quilomícrons

Os quilomícrons são as maiores partículas de lipoproteínas no plasma humano, e CM é a maior parte do TG dietético fornecido do local de absorção do intestino delgado para a circulação sistêmica. A velocidade de eliminação do CM é rápida, a meia-vida é de 10 min e a pessoa normal não consegue detectá-la após 12 horas em jejum.Quando a eletroproteína é a lipoproteína, o CM está na origem. Deve-se notar que a amostra deve ser fresca durante a eletroforese de lipoproteína sérica e não deve ser armazenada congelada. Informação básica Classificação de especialista: classificação do exame digestivo: exame de sangue Sexo aplicável: se homens e mulheres aplicam jejum: jejum Resultados da análise: Abaixo do normal: Valor normal: Não Acima do normal: Negativo: Normal Positivo: Hiperlipoproteinemia tipo I, hiperlipoproteinemia tipo V. Dicas: Antes do exame, a dieta é leve e o álcool é proibido. Valor normal Negativo Significado clínico Hiperlipoproteinemia positiva tipo I, hiperlipoproteinemia tipo V. Os resultados positivos podem ser doenças: hiperlipoproteinemia tipo I, hiperlipoproteinemia tipo V precauções 1. Método de turbidez imunoturbidimétrica: (1) Em relação ao anti-soro: O ensaio turbidimétrico tem maiores requisitos de anti-soro do que outros métodos. O método turbidimétrico é de preferência um anticorpo policlonal. O anti-soro deve estar livre de anti-soro. Deve prestar muita atenção à apo AI extraída do soro humano para obter imunopuridade, pureza cromatográfica e pureza eletroforética, o que não é possível no laboratório geral. O título do anti-soro (título) não deve ser inferior a 16. Atualmente, em alguns reagentes comerciais domésticos, o anti-soro apoA-I tem um título muito baixo, portanto, deve-se ter cuidado ao comprar o kit. Se você não tem experiência em identificar a qualidade dos anti-soros antes da compra, você deve pedir à unidade qualificada para identificá-la. (2) A amostra no método superior (soro) é diluída 200 vezes para operação manual (100 μl de amostra) e, se for um amostrador de precisão, pode ser diluída 20 vezes (utilizando 10 μl). A fim de se adaptar às condições de diferentes laboratórios (como os diferentes tipos de instrumentos automatizados), deve ser dada atenção à proporção de antígeno-anticorpo ao fazer as devidas modificações.Não deve haver excesso de antígeno no sistema de reação, e o limite superior linear não deve ser inferior a 2,5g / L. Em outras palavras, a quantidade de anti-soro deve ser suficiente, caso contrário, os resultados são baixos quando a apoA-I é alta na amostra. No momento, alguns kits de medicamentos domésticos não só têm baixo título anti-soro, mas a dosagem dos espécimes na operação é muito grande (como 3 ~ 5μl), o anticorpo é obviamente insuficiente, e os resultados medidos são inevitavelmente imprecisos. (3) Para obter uma medição precisa, os resultados do cálculo da curva de calibração devem ser feitos na medição turbidimétrica da apoA-I e B (método do ponto final). Uma certa faixa (baixa dosagem de amostra) concentração (X) é basicamente linear com turbidez (Y), e regressão linear calcula uma certa intercepção no eixo Y (valor A <0,1), então o desvio do resultado do cálculo é calculado pela calibração de ponto único. Maior, os resultados medidos não podem refletir com precisão o nível de alta (alta baixa, baixa alta). Não negligencie a precisão da medição devido à simplicidade do método de ponto único. Independentemente do tipo de instrumento automatizado, você deve primeiro tentar a curva de calibração. Se o teste for repetido sob as condições do instrumento e as condições específicas, a interceptação da linha de regressão não é óbvia, então o método de calibração de ponto único pode ser usado. Quando a quantidade da amostra é de 3 a 5 µl, mesmo que a quantidade de anti-soro seja aumentada, a concentração e a turbidez não são lineares, e só podem ser calculadas após a curva ser linearmente convertida. (4) O principal fator de interferência é a turbidez do próprio soro (como o soro hiperlipídico), e os métodos de pré-tratamento, como a ultracentrifugação ou a hidrólise da lipase, não são práticos. O efeito da turbidez com surfactantes também é limitado, então um tubo branco deve ser feito no ensaio. Além do método de dois pontos usado na análise automatizada, é um erro usar manualmente um único reagente sem subtrair a amostra em branco. Para reduzir o efeito dos efeitos da matriz na resposta de turbidez, o soro de valor fixo deve ser usado como calibrador. Além disso, interferências como partículas de poeira e arranhões de pratos turvos devem ser excluídos. (5) Alguns kits comerciais (incluindo alguns produtos importados) possuem valores de soro de calibração