kylomikroner

Chylomikronerna är de största lipoproteinpartiklarna i humant plasma, och CM är majoriteten av diet TG som levereras från tunntarmsabsorptionsstället till den systemiska cirkulationen. CM-rensningshastigheten är snabb, halveringstiden är 10 minuter, och den normala personen kan inte upptäcka det efter 12 timmar efter fasta. När lipoproteinet är elektrofores är CM vid ursprunget. Det bör noteras att provet bör vara färskt under serumlipoproteinelektrofores och inte ska förvaras fryst. Grundläggande information Specialistklassificering: Klassificering av matsmältning: blodundersökning Tillämpligt kön: om män och kvinnor tillämpar fasta: fasta Analysresultat: Under normala: Normalt värde: ingen Över normal: negativt: Normal. positivt: Hyperlipoproteinemia typ I, hyperlipoproteinemia typ V. Tips: Innan undersökningen är kosten lätt och alkohol är förbjuden. Normalt värde Negativ. Klinisk betydelse Positiv hyperlipoproteinemia typ I, hyperlipoproteinemia typ V. Positiva resultat kan vara sjukdomar: hyperlipoproteinemia typ I, hyperlipoproteinemia typ V försiktighetsåtgärder 1. Immunoturbidimetrisk turbiditetsmetod: (1) Beträffande antiserum: Den turbidimetriska analysen har högre krav på antiserum än andra metoder. Den turbidimetriska metoden är företrädesvis en polyklonal antikropp. Anti-serum måste vara fritt från anti-serum. Måste vara uppmärksam på apoA-I extraherat från humant serum för att uppnå immunrenhet, kromatografisk renhet och elektroforesrenhet, vilket inte är möjligt i det allmänna laboratoriet. Antiserum titer (titer) bör inte vara mindre än 16. För närvarande, i vissa inhemska kommersiella reagens, har apoA-I antiserum en mycket låg titer, så man måste vara försiktig när du köper satsen. Om du inte har erfarenhet av att identifiera antisera-kvalitet innan du köper, bör du be den kvalificerade enheten att identifiera den. (2) Provet i den övre metoden (serum) späds 200 gånger för manuell drift (100 ul prov), och om det är ett precisionsprovtagare kan det spädas 20 gånger (med 10 mikroliter). För att anpassa sig till villkoren för olika laboratorier (som olika typer av automatiserade instrument), bör andelen antigen-antikroppar uppmärksammas vid lämpliga modifieringar. Det bör noteras att det inte bör finnas något antigenöverskott i reaktionssystemet och den linjära övre gränsen bör inte vara lägre än 2,5 g / L. Med andra ord måste mängden antiserum vara tillräckligt, annars blir resultaten låga när apoA-I är hög i provet. För närvarande har vissa inhemska läkemedelsatser inte bara låg anti-serumtiter, utan doseringen av proverna i operationen är för stor (såsom 3 ~ 5 ul), antikroppen är uppenbarligen otillräcklig, och de uppmätta resultaten är oundvikligen felaktiga. (3) För att uppnå exakt mätning måste resultaten för kalibreringskurvan beräknas i den turbidimetriska mätningen apoA-I och B (slutpunktmetod). Ett visst intervall (låg provdos) -koncentration (X) är i princip linjärt med turbiditet (Y), och linjär regression beräknar ett visst avlyssning på Y-axeln (A-värde <0,1), så avvikelsen för beräkningsresultatet beräknas med enpunktskalibrering. Större, de uppmätta resultaten kan inte exakt återspegla nivån på hög (hög låg, låg hög). Försäkrar inte mätnoggrannheten på grund av enkelpunktsmetoden. Oavsett typ av automatiserat instrument måste du först prova kalibreringskurvan. Om testet upprepas under instrumentets förhållanden och de specifika förhållandena, avlyssningen av regressionslinjen är inte uppenbar, kan enpunkts kalibreringsmetod användas. När provmängden är 3 till 5 μl, även om mängden antiserum ökar, är koncentrationen och grumligheten inte linjär och kan endast beräknas efter att kurvan har konverterats linjärt. (4) Den huvudsakliga interferensfaktorn är grumligheten i själva serumet (såsom serum med högt fett) och förbehandlingsmetoderna som ultracentrifugering eller lipashydrolys är inte praktiska. Effekten av grumlighet med ytaktiva medel är också begränsad, så ett tomt rör måste göras i analysen. Förutom den tvåpunktsmetod som används i automatiserad analys är det ett misstag att manuellt använda ett enda reagens utan att subtrahera provämnet. För att minska effekten av matriseffekter på turbiditetssvaret måste serum med fast värde användas som en kalibrator. Dessutom måste störningar som dammpartiklar och grumliga skivor repas ut. (5) Vissa kommersiella kit (inklusive vissa importerade produkter) har felaktiga kalibreringsseravärden, vilket är viktiga felkällor. 