apolipoproteina AⅠ

Apolipoproteina jest frakcją lipoprotein w osoczu zawierającą różne lipoproteiny i kilka różnych specyficznych apolipoprotein. Do tej pory odkryto ponad 20 rodzajów apolipoprotein. Wśród nich są głównie aPOA1, AII, B-100, B48, CI, CII, CIII, D, E i tym podobne. Podstawowe informacje Klasyfikacja specjalistyczna: klasyfikacja badań sercowo-naczyniowych: badanie biochemiczne Obowiązująca płeć: czy mężczyźni i kobiety stosują post: post Wskazówki: Aktywnie współpracuj z lekarzem podczas badania. Wartość normalna Metoda immunoturbidymetryczna wynosiła od 1,01 do 1,32 g / l. Immunoelektroforeza rakietowa 1,02 ~ 1,36 g / l Znaczenie kliniczne Redukcja: choroba niedokrwienna serca, cukrzyca, zespół nerczycowy, dziedziczny niedobór ApoA-I (choroba Tangera), rodzinne niskie stężenie alfa-lipoproteinemii, choroba rybie oko, poważne niedożywienie, aktywne zapalenie wątroby i zaburzenia czynności wątroby. Niskie wyniki mogą stanowić choroby: choroba niedokrwienna serca, środki ostrożności dotyczące zapalenia wątroby 1. Metoda mętności immunoturbidymetrycznej: 1 W odniesieniu do surowicy odpornościowej: Test turbidymetryczny ma wyższe wymagania w stosunku do surowicy odpornościowej niż inne metody. Metoda turbidymetryczna jest korzystnie przeciwciałem poliklonalnym. Anty-surowica musi być wolna od anty-surowicy. Konieczne jest przywiązywanie dużej wagi do apoAI ekstrahowanego z ludzkiej surowicy, aby osiągnąć immunopurity, czystość chromatograficzną i elektroforezę, co nie jest możliwe w ogólnym laboratorium. Miano surowicy odpornościowej (miano) nie powinno być mniejsze niż 16. Obecnie w niektórych krajowych odczynnikach komercyjnych surowica apoAI ma bardzo niskie miano, dlatego należy zachować ostrożność przy zakupie zestawu. Jeśli nie masz doświadczenia w określaniu jakości surowic odpornościowych przed zakupem, poproś wykwalifikowaną jednostkę o jej zidentyfikowanie. 2 Górną próbkę standardową (surowicę) rozcieńcza się 200 razy do pracy ręcznej (100 μl próbki), a jeśli istnieje precyzyjny próbnik, można ją rozcieńczać 20 razy (przy użyciu 10 μl). Aby dostosować się do warunków różnych laboratoriów (takich jak różne typy zautomatyzowanych instrumentów), należy zwrócić uwagę na proporcję antygenu-przeciwciała przy dokonywaniu odpowiednich modyfikacji.Należy zauważyć, że w układzie reakcyjnym nie powinno być nadmiaru antygenu, a liniowa górna granica nie powinna być niższa niż 2,5 g / l. Innymi słowy, ilość surowicy odpornościowej musi być wystarczająca, w przeciwnym razie wyniki są niskie, gdy poziom apoAI jest wysoki w próbce. Obecnie niektóre domowe zestawy leków mają nie tylko niskie miano przeciw surowicy, ale dawka próbek w operacji jest zbyt duża (np. 3 ~ 5 μl), przeciwciało jest oczywiście niewystarczające, a wyniki pomiaru są nieuchronnie niedokładne. 3 Aby osiągnąć dokładny pomiar, wyniki obliczeń krzywej kalibracji należy wykonać w pomiarze zmętnienia apoAI i B (metoda punktu końcowego). Pewne stężenie (niskie dawkowanie próbki) (X) jest zasadniczo liniowe z mętnością (Y), a regresja liniowa oblicza pewien punkt przecięcia na osi Y (wartość A <0,1), więc odchylenie wyniku obliczenia jest obliczane przez kalibrację jednopunktową. Większe, zmierzone wyniki nie mogą dokładnie odzwierciedlać poziomu wysokiego (wysoki niski, niski wysoki). Nie zaniedbuj dokładności pomiaru ze względu na prostotę metody jednopunktowej. Niezależnie od rodzaju zautomatyzowanego przyrządu, musisz najpierw wypróbować krzywą kalibracji. Jeżeli test powtarza się w warunkach instrumentu i w określonych warunkach, przecięcie linii regresji nie jest oczywiste, wówczas można zastosować metodę kalibracji jednopunktowej. Gdy ilość próbki wynosi od 3 do 5 μl, nawet jeśli ilość surowicy odpornościowej jest zwiększona, stężenie i zmętnienie nie są liniowe i można je obliczyć dopiero po przekształceniu krzywej liniowo. 