Elektroforeza lipoprotein w surowicy i lipoprotein w surowicy

Elektroforeza lipoproteinowa jest stosowana głównie do klasyfikacji hiperlipoproteinemii, a także pomaga zrozumieć status lipidów we krwi w chorobie wieńcowej serca i lepiej ukierunkować diagnozę kliniczną i leczenie. Podstawowe informacje Klasyfikacja specjalistyczna: klasyfikacja badań sercowo-naczyniowych: badanie biochemiczne Obowiązująca płeć: czy mężczyźni i kobiety stosują post: post Wyniki analizy: Poniżej normy: Występuje w niskiej lipoproteinemii i tak dalej. Wartość normalna: Lipoproteina o bardzo niskiej gęstości: 0,06-0,3 g / l Lipoproteina o niskiej gęstości: 0-7 g / l Lipoproteina o wysokiej gęstości (męska): 0,41-0,63 g / l Wysoka gęstość Zheng ?,42-0,68 g / L Powyżej normalnego: Występuje w pierwotnej hiperlipidemii i tak dalej. Negatywne: Pozytywne: Wskazówki: Przed badaniem dieta jest lekka, a alkohol jest zabroniony. Rano sprawdź pusty żołądek. Wartość normalna Elektroforeza membranowa z octanu celulozy Cząsteczki ostropestu 0 g / l (0 mg / dl); Lipoproteina o bardzo niskiej gęstości 0,06 ~ 0,3 g / l (6 ~ 30 mg / dl); Lipoproteina o niskiej gęstości <7 g / l (<700 mg / dl); Lipoproteina o wysokiej gęstości: Mężczyzna 0,52 ± 0,11 g / l (43 ± 18 mg / dl); Kobieta 0,55 ± 0,13 g / l (47 ± 2 mg / dl). Znaczenie kliniczne 1, zwiększona: obserwowana w pierwotnej hiperlipidemii. 2, niższy: obserwowany w niskiej lipoproteinemii. Wysokimi wynikami mogą być choroby: hiperlipidemia, hiperlipoproteinemia typu II, względy choroby niedokrwiennej serca 1. Próbka: Lipoproteinę można izolować ze świeżej, niezamrożonej surowicy. Osocze nie nadaje się do elektroforezy lipoproteinowej, ponieważ pojawi się pasmo fibrynogenu. 2. Profile lipoprotein z wyraźnymi składnikami separacji są warunkiem dokładnej interpretacji. Jeśli warunki te są dobrze spełnione, elektroforeza lipoproteinowa i metoda referencyjna (ultrawirowanie) mogą być dość spójne. Precyzja każdego elementu jest inna i jest szacowana na podstawie współczynnika zmienności, który na ogół jest mniejszy niż 5%. 3. Czasami alfa-lipoproteiny znikają i / lub pojawia się wąski pasek alfa-lipoprotein. To dlatego, że są w nim wolne kwasy tłuszczowe. Akumulacja alfa-lipoprotein powoduje, że cząstki te mają równy ładunek. Wraz ze wzrostem gęstości strefy α wynik jest wysoki. W porównaniu z technikami strącania ilościowa elektroforeza lipoproteinowa jest kosztowna. Proces kontroli Natychmiast po pobraniu krwi żylnej operacja testowa: 1. Dodaj bufor do zbiornika do elektroforezy i dostosuj bufor w zbiornikach po obu stronach, aby były w tej samej płaszczyźnie. 2. Przygotowanie filmu z octanu celulozy: Weź film z octanu celulozy (2 cm x 8 cm) i narysuj ołówkiem poziomą linię na 1,5 cm (jedna strona strony ujemnej) szorstkiej powierzchni, aby zrobić kropkowany znak. Po numerowaniu i wskazaniu elektrod dodatnich i ujemnych folię zanurzono w roztworze buforowym barbituran-barbital sodowy, a po wystarczającym nasyceniu (zwykle 20 minut) nadmiar buforu usunięto przez osadzenie czystej bibuły filtracyjnej. 3. Włosy z folii z octanu celulozy są przymocowane do uchwytu zbiornika elektroforezy i wyprostowane. Odmierzyć pipetą 3 ~ 5 μl niehemolitycznej surowicy za pomocą mikropipety i dodać ją wzdłuż linii poziomej na linii poziomej. Próbkę należy trzymać w pewnej odległości od krawędzi filmu, aby uniknąć deformacji pasma białka we wzorze elektroforezy. Po wniknięciu surowicy do filmu folię odwraca się. Jasną stroną skierowaną do góry, przyklej go płasko do wspornika zbiornika elektroforezy i połącz dwa końce filmu z buforem za pomocą dwuwarstwowej bibuły filtracyjnej lub czterech warstw gazy i poczekaj chwilę. 