2. Raketelektrofores: (1) Valet av antigenutspädningsfaktor och mängden antiserum bör vara tydligt, kalibreringskurvens lutning är måttlig och justeringskurvan är lämplig. Metoden mäter samtidigt apoA-I och apoB, och mängden av de två antiseraerna bör justeras så att topphöjderna för de två är olika, och apoBs topphöjd är inte mindre än 1 cm. (2) Antisera från olika typer av källor (som kaniner och får), testade till motsvarande pris, resultaten blir olika. ApoA-I-analysen är företrädesvis kaninantiserum. När kaninserumet används är toppformen skarp, och toppen som produceras av fårserummet är tjock, toppspetsen är rund och trubbig, och ibland visas en spöksbild före toppen. Lutningen för kalibreringskurvan för kalibreringsserumet är också annorlunda. Men oavsett vilket antiserum som används är de kvantitativa resultaten inte så mycket olika. (3) Elektrofores under vissa förhållanden, topphöjden för kalibreringsserumet för olika utspädningar kommer inte att förändras signifikant, och lutningen för kalibreringskurvan är i princip densamma. Om provets topphöjd överskrider kalibreringskurvan, bör provets utspädningsfaktor justeras och testas igen. Inter-board CV är vanligtvis mindre än 5%. (4) Raketelektroforesresultat kan ses genom färgning eller direkt visuell observation av rakettoppen. Den förstnämnda använder mindre prover och sparar antiserum, men om proverna och antiserumet ökar på lämpligt sätt är det bekvämare att inte färga. Den använda agarosen bör vara standardelektrosmotisk eller hypotonisk. Att lägga till korrekt mängd dextran eller polyetylenglykol till gelén kommer att göra rakettoppen tydligare. (5) Mätningen av rakettoppen kan beräkna ytan eller topphöjden, och området är topphöjden multiplicerad med toppbredden (bredden vid toppens halva höjd). Mätnoggrannheten är företrädesvis upp till 0,1 mm. Mekanisk eller elektronisk förstärkningsutrustning måste användas. Topphöjden inom området för standardkurvan är företrädesvis 1 till 4 cm. (6) Denna lag gäller för analys av ett litet antal prov. Lämplig också för apoAII, Cl, CII, CIII, D, E och Lp (a) -bestämning. Inspektionsprocess 1. Immunoturbidimetrisk turbiditetsmetod: (1) Provet bör vara ett snabbseparerande serum som kan separeras i tid. Det kan förvaras i kylskåp vid 2 till 6 ° C, uppmätt inom 1 vecka och förvaras vid -20 ° C under ett halvt år. (2) Vid användning av en helautomatisk analysator bör förhållandet mellan antigen och antikropp och reaktionstid rimligen väljas enligt olika instrumentkonstruktionsparametrar. Det kan också användas som en hastighetsspridningsnephelometri CM såsom Beckman turbidimeter ICS eller proteinarray-system). (3) Instrument som används i manuell metod: precisionsfotometer med 340 nm filter (eller splitter), provvolym är företrädesvis 0,5 ml (för att spara antiserum), företrädesvis med flödeskopp, spädning av prov är bäst utspädd Korrigerat samplare. (4) Provbehandling: Serumprovet och kvalitetskontrollserum utspäddes 1: 200 med ett provutspädningsmedel, det vill säga först utspädd 1:20 (5,0 μl serum + 95 μl utspädningsmedel), och späddes sedan 1:10 ( Överskott 1:20 serum för bestämning av apoB). Efter blandning tilläts den stå vid 25 till 37 ° C under 30 minuter och var grumlig vid en våglängd av 340 nm. Resultatet avlästes på en standardkurva enligt A-värdet för U-UB. Denna metod har ett CV på <5%. (5) Kalibreringskurva: För varje sats manuell och halvautomatisk drift krävs en kalibreringskurva, och kalibreringsserumet kan spädas ut i fyra koncentrationer på 1: 100, 1: 200, 1: 300 och 1: 400, som är desamma som provet. Drift, beräkna CM-koncentrationen för varje standardrör enligt det fasta värdet och plotta koncentrationen (X) med dess motsvarande A-värde (Y) (beräknat med linjär regression), som i princip är rakt, men har ett visst avlyssning på Y-axeln. Så du kan inte använda en enda punktstandard. När operationen är korrekt bör korrelationskoefficienten mellan koncentrationen och A-värdet vara över 0,985. Om det finns tre kalibreringssera vid höga, medelhöga och låga koncentrationer, kan den användas på samma sätt som provet och kan användas för trepunktskalibrering.Den kan också användas för fempunktskalibrering (dvs. högmediumkoncentration