imprecisos, que são importantes fontes de erro. 2. Eletroforese de foguete: (1) A seleção do fator de diluição do antígeno e a quantidade de anti-soro devem ser claros, a inclinação da curva de calibração é moderada e a curva de alinhamento é apropriada. O método mede simultaneamente apoA-I e apoB, e a quantidade dos dois antissoros deve ser ajustada de modo que as alturas dos picos dos dois sejam diferentes, e a altura do pico da apoB não seja inferior a 1 cm. (2) Anti-soros de diferentes tipos de fontes (como coelhos e ovelhas), testados pelo preço equivalente, os resultados serão diferentes. O ensaio da apo AI é de preferência anti-soro de coelho. Quando o soro de coelho é usado, o formato do pico é acentuado e o pico produzido pelo soro de ovelha é espesso, a ponta do pico é redonda e romba e, às vezes, uma imagem fantasma aparece antes do pico. A inclinação da curva de calibração para o soro de calibração também é diferente. No entanto, não importa qual anti-soro é usado, os resultados quantitativos não são muito diferentes. (3) Eletroforese sob certas condições, a altura do pico do soro de calibração de diferentes diluições não mudará significativamente, e a inclinação da curva de calibração é basicamente a mesma. Se a altura do pico da amostra exceder a faixa da curva de calibração, o fator de diluição da amostra deve ser ajustado e testado novamente. O CV inter-board é tipicamente inferior a 5%. (4) Os resultados da eletroforese de foguete podem ser vistos por coloração ou observação visual direta do pico do foguete. O primeiro usa menos espécimes e salva anti-soro, mas se os espécimes e anti-soro forem apropriadamente aumentados, é mais conveniente não manchar. A agarose usada deve ser eletroosmótica ou hipotônica padrão.A adição da quantidade adequada de dextrano ou polietilenoglicol ao gel tornará o pico do foguete mais claro. (5) A medição do pico do foguete pode calcular a área ou a altura do pico, e a área é a altura do pico multiplicada pela largura do pico (a largura na meia altura do pico). A precisão da medição é de preferência até 0,1 mm. Equipamentos mecânicos ou eletrônicos de amplificação devem ser usados. A altura do pico no intervalo da curva padrão é de preferência de 1 a 4 cm. (6) Esta lei aplica-se à análise de um pequeno número de espécimes. Também adequado para determinação de apoAII, CI, CII, CIII, D, E e Lp (a). Processo de inspeção 1. Método de turbidez imunoturbidimétrica: (1) A amostra deve ser um soro de separação rápida que pode ser separado no tempo, podendo ser armazenado em um refrigerador de 2 a 6 ° C, medido em 1 semana, e armazenado a -20 ° C por meio ano. (2) Ao usar um analisador totalmente automático, a proporção de antígeno para anticorpo e tempo de reação deve ser razoavelmente selecionada de acordo com os diferentes parâmetros de projeto do instrumento. Também pode ser usado como um nefelômetro de taxa de dispersão CM, como o turbidímetro Beckman ICS ou o sistema proteinarray). (3) Instrumentos utilizados no método manual: fotômetro de precisão com filtro de 340nm (ou divisor), o volume da amostra é preferencialmente de 0,5ml (para economizar antisoro), de preferência com copo de fluxo, a diluição da amostra é melhor diluída Amostrador corrigido. (4) Tratamento de amostras: A amostra de soro e o soro de controlo de qualidade são diluídos 1: 200 com um diluente de amostra, ou seja, primeiro diluídos 1:20 (5,0 μl de soro + 95 μl de diluente) e depois diluídos 1:10 ( Excesso de soro 1:20 para determinação de apoB). Depois de misturar, deixou-se repousar entre 25 e 37 ° C durante 30 min e foi turvo a um comprimento de onda de 340 nm, O resultado foi lido numa curva padrão de acordo com o valor A de U-UB. Este método tem um CV de <5%. (5) Curva de calibração: Para cada lote de operação manual e semiautomática, é necessária uma curva de calibração e o soro de calibração pode ser diluído em quatro concentrações de 1: 100, 1: 200, 1: 300 e 1: 400, que são iguais às da amostra. Operação, calcular a concentração de CM de cada tubo padrão de acordo com o valor fixo e plotar a concentração (X) com seu correspondente valor A (Y) (calculado por regressão linear), que é basicamente reto, mas tem uma certa interceptação no eixo Y. Então você não pode usar um único padrão de ponto. Quando a operação é precisa, o coeficiente de correlação entre a concentração e o valor A deve estar acima de 0,985. Se houver três soros de calibração em concentrações altas, médias e baixas, pode ser operado da mesma forma que a amostra e pode ser usado para calibração de três pontos.Pode também ser usado para calibração de cinco pontos (ou seja, mistura de alta e média concentração igual, média e baixa As