eletroforese de hemoglobina

Diferentes pontos isoelétricos de várias hemoglobinas têm diferentes cargas positivas e negativas em um determinado tampão de pH, e a hemoglobina se move em direções diferentes após a eletroforese. Informação básica Classificação de especialista: classificação de exame de crescimento e desenvolvimento: exame de sangue Sexo aplicável: se homens e mulheres aplicam jejum: jejum Dicas: Antes do exame, a dieta é leve e o álcool é proibido. Valor normal O método de eletroforese foi HbA 95%, HbA 21,1% a 3,2% e HbA 32% a 3%. O método Singer tem um HbF <4%. Significado clínico 1, o principal componente é a HbS, e nenhuma HbB, pode ser observada na doença da hemoglobina falciforme. 2, HbS, HbF e HbA2 aumentaram ligeiramente, enquanto a HbA raramente ou desapareceu, combinada com a investigação pode ser diagnosticada como anemia HbS-β-marinha, mais comum no Mediterrâneo. 3, além de HbS, contendo 10% -30% de HbA e HbF e HbA2 ligeiramente aumentados, a anemia HbS-β-marinha também pode ser considerada. 4. A HbS é responsável por 20% -30%, a HbA é responsável por 65% -75% e contém HbF e HbA2 normais, que podem ser diagnosticados como anemia HbS-α-marinha. 5, HbA desaparece, HbC é responsável por 28% -44% da hemoglobina total, pode ser diagnosticado como doença da hemoglobina, mais comum em pessoas negras, mais células-alvo podem ser vistas no sangue. 6, há HbS, HbD também aparece, há células-alvo no filme de sangue, pode ser diagnosticado como doença de hemoglobina D, mais comum no norte da China. 7, HbE resulta em eletroforese, pode ser diagnosticado como doença da hemoglobina E, encontrada principalmente no sudeste da Ásia, Índia, etc., a China é mais comum no sul de Guangdong. Precauções Colorimetria direta da eletroforese da membrana da fibra do ácido Waxy Reagente: Eletroforese com micro-hemoglobina de membrana de acetato de celulose. Operação: (1) A membrana de acetato de celulose foi cortada em 1/3 (4 cm x 8 cm) em tamp TEB durante 10 min ou mais. (2) Remova o filme de acetato de celulose e use um papel de filtro para remover o excesso de água. 10 µl de 100 g / L de sangue dissolvido foram absorvidos por uma pipeta de Hb e aplicados uniformemente na borda inferior do impulsor de vidro, e foram colocados no lado mate a uma distância de 1,5 a 2,0 cm da extremidade do cátodo da película. Faça duas cópias de cada amostra ao mesmo tempo. (3) Eletroforese: O tampão é submetido à eletroforese com uma quantidade vestigial de hemoglobina. A voltagem é de 180V e o tempo é de 40min ~ 1h. (As células são claramente separadas em cada zona). Após a eletroforese, os eletrodos são trocados e o buffer pode ser usado repetidamente. (4) Eluição e quantificação HbA, HbA2 e uma zona de controle correspondente ao tamanho de HbA2 foram cortadas separadamente. Se zonas de Hb anormais (HbX) também são cortadas ao mesmo tempo, elas são colocadas nos tubos correspondentes. Adicione 10 ml de tampão TEB ao tubo de HbA, adicione 2 ml de tampão TEB a cada tubo, deixe de molho por 30 min, agite constantemente. Depois de ser completamente eluído. O eluato foi misturado e 721 espectrofotômetros com comprimento de onda de 413 nm. O branco é zerado e a absorbância de cada tubo é medida. Processo de inspeção (1) eletroforese de traço de hemoglobina: 1 Filme de imersão: O filme de acetato de celulose é colocado na superfície do tampão TEB, e pode ser usado por pelo menos 20 minutos depois de ficar totalmente embebido e afundado. Isso evita que bolhas sejam geradas. 2 pontos: Remova o filme de acetato de celulose e use papel de filtro para remover o excesso de água. A solução de hemoglobina foi aspirada em uma micropipeta e colocada em uma ranhura côncava de um aplicador de múltiplas amostras.A solução de hemoglobina foi tomada por uma pipeta multi-amostra e manchada em um lado mate da película de acetato de celulose. 1,5 a 2 cm da extremidade do cátodo, a quantidade de manchas é de cerca de 3 a 5 ul, e a solução de hemoglobina normal na posição paralela é usada como controle. 3 Eletroforese: Adicione uma quantidade igual de solução de tampão BB no tanque de tampão em ambos os lados do tanque de micro-eletroforese e use um papel de filtro de duas camadas como uma ponte salina no suporte da membrana de acetato de celulose. O filme era matte ao fundo, e o eletrodo negativo foi terminado por um ponto e equilibrado por 5 min. Ligue a energia. A voltagem é de 180 V, a quantidade atual é de cerca de 0,2 mA / cm e o tempo de eletroforese é de 20 a 30 minutos. O buffer no tanque pode ser usado mais uma vez após a troca dos eletrodos. 