Elektroforeza białek surowicy (SPE)

Biomolekuły, takie jak białka, przenoszą ładunek ujemny lub dodatni w buforze i przemieszczają się w kierunku anody lub katody w polu elektrycznym, które nazywa się elektroforezą. Z powodu różnych punktów izoelektrycznych, różnej wielkości cząsteczek, kształtu i stosunku ładunku do masy, różne cząsteczki białka mają różną ruchliwość elektroforetyczną, a różne białka można rozdzielić w pewnym podłożu nośnym. Powszechnie stosowane techniki elektroforezy obejmują elektroforezę w membranie octanowej celulozy, elektroforezę w żelu agarozowym, elektroforezę w żelu poliakryloamidowym i immunoelektroforezę. Ponadto szpiczak mnogi często ma M pasm globuliny między regionem beta globuliny a regionem gamma globuliny; podwójna albuminemia wykazuje podwójne pasmo albumin. Podstawowe informacje Klasyfikacja specjalistyczna: klasyfikacja kontroli wzrostu i rozwoju: badanie biochemiczne Obowiązująca płeć: czy mężczyźni i kobiety stosują post: post W tym elementy: mikroglobulina β2 w surowicy (β2-MG), α2-makroglobulina, α1-mikroglobulina Porady: na czczo 12 godzin, badanie krwi żylnej, próbki muszą być świeżą krwią. Przed badaniem powinieneś poinformować lekarza o ostatnio zażywanych lekach i ostatnich zmianach fizjologicznych. Wartość normalna Albumina z elektroforezy membranowej z octanu celulozy 0,61 ~ 0,71 (61% ~ 71%), α1 globulina 0,03 ~ 0,04 (3% ~ 4%), α2 globulina 0,06 ~ 0,10 (6% ~ 10%), beta globulina Od 0,07 do 0,11 (7% do 11%), a globula gamma od 0,09 do 0,18 (9% do 18%). Znaczenie kliniczne 1, zmniejszenie albuminy występuje w przewlekłym zapaleniu wątroby, marskości wątroby, raku wątroby i tak dalej. 2, globulina α1 (glikoproteina) wzrosła w pierwotnym raku wątroby. Zmniejsza się w ciężkim zapaleniu wątroby, marskości wątroby i śpiączce wątrobowej i jest dodatnio skorelowane z albuminami. Oznaczenie globuliny α1 w chorobie wątroby ma wartość referencyjną dla oceny ciężkości i rokowania zapalenia wątroby. Ogólnie wzrost globuliny α1 wskazuje, że stan jest łagodny, a spadek globuliny α1 wskazuje, że stan jest cięższy, aw ciężkiej niewydolności wątroby zawartość surowicy może być znacznie zmniejszona. 3. W początkowej fazie globulinowego wirusowego zapalenia wątroby α2 nie nastąpiła znacząca zmiana i stopniowo zwiększała się po tygodniu, a podostre zapalenie wątroby i ostra martwica wątroby i niewyrównana marskość wątroby uległy zmniejszeniu. 4, wzrost globuliny beta w stłuszczonej wątrobie, hiperlipidemia, zespół nerczycowy, cukrzyca z hipercholesterolemią, żółtaczka obturacyjna, nowotwory złośliwe. W chorobie wątroby cholestazy jej zawartość wzrasta, równolegle do wzrostu globuliny α2. Największe zmniejszenie zmniejszyło się w ostrym i przewlekłym zapaleniu wątroby, marskości wątroby, zwłaszcza niewyrównanej marskości wątroby i martwiczej marskości wątroby. 5, wzrost globuliny gamma w przewlekłym zapaleniu wątroby, marskości wątroby, chorobie wątroby i pęcherzyka żółciowego. Typową marskość wątroby można zaobserwować w fuzji pasm β i γ z utworzeniem mostka β-γ. Zmiany globuliny gamma u pacjentów z chorobami wątroby mogą odzwierciedlać nasilenie tego stanu. Gdy stan się poprawia, jego zawartość może stopniowo spadać do normy. Jeśli nadal spada na wysokim poziomie, oznacza to, że stan jest poważny, rokowanie jest złe, i występuje tendencja do rozwoju przewlekłego zapalenia wątroby i marskości wątroby. Ponadto można również zwiększyć infekcję, schistosomatozę, szpiczaka mnogiego, chorobę tkanki łącznej itp. Zmniejsz częstość występowania niedoboru globuliny gamma u pacjentów z częściową chemioterapią. Ponadto szpiczak mnogi często ma M pasm globuliny między regionem beta globuliny a regionem gamma globuliny; podwójna albuminemia wykazuje podwójne pasmo albumin. Niskie wyniki mogą być chorobami: wysokie wyniki żółtaczki cholestatycznej mogą być chorobami: marskość wątroby, pierwotny rak wątroby, szpiczak mnogi u osób starszych 1, post 12 godzin, badanie krwi żylnej, próbki muszą być świeżą krwią. 2. Przed badaniem powinieneś poinformować lekarza o ostatnio zażywanych lekach i ostatnich zmianach fizjologicznych. 