test endotoksyny bakteryjnej

Test endotoksyny bakteryjnej ma na celu ustalenie, czy endotoksyna bakteryjna w badanym wyrobie spełnia wymagania. Endotoksyna jest lipopolisacharydem ściany komórkowej bakterii Gram-ujemnych, a jej toksycznym składnikiem jest lipid A. Bakterie zmarły po rozpadzie. Bakteryjne badanie endotoksyny obejmuje dwie metody, metodę żelową i metodę fotometryczną, ta ostatnia obejmuje metodę turbidymetryczną i metodę substratu chromogennego. Podczas testowania testu do testu można zastosować dowolną z metod. Jeżeli wyniki pomiaru są kontrowersyjne, o ile nie określono inaczej, wyniki metody żelowej mają pierwszeństwo. Podstawowe informacje Kategoria specjalistyczna: Kategoria inspekcji: Patogenne badanie mikrobiologiczne Obowiązująca płeć: czy mężczyźni i kobiety stosują post: post Wyniki analizy: Poniżej normy: Wartość normalna: Nie Powyżej normalnego: Negatywne: Żel nie pozostaje nienaruszony i jest ujemny na ściance tubki. Pozytywne: Pozytywne zapisy, które nie ześlizgnęły się ze ściany, były pozytywne. Wskazówki: Test endotoksyny bakteryjnej ma na celu ustalenie, czy endotoksyna bakteryjna w badanym wyrobie spełnia wymagania. Wartość normalna Rodzaj i proporcja flory w ciele są normalne, a ciało ludzkie jest w dynamicznej równowadze. Znaczenie kliniczne Pirogen jest głównie endotoksyną uwalnianą przez bakterie. Pirogen wchodzi do układu krążenia w organizmie i powoduje szereg działań niepożądanych, takich jak gorączka, dlatego test pirogenny lub endotoksyny bakteryjnej jest ważnym wskaźnikiem jakości zapewniającym bezpieczeństwo wstrzyknięcia. Nieprawidłowy wynik Klinicznie, gdy dożylnie podaje się dużą ilość infuzji, u pacjenta występują objawy dreszczy, wysokiej gorączki, pocenia się, omdlenia, wymiotów w ciągu 0,5 do 1 godziny z powodu obecności pirogenów w roztworze leku Temperatura ciała może osiągnąć 40 ° C podczas wysokiej gorączki. Mogą nawet szokować. Pozytywnym wynikiem może być choroba: względy Bacillus licheniformis enteritis Przy ustalaniu metody badania endotoksyny bakteryjnej, przy obliczaniu limitu L, MVD i MVC endotoksyny należy zwrócić uwagę na ważne parametry, takie jak maksymalna dawka dla człowieka, specyfikacje produktu, czułość odczynnika plwociny itp., Ponieważ błędy obliczeniowe doprowadzą do wszystkich dalszych wysiłków. Wszystko zawiodło. Typowe problemy to: 1. Dawka kliniczna jest ustalana niepoprawnie. Stosowana jest tylko dawka konwencjonalna. Nie uwzględnia się maksymalnej możliwej dawki i drogi podania ludzkiego ciała. We wzorze obliczania wartości granicznych L = K / M ze względu na definicję wartości K i wartości M. Rozmycie powoduje, że przypisanie wartości K i M jest niedokładne, co ostatecznie prowadzi do niepoprawnego obliczenia limitów. Na przykład, zastrzyk dorosłego pacjenta klinicznego podaje się w dawce od 40 do 80 mg na wlew dożylny, a niemowlę (trzy miesiące lub dłużej) podaje się dożylnie za każdym razem w dawce 10 do 20 mg. Limit dawki dla osoby dorosłej (masa ciała 60 kg) wynosi 3,75 EUR / mg, podczas gdy waga niemowlęcia wynosi tylko około 5 kg, obliczona granica wynosi około 1,25 EUR / mg, jeżeli maksymalna dawka na kilogram masy ciała nie jest brana pod uwagę, limit bakteryjnej endotoksyny Będzie duża różnica. 2. Limit endotoksyny bakteryjnej niektórych deklarowanych odmian nie jest obliczany na podstawie dawki klinicznej, ale jest obliczany na podstawie dawki tego samego rodzaju testu pirogennego, co powoduje błąd limitu. 3. Granica endotoksyny bakteryjnej niektórych odmian została skopiowana z zagranicznej farmakopei, a różnica między dawką kliniczną na rynku krajowym a masą chińską i obcokrajowców nie została wzięta pod uwagę, a limit został ustalony niepoprawnie. 4. Fałszywe obliczenie dziennej dawki dawkowania (wielokrotne dawkowanie w ciągu jednego dnia). 5. Gdy specyfikacja odmiany (stężenie) zmienia się, obliczenia MVD nie są korygowane. 