teste de endotoxina bacteriana

O teste de endotoxina bacteriana destina-se a determinar se a endotoxina bacteriana no artigo de teste cumpre os requisitos. A endotoxina é um lipopolissacarídeo da parede celular de bactérias Gram-negativas, e seu componente tóxico é o lipídio A. As bactérias morreram após a desintegração. O teste de endotoxina bacteriana envolve dois métodos, um método de gel e um método fotométrico, este último incluindo um método turbidimétrico e um método de substrato cromogênico. Ao testar o teste, qualquer um dos métodos pode ser usado para o teste. Quando os resultados da medição são controversos, salvo indicação em contrário, os resultados do método de gel devem prevalecer. Informação básica Especialista Categoria: Inspeção Categoria: exame microbiológico patogênico Sexo aplicável: se homens e mulheres aplicam jejum: jejum Resultados da análise: Abaixo do normal: Valor normal: Não Acima do normal: Negativo: O gel não permanece intacto e é negativo da parede do tubo. Positivo: Registros positivos que não escorregaram da parede foram positivos. Dicas: O teste de endotoxina bacteriana é para determinar se a endotoxina bacteriana no artigo de teste atende aos requisitos. Valor normal O tipo e a proporção da flora no corpo são normais e o corpo humano está em equilíbrio dinâmico. Significado clínico O pirogênio é principalmente uma endotoxina liberada pelas bactérias.O pirogênio entra no sistema de circulação sanguínea do organismo e provoca uma série de reações adversas, como febre.Por isso, o teste de pirogênio ou endotoxina bacteriana é um importante índice de qualidade para garantir a segurança da injeção. Resultado anormal Clinicamente, quando uma grande quantidade de infusão é administrada por via intravenosa, o paciente apresenta sintomas de calafrios, febre alta, sudorese, desmaios, vômitos em 0,5 a 1 hora, devido à presença de pirogênios na solução, que pode atingir 40 ° C durante a febre alta. Eles podem até chocar. Resultado positivo pode ser doença: considerações sobre enterite por Bacillus licheniformis No estabelecimento do método de teste de endotoxina bacteriana, ao calcular o limite L, MVD e MVC de endotoxina, é necessário prestar atenção a parâmetros importantes como dose máxima humana, especificações do produto, sensibilidade do reagente de escarro, etc., porque erros de cálculo levarão a todos os esforços subsequentes. Tudo falhou. Problemas comuns são: 1. A dose clínica é determinada incorretamente Utiliza-se apenas a dose convencional Não se considera a dose máxima possível e a via de administração do corpo humano Na fórmula de cálculo do limite L = K / M, devido à definição do valor K e do valor M. O desfoque faz com que a atribuição de valores K e M seja imprecisa, o que acaba levando a um cálculo incorreto dos limites. Por exemplo, uma injeção de um adulto clínico é administrada de 40 a 80 mg por infusão intravenosa, e uma criança (três meses ou mais) é administrada por via intravenosa por 10 a 20 mg de cada vez. O limite da dose do adulto (peso corporal 60kg) é de 3,75EU / mg, enquanto o peso infantil é de apenas 5kg, o limite calculado é de cerca de 1,25EU / mg, se a dose máxima por quilograma de peso corporal não for considerada, o limite de endotoxina bacteriana Haverá uma grande diferença. 2. O limite de endotoxina bacteriana de algumas variedades declaradas não é calculado com base na dosagem clínica, mas é calculado com base na dose do mesmo tipo de teste de pirogênio, resultando em um erro de limite. 3. O limite de endotoxinas bacterianas de algumas variedades foi copiado da Farmacopéia estrangeira, e a diferença entre a dose de uso clínico do mercado doméstico e o peso dos chineses e estrangeiros não foi considerada, e o limite foi determinado incorretamente. 4. Cálculo falso da dose de dosagem diária (dose múltipla em um dia). 5. Quando a especificação da variedade (concentração) muda, o MVD do cálculo não é ajustado. 