beta-lactamase

A β-lactamase refere-se a uma enzima inativadora capaz de catalisar a hidrólise de uma ligação amida em um anel β-lactâmico em uma biomolécula. A produção bacteriana de β-lactamase é o principal mecanismo de resistência bacteriana aos antibióticos β-lactâmicos. Os antibióticos Β-lactamases, incluindo penicilinas, cefalosporinas, β-lactâmicos atípicos, etc., são os mais amplamente utilizados, os mais amplamente estudados e os mais amplamente utilizados. Informação básica Classificação especializada: Inspeção e classificação de doenças infecciosas: exame bioquímico Sexo aplicável: se homens e mulheres aplicam jejum: não jejuar Dicas: De acordo com o estado nutricional de todo o corpo, leite, ovos, frutas, leite de soja, etc. são dados na refeição. Valor normal O tipo e a proporção da flora no corpo são normais e o corpo humano está em equilíbrio dinâmico. Significado clínico O mecanismo de resistência bacteriana: 1. Enzimas inativadas - principalmente beta-lactamases (mais de 200 tipos), que tornam os antibióticos ineficazes. 2, mudanças alvo - o alvo muda com antibióticos, de modo que o papel dos antibióticos diminuiu. 3, a mudança da permeabilidade da membrana bacteriana - de modo que os antibióticos não podem ou raramente entram na bactéria para atingir o alvo. O desenvolvimento de resistência bacteriana de cepas hospitalares (como Enterobacteriaceae, Staphylococcus aureus) a cepas extra-hospitalares (como Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Neisseria gonorrhoeae), resistência à resistência a uma única droga A droga se desenvolve para resistência a múltiplas drogas, como a resistência a penicilina contra Staphylococcus aureus, e a estirpe ESBL é resistente a uma variedade de antibióticos comumente usados. Resultados anormais Enterobacteriaceae, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Neisseria gonorrhoeae e outras infecções, mas o uso de antibióticos não é eficaz ou o efeito não é óbvio, as bactérias produzem resistência aos medicamentos. As pessoas que necessitam de exame têm pacientes com as condições acima. Precauções Multidão inadequada: Não. Proibido antes do exame: Preste atenção aos hábitos alimentares normais e preste atenção à higiene pessoal. Exigências para inspeção: cooperar ativamente com o doutor. Processo de inspeção Detecção de β-lactamase Em espécimes clínicos, Staphylococcus aureus, Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae e algumas cepas de Enterococcus foram recentemente encontrados como resistentes à penicilina e à ampicilina. Uma vez que a estirpe acima produz p-lactamase, o antibiótico supramencionado é hidrolisado. Os seguintes métodos são usados ​​para detectar a enzima: 1. Método de desaparecimento da atividade microbiana Este método é uma cepa indicadora de Bacillus subtilis que é altamente sensível à penicilina.Se a cepa a ser testada produz β-lactamase e destrói a penicilina, há crescimento de Bacillus subtilis em ambos os lados da linha, caso contrário, o indicador ainda é muito grande. Anel antibacteriano. 2, determinação de amido-iodo A beta lactamase destrói o anel beta-lactâmico, e o iodo combina-se com o anel beta-lactâmico aberto para converter o complexo amido-iodo azul em incolor. MÉTODOS: Preparou-se uma suspensão de penicilina 6000 μg / ml com solução tampão fosfato pH 6,0, colocou-se 0,1mL da solução em uma microdiluição e várias colônias foram selecionadas e suspensas, agitadas por 30 min e deixadas em repouso à temperatura ambiente por 1 h. Adicione 2 gotas de solução de amido, adicione 1 gota de solução de iodo, misture e observe a mudança de cor imediatamente.Quando a pessoa positiva adiciona solução de iodo, ela aparecerá azul imediatamente, como desaparecendo azul dentro de 10min, sugerindo que as bactérias produzem β-interno Amidase. 3. Medição ácida A penicilina é hidrolisada pela β-endase ao ácido da penicilina, o valor do pH cai abaixo de 6,8, com indicador vermelho de fenol, da cor vermelha (roxa) (solução estoque: tampão citrato pH 8,5) → amarelo (pH 6,8 O seguinte). 4, reação de cor cefalosporina tiofeno O anel β-lactâmico de Nitrocefin é aberto por β-lactamase e a matriz muda de amarelo para vermelho. Método líquido: dissolveu-se 10 mg de cefa nitrotiofeno em 1 ml de dimetilsulfóxido e depois diluiu-se 1:20 com 0,1 mol / L de PBS (pH 7,0) e finalmente a concentração foi de 500 µg / ml e a solução era amarela ou laranja pálida. Armazene 4 a 10 ° C por várias semanas. Pegue 0,05 ml da solução no poço da placa de micro-diluição ou no tubo de ensaio pequeno, escolha a colônia do teste, faça uma suspensão espessa, misture com o líquido da matriz no furo côncavo e troque o nitrotiofeno da cefalosporina de amarelo para a temperatura ambiente em temperatura ambiente por 10 a 30 minutos. Vermelho é positivo Se a cor não for óbvia, a observação pode ser prolongada por 6 horas. Tem sido relatado que os resultados do método de papel para a detecção de β-lactamase por Haemophilus influenzae e Neisseria gonorrhoeae são precisos, mas para algumas cepas, uma pequena quantidade de β-lactamase, que está fortemente ligada às células bacterianas, como a saprophytic Staphylococcus, etc., melhor pelo método líquido. O controle de qualidade é aplicado a qualquer um dos métodos de detecção acima. Não é adequado para a multidão Geralmente não há tabus. Reações adversas e riscos Geralmente sem complicações e danos.