6. Maksymalna dawka, jaką należy zastosować przy ustalaniu metody, przekroczyła dawkę zastosowaną w klinice. Proces kontroli Po pierwsze, oznaczanie miana Bakteryjne standardy endotoksyny są kalibrowane jako punkty odniesienia w celu określenia równoważnej mocy masy podstawowej. Miano na 1 mg standardu roboczego powinno wynosić nie mniej niż 2 UE, nie więcej niż 50 UE, a dane eksperymentalne powinny być jednolite i stabilne. Miano określa się w następujący sposób: stosuje się co najmniej 4 próbki każdej partii standardu roboczego i stosuje się tę samą partię odczynnika plwociny i ten sam standard. Każdy standard roboczy rozcieńcza się wodą testową endotoksyny * zgodnie z wagą i standardowym produktem. Przygotowuje się serię 2-krotnych rozcieńczeń roztworu endotoksyny i poddaje się je reakcji z odczynnikiem hydrazynowym. Gdy logarytm punktu końcowego reakcji czterech norm roboczych Gdy odchylenie standardowe (S) średniej jest mniejsze niż 0,365, obliczana jest średnia geometryczna (w ng / mg) punktów końcowych reakcji czterech standardów roboczych i punkt końcowy reakcji (w EU / mg) normy. Po drugie, przygotowanie do testu 1. Naczynia użyte w tej metodzie poddaje się obróbce w celu usunięcia wszelkich egzogennych endotoksyn, które mogą być obecne Można również stosować suszenie na sucho w temperaturze 250 ° C przez 30 minut lub 180 ° C przez 2 godziny, można także zastosować inne odpowiednie metody. Operacja testowa powinna zapobiec skażeniu mikrobiologicznemu. 2. Przed badaniem sprawdź wartość etykiety czułości odczynnika o numerze serii which, który powinien spełniać wymagania. Dodaj ilość rozpuszczalnika odczynnika hydrazynowego. Po rozpuszczeniu jest to roztwór odczynnika guanidyny i jest gotowy do użycia. 3. Rozcieńczenie próbki testowej: Gdy wartość znaku wrażliwości odczynnika o numerze serii less jest mniejsza niż wewnętrzna granica zatrucia próbki testowej, oblicz ją według następującego wzoru i użyj wody testowej endotoksyny * do rozcieńczenia odczynnika do kontroli. Współczynnik rozcieńczenia próbki testowej = X / λ X: Limit endotoksyny ograniczony (EU / ml) λ: wartość czułości testowanego środka dla testowanego środka (EU / ml) Po trzecie, sprawdź Probówka 4 × 75 mm (lub 0,1 ml / zestaw oryginalnej ampułki odczynnika plwociny) zawierająca 0,1 ml roztworu odczynnika plwociny, z których 2 są dodawane z 0,1 ml do probówki i 1 dla roboczego wzorca endotoksyny 2 λ 0,1 ml zastosowano jako probówkę kontroli dodatniej, a 0,1 ml roztworu odczynnika plwociny dodano jako probówkę kontroli ujemnej. Po delikatnym wymieszaniu probówek probówkę zamknięto i umieszczono pionowo w łaźni wodnej o temperaturze 37 ± 1 ° C na 60 ± 2 minuty. Zachowaj ostrożność, trzymając rurkę i biorąc rurkę, aby uniknąć negatywnych skutków wibracji. (4) Ocena wyników Rurkę delikatnie usunięto z łaźni wodnej i powoli odwrócono w 1800 r. Żel w rurce nie został zdeformowany. Dodatni nie został zsunięty ze ścianki rurki. (+) Żel nie mógł pozostać nietknięty i był ujemny ze ścianki rurki. (1). Jeżeli probówka 2 jest (1), uznaje się ją za zgodną z przepisami i nie należy przeprowadzać testu pirogenicznego (metoda królika). Jeśli obie lampy są (+), należy je uznać za niezgodne z przepisami. Na przykład 1 probówka w 2 probówkach to (+), a 1 probówka to (1.) Zgodnie z opisaną metodą 4 probówki są ponownie testowane. Jedna probówka w 4 probówkach jest (+), co oznacza, że ​​nie jest zgodna z przepisami. O ile w tekście nie przewidziano inaczej, artykuły badane, które spełniają wymagania, bada się metodą pirogeniczną (metoda królika) i ocenia zgodnie z wynikami. Granica bakteryjnej endotoksyny w badanym wyrobie musi być zgodna z przepisami odpowiednich artykułów. Kontrola dodatnia to (1) lub kontrola ujemna to (+), a test był nieskuteczny. Załącznik: Bakteryjny test endotoksyny na sterylną wodę do wstrzykiwań, wodę do wstrzykiwań, chlorek sodu, 5% i 10% glukozy. Nie nadaje się dla tłumu Zasadniczo brak tabu. Działania niepożądane i ryzyko Generalnie nie szkodzi.