4 Głównym czynnikiem zakłócającym jest zmętnienie samej surowicy (takiej jak surowica wysokotłuszczowa), a metody obróbki wstępnej, takie jak ultrawirowanie lub hydroliza lipazy, nie są praktyczne. Wpływ zmętnienia środkami powierzchniowo czynnymi jest również ograniczony, dlatego w teście należy wykonać ślepą probówkę. Oprócz dwupunktowej metody stosowanej w automatycznej analizie błędem jest ręczne użycie pojedynczego odczynnika bez odejmowania próbki ślepej. Aby zmniejszyć wpływ efektów matrycy na odpowiedź mętności, jako kalibrator należy użyć surowicy o stałej wartości. Ponadto należy wykluczyć zakłócenia, takie jak cząsteczki kurzu i mętne rysy naczynia. 5 Niektóre zestawy komercyjne (w tym niektóre produkty importowane) z niedokładnymi wartościami surowicy kalibracyjnej są ważnym źródłem błędów. 2. Elektroforeza rakietowa: 1 Stosunek rozcieńczenia antygenu i ilość surowicy odpornościowej należy dobrać tak, aby pik rakiety był wyraźny, nachylenie krzywej kalibracji było umiarkowane, a linia była odpowiednia. Metoda jednocześnie mierzy apoAI i apoB i powinna regulować ilość dwóch surowic odpornościowych, tak aby wysokość pików dwóch była różna, a wysokość piku apoB była nie mniejsza niż 1 cm. 2 Różne rodzaje surowicy odpornościowej (takie jak króliki i owce) są testowane po równorzędnej cenie, a wyniki będą różne. Test apoAI jest korzystnie króliczą surowicą odpornościową. Gdy stosuje się surowicę królika, kształt piku jest ostry, a pik wytwarzany przez surowicę owczą jest gruby, wierzchołek piku jest okrągły i tępy, a czasami przed szczytem pojawia się obraz ducha. Nachylenie krzywej kalibracyjnej dla surowicy kalibracyjnej jest również inne. Jednak bez względu na zastosowaną surowicę wyniki ilościowe nie różnią się zbytnio. 3 Elektroforeza w pewnych warunkach, wysokość piku surowicy kalibracyjnej dla różnych rozcieńczeń nie zmieni się znacząco, a nachylenie krzywej kalibracji jest zasadniczo takie samo. Jeżeli wysokość piku próbki przekracza zakres krzywej kalibracji, współczynnik rozcieńczenia próbki należy wyregulować i ponownie przetestować. CV międzypokładowe wynosi zwykle mniej niż 5%. 4 Wyniki elektroforezy rakietowej można zaobserwować przez barwienie lub bezpośrednią wizualną obserwację piku rakiety. Ten pierwszy wykorzystuje mniej próbek i oszczędza surowicę odpornościową, ale jeśli próbki i surowica odpornościowa zostaną odpowiednio zwiększone, wygodniej jest nie plamić. Zastosowana agaroza powinna być standardowa elektroosmotyczna lub hipotoniczna, a dodanie odpowiedniej ilości dekstranu lub glikolu polietylenowego do żelu sprawi, że szczyt rakiety będzie wyraźniejszy. 5 Pomiar piku rakiety może obliczyć powierzchnię lub wysokość piku, a obszarem jest wysokość piku pomnożona przez szerokość piku (szerokość w połowie wysokości piku). Dokładność pomiaru wynosi korzystnie do 0,1 mm. Należy stosować mechaniczne lub elektroniczne urządzenia wzmacniające. Wysokość piku w zakresie krzywej standardowej wynosi korzystnie od 1 do 4 cm. 6 Ta metoda ma zastosowanie do analizy niewielkiej ilości próbek. Nadaje się również do oznaczania apoAII, CI, CII, CIII, D, E i Lp (a). Proces kontroli Elektroforeza rakietowa 1 płytka do nalewania: 10 g / l agarozy 10 ml na płytkę, stopić we wrzącej łaźni wodnej, wymieszać na zimno do 50 ~ 55 ° C po dodaniu surowicy odpornościowej apoAI 50 μl, surowicy odpornościowej apoB 8 μl (ilość w zależności od miana surowicy odpornościowej) Szybko wymieszaj i zalej szklaną płytkę wstępnie ustawioną na platformie wodnej, ochłodź i umieść w 4 ° C, a następnie dziurkuj otwory po 20 min. Otwór znajduje się na końcu katody płytki, średnica otworu wynosi 3 mm, odstęp otworów wynosi co najmniej 5 mm, a objętość otworu wynosi 5 μl. Umieścić płytkę w zbiorniku do elektroforezy i przełożyć bibułą filtracyjną. 