Test toksyczności limfocytów

Gdy określone efektorowe limfocyty T kontaktują się z komórkami docelowymi in vitro, mogą wykazywać właściwości niszczące i lizujące komórki docelowe, zwane cytotoksycznością. Komórka docelowa może być komórką nowotworową lub inną komórką tkankową. Sposób, w jaki limfocyty zabijają komórki docelowe, może niszczyć komórki docelowe poprzez bezpośrednie zabijanie lub produkcję limfokin. Ta metoda badawcza obejmuje dwie metody: badanie morfologiczne i uwalnianie izotopów. Ten pierwszy nie wymaga specjalnego wyposażenia i wygodnie jest użyć mikroskopu do zliczenia liczby przeżywalności komórek docelowych. Ten ostatni wykorzystuje 125I-dezoksyurydynę lub 51Cr do znakowania komórek docelowych, a uwalnianie radioizotopów jest stosowane jako wskaźnik uszkodzenia komórek docelowych. Ta metoda wymaga specjalnego sprzętu, takiego jak miernik scyntylacyjny do cieczy, ale można go automatycznie zmierzyć, a wynik jest powtarzalny. Podstawowe informacje Klasyfikacja specjalistyczna: Klasyfikacja badań onkologicznych: badanie krwi Obowiązująca płeć: czy mężczyźni i kobiety stosują post: post Wyniki analizy: Poniżej normy: Wartość normalna: Nie Powyżej normalnego: Negatywne: Normalne Pozytywne: Obecnie brak odpowiednich danych. Wskazówki: utrzymuj normalny stan umysłu. Wartość normalna Metodę badania morfologicznego porównano między grupą testową a grupą kontrolną, p <0,05. Metoda 125I lub 51Cr P> 0,05. Znaczenie kliniczne Ten test może być stosowany jako wskaźnik do pomiaru odporności komórkowej pacjentów z nowotworem in vitro; może również określać rokowanie pacjentów z nowotworem poprzez pomiar zdolności komórek odpornościowych do zabijania komórek nowotworowych; a także może identyfikować funkcjonalne subpopulacje limfocytów. Pozytywnymi wynikami mogą być choroby: przeszczep nerki, względy lekowego zapalenia skóry (1) W celu pomiaru zdolności badanych limfocytów do atakowania komórek nowotworowych, komórki nowotworowe i limfocyty podmiotu dodano do grupy eksperymentalnej, a docelowe komórki nowotworowe i pożywkę hodowlaną dodano do grupy kontrolnej. Jeśli w odporność komórkową zaangażowane są inne próbki, takie jak antygeny nowotworowe lub immunogeny, leki terapeutyczne itp., Należy dodać trzecią grupę W tej grupie testowej najpierw limfocyty reagują z badaną próbką, a następnie są myte, a następnie obserwowane. Cytotoksyczny wpływ uczulonych limfocytów na docelowe komórki nowotworowe. Dwie pierwsze grupy stały się w tej chwili grupą kontrolną. (2) Wskaźnik przeżycia komórek docelowych i limfocytów powinien być w optymalnym stanie, na ogół> 90%. (3) Surowicę cielęcą dodaną do roztworu hodowlanego należy najpierw zbadać pod kątem toksyczności. (4) Liczba zaszczepionych komórek docelowych i limfocytów powinna być dokładna. (5) Grupa eksperymentalna i grupa kontrolna powinny być umieszczone na tej samej płycie, aby zmniejszyć błąd. (6) pH roztworu kultury wynosi najkorzystniej 6,8 do 7,2. Proces kontroli (1) Zaszczepianie komórek docelowych: Wybierz komórki nowotworowe, które mogą rosnąć adherentnie, przemyj je roztworem Hanka, trawi 2,5 g / l trypsyny przez 2–3 minuty, wlewa roztwór trypsyny (komórki są nadal przymocowane do ścianki butelki) i używa Hanka. Komórki delikatnie przemyto 3 razy i wlano roztwór Hanka. Przylegające komórki przemyto roztworem RPMI1640 zawierającym 10% do 20% surowicy cielęcej, i osad komórek usunięto przez filtrację przez filtr 100 mesh, aby przygotować zawiesinę pojedynczych komórek nowotworowych 1 x 106 / ml, a zawiesinę komórek pipetowano za pomocą zakraplacza. Upuść na 40-studzienkową płytkę hodowlaną, 1 kroplę na studzienkę (około 100-150 komórek) i umieść płytkę w inkubatorze z 5% CO2 w 37 ° C na 20 godzin. Płytkę hodowlaną wyjęto i roztwór do hodowli usunięto. Po barwieniu Wrighta zliczono średnią liczbę przylegających komórek nowotworowych na 10 studzienek. Jeśli różnica między dwiema grupami wynosiła> 1/3, błąd był zbyt duży, aby go użyć, a błąd nie był duży. Płytkę hodowlaną można formalnie przetestować. (2) Rozdzielanie limfocytów: weź antykoagulację heparyną 3 ml badanego, rozdziel limfocyty roztworem ługującym sacharozy-diazepamu, następnie przemyj je roztworem Hanka 3 razy, a następnie wymieszaj z roztworem RPMI1640 (2 ~ 3) ) × 105 / ml zawiesiny komórek. (3) Test cytotoksyczności: limfocyty i komórki docelowe miesza się w stosunku 200: 1 i (2 ~ 3) × 104 limfocytów (w objętości 0,1 ml) dodaje się do każdej studzienki i dodaje się około 20% surowicy cielęcej na studzienkę. 0,1 ml roztworu RPMI 1640 umieszczono w inkubatorze z 5% CO2 w 37 ° C na 40 godzin. Płytkę hodowlaną wyjęto i roztwór hodowlany usunięto Po barwieniu Wrighta liczbę komórek docelowych pozostających na dnie płytki zliczono pod mikroskopem. Nie nadaje się dla tłumu Nie ma specjalnych tabu. Działania niepożądane i ryzyko Nic