serum lika blandning, medium och låg Koncentrationer av serum blandades i lika stora mängder för att bli de andra två kalibreringsserorna). Det linjära området för denna metod: 0,4 ~ 2,5 g / L. 2. Raketelektrofores: (1) hällplatta: 10 g / L agaros 10 ml per platta, smälta i kokande vattenbad, blanda väl, tillsätt 50 μl CM antiserum och apoB antiserum 8 μl när det är kallt till 50 ~ 55 ° C (mängden beror på antiserum titer) ), blanda snabbt och häll på glasplattan som är förinställd på vattenplattformen, svalna och placerades sedan vid 4 ° C, efter 20 minuter, stans hål, hålet är vid plattans katodände, hålets diameter är 3 mm, hålets avstånd är minst 5 mm, och hålkapaciteten är 5 μl. Placera plattan i elektroforesbehållaren och bron med filterpapper. (2) Utspädning av antigen: Kalibreringsserum späddes till 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 och 1: 400 (för kalibreringskurva) med 0,15 mol / L NaCl-lösning, och serumprovet var 1: Späd ut i 200, sätt kylskåpet vid 4 ° C under högst 3 dagar. (3) Laddning: 5 ul (exakt) av det utspädda serumet och proverna togs i lågströmstillstånd (10 mA / platta) och sattes till agarosgelprovet väl. Varje styrelse måste göra en serie standarder. (4) Start: konstant flöde 24 mA / platta, terminal spänning 6 ~ 8V / cm, kylning med rinnande vatten för att bibehålla agaros 15 ° C, elektrofores 3 ~ 4h. (5) Deproteinisering och torr film: agarosplattan efter elektrofores nedsänktes i 0,15 mol / l NaCl under 30 minuter, och filmen placerades på polyesterfilmen och torkades med lätt tryck under ett flerskikts filterpapper. Fukten i limet torkas sedan naturligt med filterpapper, filmen och polyesterfilmen eller torkas med en varmluftsblåsare. Efter torkning separeras filmen naturligt från filterpapperet och polyesterfilmen. (6) Färgning: agarosfilmen nedsänktes i färgningslösningen under 20 till 30 minuter. (7) Avfärgning: Blötlägg den färgade filmen med en avfärgningslösning tills raket toppen är klar, och bakgrunden är i princip färglös. Det kan klämmas fast i två delar cellofan i vatten och kan förvaras under lång tid efter torkning. Det kan också blötläggas i rinnande vatten för att ta bort bakgrunden. OBS: 1 Utspädningsförhållandet för antigenet och antiserummängden bör väljas så att rakettoppen är klar, lutningen för kalibreringskurvan är måttlig och linjen är lämplig. Metoden mäter samtidigt apoA-I och apoB, och mängden av de två antiseraerna bör justeras så att topphöjderna för de två är olika, och apoBs topphöjd är inte mindre än 1 cm. 2 Olika typer av antiserum (som kaniner och får) testas till motsvarande pris, och resultaten blir olika. ApoA-I-analysen är företrädesvis kaninantiserum. När kaninserumet används är toppformen skarp, och toppen som produceras av fårserummet är tjock, toppspetsen är rund och trubbig, och ibland visas en spöksbild före toppen. Lutningen för kalibreringskurvan för kalibreringsserumet är också annorlunda. Men oavsett vilket antiserum som används är de kvantitativa resultaten inte så mycket olika. 3 Elektrofores under vissa förhållanden, topphöjden för kalibreringsserumet för olika utspädningar kommer inte att förändras signifikant, och lutningen för kalibreringskurvan är i princip densamma. Om provets topphöjd överskrider kalibreringskurvan, bör provets utspädningsfaktor justeras och testas igen. Inter-board CV är vanligtvis mindre än 5%. 4 Raketelektroforesresultat kan observeras genom färgning eller direkt visuell observation av raket toppen. Den förstnämnda använder mindre prover och sparar antiserum, men om proverna och antiserumet ökar på lämpligt sätt är det bekvämare att inte färga. Den använda agarosen bör vara standardelektrosmotisk eller hypotonisk. Att lägga till korrekt mängd dextran eller polyetylenglykol till gelén kommer att göra rakettoppen tydligare. 5 Mätningen av rakettoppen kan beräkna ytan eller topphöjden, och området är topphöjden multiplicerad med toppbredden (bredden vid toppens halva höjd). Mätnoggrannheten är företrädesvis upp till 0,1 mm. Mekanisk eller elektronisk förstärkningsutrustning måste användas. Topphöjden inom området för standardkurvan är företrädesvis 1 till 4 cm. 6 Denna metod är tillämplig för analys av en liten mängd prov. Lämplig också för apoAII, Cl, CII, CIII, D, E och Lp (a) -bestämning. Inte lämplig för publiken Inga. Biverkningar och risker Inga.