2 rozcieńczony antygen: surowicę kalibracyjną rozcieńczono do 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 i 1: 400 (dla krzywej kalibracji) 0,15 mol / l roztworu NaCl, a próbkę surowicy rozcieńczono 1: 200. Ustaw lodówkę w 4 ° C na nie więcej niż 3 dni. 3 Ładowanie: W stanie niskiego prądu (10 mA / płytkę) rozcieńczyć utrwaloną surowicę i próbki, aby zaabsorbować 5 μl (dokładnie), i dobrze dodać do próbki żelu agarozowego. Każda tablica musi spełniać szereg norm. 4 moc: stały przepływ 24mA / płytkę, napięcie na zaciskach 6 ~ 8V / cm, chłodzenie bieżącą wodą w celu utrzymania agarozy 15 ° C, elektroforeza 3 ~ 4h. 5 pozbawione białka białko i suchy film: płytkę agarozową po elektroforezie zanurzono w 0,15 mol / l NaCl na 30 minut, a film umieszczono na folii poliestrowej, a klej pochłonięto przez wielowarstwowy papier filtracyjny pod delikatnym ciśnieniem. Zwilżyć, a następnie wysuszyć razem bibułę filtracyjną, folię i folię poliestrową lub wysuszyć dmuchawą na gorące powietrze Po wyschnięciu folia naturalnie oddzieli się od bibuły filtracyjnej i folii poliestrowej. 6 barwienie: Film agarozowy zanurzono w roztworze barwiącym na 20 do 30 minut. 7 Odbarwianie: Namocz barwioną folię roztworem odbarwiającym, aż szczyt rakiety będzie wyraźny, a tło będzie zasadniczo bezbarwne. Może być zaciśnięty w dwóch kawałkach celofanu w wodzie i może być przechowywany przez długi czas po wyschnięciu. Można go również namoczyć pod bieżącą wodą, aby usunąć tło. Uwaga: 1 Stosunek rozcieńczenia antygenu i ilość surowicy odpornościowej należy dobrać tak, aby pik rakiety był wyraźny, nachylenie krzywej kalibracji było umiarkowane, a linia była odpowiednia. Metoda jednocześnie mierzy apoAI i apoB i powinna regulować ilość dwóch surowic odpornościowych, tak aby wysokość pików dwóch była różna, a wysokość piku apoB była nie mniejsza niż 1 cm. 2 Różne rodzaje surowicy odpornościowej (takie jak króliki i owce) są testowane po równorzędnej cenie, a wyniki będą różne. Test apoAI jest korzystnie króliczą surowicą odpornościową. Gdy stosuje się surowicę królika, kształt piku jest ostry, a pik wytwarzany przez surowicę owczą jest gruby, wierzchołek piku jest okrągły i tępy, a czasami przed szczytem pojawia się obraz ducha. Nachylenie krzywej kalibracyjnej dla surowicy kalibracyjnej jest również inne. Jednak bez względu na zastosowaną surowicę wyniki ilościowe nie różnią się zbytnio. 3 Elektroforeza w pewnych warunkach, wysokość piku surowicy kalibracyjnej dla różnych rozcieńczeń nie zmieni się znacząco, a nachylenie krzywej kalibracji jest zasadniczo takie samo. Jeżeli wysokość piku próbki przekracza zakres krzywej kalibracji, współczynnik rozcieńczenia próbki należy wyregulować i ponownie przetestować. CV międzypokładowe wynosi zwykle mniej niż 5%. 4 Wyniki elektroforezy rakietowej można zaobserwować przez barwienie lub bezpośrednią wizualną obserwację piku rakiety. Ten pierwszy wykorzystuje mniej próbek i oszczędza surowicę odpornościową, ale jeśli próbki i surowica odpornościowa zostaną odpowiednio zwiększone, wygodniej jest nie plamić. Zastosowana agaroza powinna być standardowa elektroosmotyczna lub hipotoniczna, a dodanie odpowiedniej ilości dekstranu lub glikolu polietylenowego do żelu sprawi, że szczyt rakiety będzie wyraźniejszy. 5 Pomiar piku rakiety może obliczyć powierzchnię lub wysokość piku, a obszarem jest wysokość piku pomnożona przez szerokość piku (szerokość w połowie wysokości piku). Dokładność pomiaru wynosi korzystnie do 0,1 mm. Należy stosować mechaniczne lub elektroniczne urządzenia wzmacniające. Wysokość piku w zakresie krzywej standardowej wynosi korzystnie od 1 do 4 cm. 6 Ta metoda ma zastosowanie do analizy niewielkiej ilości próbek. Nadaje się również do oznaczania apoAII, CI, CII, CIII, D, E i Lp (a). Nie nadaje się dla tłumu Nieodpowiedni ludzie: Zasadniczo nie ma osób, które nie są odpowiednie. Działania niepożądane i ryzyko Ogólnie rzecz biorąc, badanie to nie ma zbyt wielu działań niepożądanych i nie ma dużego wpływu na organizm.