3. Uniesienie fizjologiczne może wystąpić w następujących przypadkach: (1) Wzrost α1-globuliny można zaobserwować po 6 miesiącach ciąży. (2) Wzrost α2-globuliny można zaobserwować u niemowląt urodzonych od 1 do 6 miesięcy, z umiarkowanym wzrostem od 4 do 6 miesięcy ciąży i znaczącym wzrostem od 7 do 9 miesięcy. (3) Podwyższenie poziomu β-globuliny obserwuje się u dziecka po urodzeniu, od 4 do 6 miesięcy ciąży. (4) Wzrost γ-globuliny obserwuje się po szczepieniu szczepionką immunizacyjną. Proces kontroli 1. Dodaj bufor do zbiornika do elektroforezy i dostosuj bufor w zbiornikach po obu stronach, aby były w tej samej płaszczyźnie. 2. Przygotowanie filmu z octanu celulozy: Weź film z octanu celulozy (2 cm x 8 cm) i narysuj ołówkiem poziomą linię na 1,5 cm (jedna strona strony ujemnej) szorstkiej powierzchni, aby zrobić kropkowany znak. Po numerowaniu i wskazaniu elektrod dodatnich i ujemnych folię zanurzono w roztworze buforowym barbituran-barbital sodowy, a po wystarczającym nasyceniu (zwykle 20 minut) nadmiar buforu usunięto przez osadzenie czystej bibuły filtracyjnej. 3. Włosy z folii z octanu celulozy są przymocowane do uchwytu zbiornika elektroforezy i wyprostowane. Odmierzyć pipetą 3 ~ 5 μl niehemolitycznej surowicy za pomocą mikropipety i dodać ją wzdłuż linii poziomej na linii poziomej. Próbkę należy trzymać w pewnej odległości od krawędzi filmu, aby uniknąć deformacji pasma białka we wzorze elektroforezy. Po wniknięciu surowicy do filmu folię odwraca się. Jasną stroną skierowaną do góry, przyklej go płasko do wspornika zbiornika elektroforezy i połącz dwa końce filmu z buforem za pomocą dwuwarstwowej bibuły filtracyjnej lub czterech warstw gazy i poczekaj chwilę. 4, włącz zasilanie, zwróć uwagę na elektrody dodatnie i ujemne na folii z octanu celulozy, nie podłączaj źle. Napięcie 90 ~ 150v, prąd 0,4 ~ 0,6mA / cm (różne napięcie wymagane do elektroforezy, prąd może być inny, powinien być elastyczny), moc letnia 45 min, czas załączenia zimowego jest nieco dłuższy, około 60 min, rozszerzenie strefy elektroforezy około 25 ~ 35 mm może być. 5, barwienie: Po zakończeniu zasilania usuń folię i zanurz bezpośrednio w roztworze barwnika Lichunhong S lub w roztworze barwiącym Amino 10B, wybarwiaj przez 5 do 10 minut (w strefie albuminy), a następnie spłucz pozostałą część roztworu do płukania. Farbuj, aż tło będzie bezbarwne. 6, ilościowo: 1 metoda kolorymetryczna: wyciśnij przepłukany film, wytnij zabarwione białko w odpowiedniej probówce, dodaj 0,6 ml / L wodorotlenku sodu 6 ml w probówce z albuminą (oblicz absorbancję pomnożoną przez 2), resztę Dodaj 3 ml do każdej probówki, potrząśnij nią kilka razy i umieść w zbiorniku na wodę o temperaturze 37 ° C na 20 minut, aby kolor się wypłukał. Barwienie Amino Black 10B Absorbancję każdej probówki odczytano przy 620 nm za pomocą spektrofotometru, a następnie obliczono zawartość każdej probówki (jednoczesna kontrola pustej probówki). Po zabarwieniu Lichunhong S odciek potraktowano 0,1 mol / l wodorotlenkiem sodu, a ilość była taka sama jak powyżej. Po 10 minutach dodaj 0,6 ml 400 ml / l kwasu octowego do probówki z albuminą (pomnóż absorbancję przez 2) i dodaj 0,3 ml do innych probówek, aby zneutralizować część wodorotlenku sodu, aby uzyskać głębszy kolor. W razie potrzeby odwiruj i weź supernatant. Absorbancję każdej probówki odczytano przy 520 nm za pomocą spektrofotometru (jednoczesna kontrola ślepej próby), a następnie obliczono odpowiednią zawartość. 2 Metoda skanowania densytometru: A. Przezroczysty: Odessaj płyn do płukania na folii (aby zapobiec rozcieńczeniu przezroczystej cieczy, aby wpłynąć na przezroczysty wynik), zanurz folię w przezroczystej cieczy na 2 do 3 minut, a następnie wyjmij ją i spłaszcz w sposób ciągły. Oczyść kawałek szkła bez zadrapań (nie twórz pęcherzyków), ustaw szkiełko na chwilę, usuń nadmiar przezroczystej cieczy, umieść w piekarniku o stałej temperaturze 90 ° C do 100 ° C, piecz przez 10 do 15 minut, wyjmij i ostudź, aby W temperaturze pokojowej obszary białka przezroczyste tą metodą są wyraźne, film jest płaski i można go bezpośrednio zeskanować i trwale zakonserwować (przezroczysty za pomocą wodoronaftalenu lub ciekłej parafiny. Płukana folia powinna być wysuszona i przezroczysta, a przezroczysta folia nie może być przezroczysta) Trwa długo i jest podatny na zmarszczki). B. Ocena ilościowa skanowania: Przezroczysta folia jest umieszczana w pełni automatycznym densytometrze lub innym ciemnym polu densytometru do analizy skanowania. Nie nadaje się dla tłumu Nie Działania niepożądane i ryzyko Nie