concentrações de soro foram misturadas em quantidades iguais para se tornarem os outros dois soros de calibração). O intervalo linear deste método: 0.4 ~ 2.5g / L. 2. Eletroforese de foguete: (1) placa de vazamento: 10g / L de agarose 10ml por placa, derreter em banho-maria, misturar bem, adicionar 50μl de anti-soro CM e anti-soro apoB 8µl quando frio a 50 ~ 55 ° C (a quantidade depende do título do anti-soro) ), rapidamente misturar e despeje a placa de vidro predefinida na plataforma de água, esfriar e depois colocado a 4 ° C, após 20 min, furos, o buraco está na extremidade do cátodo da placa, o diâmetro do furo é de 3 mm, o espaçamento do furo é de pelo menos 5 mm ea capacidade do furo é de 5 μl. Coloque a placa no tanque de eletroforese e ponte com papel de filtro. (2) Diluição do antigénio: O soro de calibração foi diluído para 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 e 1: 400 (para curva de calibração) com solução NaCl 0,15 mol / L e a amostra de soro foi 1: Diluído em 200, coloque o refrigerador a 4 ° C por não mais que 3 dias. (3) Carga: 5 μl (acurado) do soro diluído e os espécimes foram retirados em um estado de baixa corrente (10 mA / placa) e adicionados ao poço da amostra de gel de agarose. Cada quadro tem que fazer uma série de padrões. (4) Power-on: fluxo constante 24 mA / placa, tensão terminal 6 ~ 8V / cm, refrigeração com água corrente para manter a agarose 15 ° C, eletroforese 3 ~ 4h. (5) Desproteinizao e pelula seca: A placa de agarose ap electroforese foi imersa em NaCl a 0,15 mol / L durante 30 min e a pelula foi colocada na pelula de politer e seca sob leve press sob um papel de filtro de multicamadas. A umidade na cola é então seca naturalmente com o papel de filtro, o filme e o filme de poliéster, ou secado por um soprador de ar quente.Depois de secar, o filme é naturalmente separado do papel de filtro e do filme de poliéster. (6) Tingimento: O filme de agarose foi imerso na solução de coloração durante 20 a 30 minutos. (7) Descoloração: Mergulhe o filme tingido com uma solução descolorante até que o pico do foguete esteja claro e o fundo seja basicamente incolor. Ele pode ser fixado em dois pedaços de celofane em água e pode ser armazenado por um longo tempo após a secagem. Também pode ser embebido em água corrente para remover o fundo. Nota: 1 A taxa de diluição do antígeno e a quantidade de anti-soro devem ser selecionadas de modo que o pico do foguete seja claro, a inclinação da curva de calibração seja moderada e a linha seja adequada. O método mede simultaneamente apoA-I e apoB, e a quantidade dos dois antissoros deve ser ajustada de modo que as alturas dos picos dos dois sejam diferentes, e a altura do pico da apoB não seja inferior a 1 cm. 2 Diferentes tipos de anti-soros (como coelhos e ovelhas) são testados pelo preço equivalente, e os resultados serão diferentes. O ensaio da apo AI é de preferência anti-soro de coelho. Quando o soro de coelho é usado, o formato do pico é acentuado, e o pico produzido pelo soro de ovelha é espesso, a ponta do pico é redonda e romba e, às vezes, uma imagem fantasma aparece antes do pico. A inclinação da curva de calibração para o soro de calibração também é diferente. No entanto, não importa qual anti-soro é usado, os resultados quantitativos não são muito diferentes. 3 Eletroforese sob certas condições, a altura do pico do soro de calibração de diferentes diluições não mudará significativamente, e a inclinação da curva de calibração é basicamente a mesma. Se a altura do pico da amostra exceder a faixa da curva de calibração, o fator de diluição da amostra deve ser ajustado e testado novamente. O CV inter-board é tipicamente inferior a 5%. 4 Os resultados da eletroforese de foguete podem ser observados por coloração ou observação visual direta do pico do foguete. O primeiro usa menos espécimes e salva anti-soro, mas se os espécimes e anti-soro forem apropriadamente aumentados, é mais conveniente não manchar. A agarose usada deve ser eletroosmótica ou hipotônica padrão.A adição da quantidade adequada de dextrano ou polietilenoglicol ao gel tornará o pico do foguete mais claro. 5 A medição do pico do foguete pode calcular a área ou a altura do pico, e a área é a altura do pico multiplicada pela largura do pico (a largura na metade da altura do pico). A precisão da medição é de preferência até 0,1 mm. Equipamentos mecânicos ou eletrônicos de amplificação devem ser usados. A altura do pico no intervalo da curva padrão é de preferência de 1 a 4 cm. 6 Este método é aplicável à análise de uma pequena quantidade de amostras. Também adequado para determinação de apoAII, CI, CII, CIII, D, E e Lp (a). Não é adequado para a multidão Não Reações adversas e riscos Não