단계 1 + 항원 코팅 → 4 ℃에서 밤새, 3 회 세척하고, 건식 처리; 시험 될 2 + 혈청 → 37 ℃에서 2 시간 동안, 3 회 세척하고, 건조시키고; 3 + 효소 표지 된 항체 → 37 ℃에서 2 시간 동안, 3 회 세척하고, 건조시키고; 4 기질 용액 → 37 ° C를 30 분 동안 첨가하고, 정지 용액을 첨가하고; 5 OD 값을 ELISA 검출기로 측정하고, P / N 비를 계산 하였다. 2. 이중 항체 샌드위치 ELISA 이 방법은 주로 고분자 항원을 탐지하는 데 사용됩니다. 1 + 항체 코팅 → 4 ℃에서 밤새, 3 회 세척, 건조 처리; 2 → 37 ℃에서 30 분 동안 시험 할 항원을 더한 후 3 회 세척하고 건조시킨다; 3 + 효소 표지 된 항체 → 37 ℃에서 30 분 동안, 3 회 세척하고, 건조시키고; 4 기질 용액 → 37 ° C를 15 분 동안 첨가하고, 정지 용액을 첨가하고; 5 OD 값은 ELISA 테스터에 의해 측정되었다. 군중에게 적합하지 않음 군중 확인에 적합하지 않음 : 없음 부작용 및 위험 관련 합병증이나 위험이 없습니다.