Teste de toxicidade de linfócitos

Quando linfócitos T efetores específicos são colocados em contato com células-alvo in vitro, eles podem exibir a propriedade de destruir e lisar células-alvo, chamada toxicidade de linfócitos. A célula alvo pode ser uma célula tumoral ou outra célula do tecido. A maneira como os linfócitos matam as células-alvo pode destruir as células-alvo por morte direta ou produção de linfocinas. Este é o teste de toxicidade linfocitária. Alguns linfitos, tais como CTL, NK, LAK, etc. t efeito de morte directo nas culas alvo e dependendo da natureza das culas efectoras a serem detectadas, as culas alvo correspondentes, tais como culas tumorais, culas doadoras de transplante, etc., podem ser seleccionadas. Este experimento pode ser usado em pesquisas sobre imunidade tumoral, rejeição de transplantes, infecção viral e similares. Os métodos incluem: método de liberação de cromo, método de liberação de lactato desidrogenase e ensaio de células apoptóticas. Informação básica Classificação do especialista: Classificação do exame de oncologia: exame imunológico Sexo aplicável: se homens e mulheres aplicam jejum: jejum Resultados da análise: Abaixo do normal: Valor normal: Não Acima do normal: Negativo: Normal Positivo: Não há dados relevantes no momento. Dicas: Mantenha uma mentalidade normal. Valor normal O método de exame morfológico foi comparado entre o grupo teste e o grupo controle, P <0,05. Método 125I ou 51Cr P> 0,05. Significado clínico Resultados anormais: Este teste pode ser usado como um indicador para medir a imunidade celular em pacientes com tumor in vitro, também pode determinar o prognóstico de pacientes com tumor medindo a capacidade de células imunes de matar células tumorais e também pode identificar subpopulações funcionais de linfócitos. A população a ser examinada: O teste cruzado de toxicidade de linfócitos também é chamado de teste de citotoxicidade dependente de complemento (CDC). É para verificar se há um doador no receptor de transplante de órgão, ou o anticorpo HLA do doador contra o receptor, e deve realizar o teste de CDC antes do transplante de órgão. Precauções (1) Ao medir a capacidade dos linfócitos sujeitos atacarem células tumorais, adicionaram-se células tumorais e linfócitos do indivíduo ao grupo experimental e adicionaram-se células alvo tumorais e meio de cultura ao grupo de controlo. Se outras amostras, como antígenos tumorais ou imunógenos, drogas terapêuticas, etc., estiverem envolvidas na imunidade celular, um terceiro grupo deve ser adicionado.Neste grupo de teste, os linfócitos são primeiramente autorizados a reagir com a amostra a ser testada, e depois lavados e depois observados. O efeito citotóxico dos linfócitos sensibilizados nas células alvo tumorais. Os dois primeiros grupos se tornaram o grupo de controle neste momento. (2) A taxa de sobrevivência de células-alvo e linfócitos deve estar em um estado ideal, geralmente> 90%. (3) O soro de bezerro adicionado à solução de cultura deve ser testado para toxicidade em primeiro lugar. (4) A contagem de células alvo inoculadas e linfócitos deve ser precisa. (5) O grupo experimental e o grupo de controle devem estar dispostos no mesmo tabuleiro para reduzir o erro. (6) O pH da solução de cultura é mais preferencialmente 6,8 a 7,2. Processo de inspeção (1) Inoculação de células alvo: Selecione células tumorais que possam crescer aderentemente, lave-as com solução de Hank, digerir com 2,5 g / L de tripsina por 2 a 3 min, despeje a solução de tripsina (as células ainda estão presas à parede do frasco) e use Hank. As células foram levemente lavadas 3 vezes e a solução de Hank foi vertida. As culas aderentes foram lavadas com soluo RPMI1640 contendo 10% a 20% de soro de vitelo e o sedimento celular foi removido por filtrao atrav de um filtro de 100 mesh para preparar uma suspens de culas tumorais ico de 1 x 106 / ml e a suspens celular foi pipetada com um conta-gotas. Soltar em uma placa de cultura de 40 poços, 1 gota por poço (cerca de 100-150 células), e colocar a placa em uma incubadora de 5% de CO2 a 37 ° C por 20 h. A placa de cultura foi removida e a solução de cultura foi removida.Depois da coloração de Wright, o número médio de células tumorais aderentes por 10 poços foi contado.Se a diferença entre os dois grupos era> 1/3, o erro era muito grande para ser usado, e o erro não era grande. A placa de cultura pode ser formalmente testada. (2) Separação dos linfócitos: tomar a anticoagulação com heparina 3 ml do sujeito, separar os linfócitos com solução de lixiviação de sacarose-diazepam, depois lavá-los com solução de Hank 3 vezes e depois misturá-los com solução RPMI1640 (2 ~ 3) ) Suspensão de células × 105 / ml. (3) Teste de citotoxicidade: linfócitos e células alvo são misturados numa proporção de 200: 1, e (2 ~ 3) × 104 linfócitos (em volume de 0,1 ml) são adicionados a cada poço, e cerca de 20% de soro de vitelo é adicionado por poço. 0,1 mL de soluo RPMI 1640 foi colocado numa incubadora a 37% de CO2 a 5% durante 40 h. A placa de cultura foi retirada e a solução de cultura foi removida Após a coloração de Wright, o número de células alvo remanescentes no fundo da placa foi contado sob um microscópio. Não é adequado para a multidão Não há tabus. Reações adversas e riscos Não há complicações e perigos relacionados.