4, włącz zasilanie, zwróć uwagę na elektrody dodatnie i ujemne na folii z octanu celulozy, nie podłączaj źle. Napięcie 90 ~ 150 V, prąd 0,4 ~ 0,6 mA / cm (wymagane napięcie innej elektroforezy, prąd może być inny, powinien być elastyczny), moc letnia 45 min, czas załączenia zimowego jest nieco dłuższy, około 60 min, ekspansja strefy elektroforezy około 25 ~ 35 mm może być. 5, barwienie: Po zakończeniu zasilania usuń folię i zanurz bezpośrednio w roztworze barwnika Lichunhong S lub w roztworze barwiącym Amino 10B, wybarwiaj przez 5 do 10 minut (w strefie albuminy), a następnie spłucz pozostałą część roztworu do płukania. Farbuj, aż tło będzie bezbarwne. 6, ilościowo: 1 metoda kolorymetryczna: wyciśnij przepłukany film, wytnij zabarwione białko w odpowiedniej probówce, dodaj 0,6 ml / L wodorotlenku sodu 6 ml w probówce z albuminą (oblicz absorbancję pomnożoną przez 2), resztę Dodaj 3 ml do każdej probówki, potrząśnij nią kilka razy i umieść w zbiorniku na wodę o temperaturze 37 ° C na 20 minut, aby kolor się wypłukał. Barwienie Amino Black 10B Absorbancję każdej probówki odczytano przy 620 nm za pomocą spektrofotometru, a następnie obliczono zawartość każdej probówki (jednoczesna kontrola pustej probówki). Po zabarwieniu Lichunhong S odciek potraktowano 0,1 mol / l wodorotlenkiem sodu, a ilość była taka sama jak powyżej. Po 10 minutach dodaj 0,6 ml 400 ml / l kwasu octowego do probówki z albuminą (pomnóż absorbancję przez 2) i dodaj 0,3 ml do innych probówek, aby zneutralizować część wodorotlenku sodu, aby uzyskać głębszy kolor. W razie potrzeby odwiruj i weź supernatant. Absorbancję każdej probówki odczytano przy 520 nm za pomocą spektrofotometru (jednoczesna kontrola ślepej próby), a następnie obliczono odpowiednią zawartość. 2 Metoda skanowania densytometru: A. Przezroczysty: Odessaj płyn do płukania na folii (aby zapobiec rozcieńczeniu przezroczystej cieczy, aby wpłynąć na przezroczysty wynik), zanurz folię w przezroczystej cieczy na 2 do 3 minut, a następnie wyjmij ją i spłaszcz w sposób ciągły. Wyczyść i nie zarysuj szkiełek (nie twórz bąbelków), ustaw je na chwilę, usuń nadmiar przezroczystej cieczy, umieść w piekarniku w stałej temperaturze 90-100 ° C, piecz przez 10-15 minut, wyjmij i ostudź do temperatury pokojowej. Obszary białka przezroczyste tą metodą są wyraźne, folia jest płaska, i można ją bezpośrednio zeskanować i trwale zakonserwować (przezroczysta za pomocą wodoronaftalenu lub ciekłej parafiny. Płukana folia powinna być wysuszona i przezroczysta, a przezroczystej folii nie można przechowywać. Długie i łatwe do marszczenia). 2 Analiza ilościowa skanowania: Przezroczysta folia jest umieszczana w pełni automatycznym densytometrze lub innym ciemnym polu densytometru do analizy skanowania. Nie nadaje się dla tłumu Nieodpowiedni ludzie: Zasadniczo nie ma osób, które nie są odpowiednie. Działania niepożądane i ryzyko 1, miejscowy krwotok podskórny: po pobraniu krwi należy naciskać przez wystarczający czas, szczególnie z tendencją do krwawień, aby nie powodować podskórnego sączenia się i zasinienia z powodu braku krzepnięcia krwi. 2, infekcja: uwaga na aseptyczną operację podczas pobierania krwi żylnej, aby nie powodować lokalnej infekcji.