4 Colorao: O filme submetido a electroforese foi retirado na soluo de colorao vermelha Ponceau durante cerca de 10 minutos e lavado com ido acico a 3% vrias vezes at o fundo estar branco e seco. 5 Transparente: O filme de acetato de celulose é embebido em um líquido transparente, aderido a uma placa de vidro limpa, e as bolhas entre os dois são removidas por uma vareta de vidro. Uma pequena quantidade de ido acico glacial foi vertida para um cilindro de cromatografia e a placa de vidro foi coberta de modo inverso no cilindro de cromatografia (com o filme voltado para dentro). Fume com ácido acético glacial volátil por 10 a 20 minutos e remova o filme quando ele estiver transparente. (2) método colorimétrico coloração por eletroforese membrana de acetato de celulose: 1 Remova a membrana de acetato de celulose de 4 cm × 6 cm embebida em tampão TEB e cubra o excesso de água com papel de filtro. A uma distância de 1,5 cm da extremidade do cátodo da superfície mate, cerca de 5 µl de solução de Hb de 50 g / L foi linear e uniformemente embalada com uma pipeta de hemoglobina.Após a solução de hemoglobina penetrar na membrana, a membrana foi invertida sobre uma ponte de papel de filtro da placa de suporte do tanque de electroforese. 2 Eletroforese: voltagem 180V, tempo 30 ~ 40min, sujeito a separação completa das zonas Hb. O eletrodo é trocado após a eletroforese e o tampão de eletroforese pode ser usado várias vezes. 3 Tingimento: O filme é imerso na solução de tingimento, que precisa ser tingido por 2 horas no inverno e 25 ~ 30 ° C no verão, e só pode ser tingido por cerca de 30 minutos. Observe que se a coloração não for transparente (como o tempo é muito curto ou a concentração de hemoglobina estiver muito concentrada) ou se a tensão for muito alta, a banda de HbA está muito concentrada e a fita é facilmente removida, o que afeta a precisão da quantificação. Lave com solução de branqueamento várias vezes até que o fundo seja enxaguado. 4 Quantificação: A membrana enxaguada foi retirada e cada zona foi cortada e uma zona de controlo correspondente ao tamanho de HbA2 foi colocada em cada tubo de ensaio correspondente. 10 ml do lixiviado foram adicionados ao tubo de HbA, e os tubos restantes foram imersos em 2 ml, embebidos por 20 minutos, e agitados de tempos em tempos. Eleve completamente a fita (note que a temperaturas mais altas, o tempo de eluição não deve ser muito longo, caso contrário, o azul eluente diminuirá e ficará gradualmente roxo). O eluato foi misturado e a absorvância de cada tubo foi medida usando um espectrofotómetro 721 a um comprimento de onda de 620 nm e zerando com um branco. 5 cálculo: a mesma colorimetria direta. Colorimetria direta da eletroforese da membrana da fibra do ácido Waxy Reagente: Eletroforese com micro-hemoglobina de membrana de acetato de celulose. Operação: (1) A membrana de acetato de celulose foi cortada em 1/3 (4 cm x 8 cm) em tamp TEB durante 10 min ou mais. (2) Remova o filme de acetato de celulose e use um papel de filtro para remover o excesso de água. 10 mL de 100 g / L de sangue dissolvido foi absorvido por uma pipeta de Hb e aplicado uniformemente na borda inferior do empurrador de vidro, e foi colocado no lado matte a uma distância de 1,5 a 2,0 cm da extremidade do cátodo do filme. Faça duas cópias de cada amostra ao mesmo tempo. (3) Eletroforese: eletroforese de tampão e micro hemoglobina. A voltagem é de 180V e o tempo é de 40min ~ 1h. (As células são claramente separadas em cada zona). Após a eletroforese, os eletrodos são trocados e o buffer pode ser usado repetidamente. (4) Eluição e quantificação HbA, HbA2 e uma zona de controle correspondente ao tamanho de HbA2 foram cortadas separadamente. Se zonas de Hb anormais (HbX) também são cortadas ao mesmo tempo, elas são colocadas nos tubos correspondentes. Adicione 10 ml de tampão TEB ao tubo de HbA, adicione 2 ml de tampão TEB a cada tubo, deixe de molho por 30 min, agite constantemente. Depois de ser completamente eluído. O eluato foi misturado e 721 espectrofotômetros com comprimento de onda de 413 nm. O branco é zerado e a absorbância de cada tubo é medida. Não é adequado para a multidão Sem tabus. Reações adversas e riscos Risco de infecção: se você usar uma agulha suja, pode estar em risco de infecção.