6. A dose máxima a ser utilizada no estabelecimento do método excedeu a dose utilizada na clínica. Processo de inspeção Primeiro, a determinação do título Os padrões de endotoxina bacteriana são calibrados como benchmarks para determinar a potência equivalente do peso base. O título por 1 mg de padrão de trabalho não deve ser inferior a 2 UE, não deve exceder 50 UE e dados experimentais com uniformidade e estabilidade. O título é determinado da seguinte forma: São utilizadas pelo menos 4 amostras de cada lote de padrão de trabalho e são utilizados o mesmo lote de reagente de expectoração e o mesmo padrão. Cada padrão de trabalho é diluído com água testada com endotoxina * de acordo com o peso e o produto padrão. Uma série de diluições de 2x de solução endotóxica é preparada e reagida com reagente hidrazina.Quando o logaritmo do ponto final de reação dos quatro padrões de trabalho Quando o desvio padrão (S) da média é inferior a 0,365, calcula-se a média geométrica (em ng / mg) dos pontos finais da reacção dos quatro padrões de trabalho e do ponto final da reacção (em EU / mg) do padrão. Em segundo lugar, a preparação do teste 1. Os utensílios utilizados neste método são tratados para remover qualquer endotoxina exógena que possa estar presente, podendo também ser utilizada a torrefacção seca a 250 ° C durante 30 minutos ou 180 ° C durante 2 horas, podendo também ser utilizados outros métodos adequados. A operação de teste deve evitar a contaminação microbiana. 2. Verifique o valor do rótulo da sensibilidade do número de lote 鲎 reagente antes do teste, que deve atender aos requisitos. Adicione a quantidade do solvente reagente hidrazina. Após a dissolução, é uma solução reagente de guanidina e está pronta para uso. 3. Diluição da amostra de ensaio: Quando o valor da marca de sensibilidade do número de lote 鲎 reagente for inferior ao limite de envenenamento interno da amostra de teste, calcule-o pela fórmula seguinte e use a água teste endotoxina * para diluir o reagente para inspeção. Fator de diluição da amostra de teste = X / λ X: Limite de endotoxinas limitado a endotoxinas (EU / ml) λ: valor de sensibilidade do agente de ensaio para o agente de ensaio (UE / ml) Em terceiro lugar, verifique Tubo de ensaio de 4 x 75 mm (ou 0,1 ml / conjunto de ampola de reagente de expectoração original) contendo 0,1 ml de solução reagente de expectoração, 2 dos quais são adicionados com 0,1 ml para o tubo de ensaio e 1 para o padrão de trabalho de endotoxina 2 λ Utilizou-se 0,1 ml como tubo de controlo positivo e adicionou-se 0,1 ml de uma solução reagente de expectoração como um tubo de controlo negativo. Depois de misturar suavemente os tubos de ensaio, o tubo foi fechado e colocado verticalmente num banho de água a 37 ± 1 ° C durante 60 ± 2 minutos. Tenha cuidado ao segurar o tubo e pegar o tubo para evitar resultados negativos devido à vibração. (4) Julgamento dos resultados O tubo foi gentilmente removido do banho de água e lentamente invertido em 1800. O gel no tubo não foi deformado, o positivo não foi retirado da parede do tubo (+) O gel não pode permanecer intacto e foi negativo da parede do tubo. (1). Se o tubo de ensaio 2 for (1), deve considerar-se que está em conformidade com os regulamentos e o ensaio de pirogénio (método de coelho) não deve ser efectuado. Se ambos os tubos forem (+), eles devem ser considerados como não cumprindo os regulamentos. Por exemplo, 1 tubo em 2 tubos é (+) e 1 tubo é (1) De acordo com o método descrito, 4 tubos são retestados.Um tubo em 4 tubos é (+), o que significa que não está em conformidade com os regulamentos. Salvo disposição em contrário no texto, os artigos de teste que satisfaçam os requisitos devem ser testados pelo método do teste de pirogéneo (o método do coelho) e julgados de acordo com os resultados. O limite de endotoxina bacteriana no artigo de teste deve estar de acordo com as disposições dos respectivos artigos. O controlo positivo foi (1) ou o controlo negativo foi (+) e o teste foi ineficaz. Anexo: Teste de endotoxina bacteriana para água de injeção estéril, água para injeção, injeção de cloreto de sódio, injeção de glicose a 5% e 10%. Não é adequado para a multidão Geralmente não há tabus. Reações adversas e riscos Geralmente não há mal.