Kromosomundersökning av fostervattencellodling

På grund av skadliga kemikalier, röntgenexponering, miljöfaktorer, avancerad graviditet, nära släktingar etc., vilket leder till sjukdomar orsakade av variation i antal, morfologi, struktur och kombination av kromosomer under graviditeten. Kromosomundersökning av fostervattenceller har stor specifik betydelse för prenatal diagnos av kromosomala sjukdomar. Grundläggande information Specialkategori: Mödrarundersökning Kontrollera kategori: Genetisk testning (DNA) Tillämpligt kön: om kvinnor fastar: fasta Analysresultat: Under normala: Normalt värde: ingen Över normal: negativt: Totalt antal kromosomer: 46. Autosom: 22 par (nummer 1-22). Sexkromosomer: XY för män och XX för kvinnor. Manlig karyotyp: 46, XY. Karyotyp av kvinnor: 46, XX. positivt: Resultat som skiljer sig från normala värden är positiva, vilket tyder på en medfödd missbildning eller annan medfödd sjukdom. Tips: Kromosomundersökning bör ta amniotiska vätskeprover vid 16-20 veckors graviditet. Normalt värde Det totala antalet kromosomer är 46. 22 par autosomer (numrerade 1 till 22). Sexkromosomen är XY och kvinnan XX. Manlig karyotype 46, XY. Karyotype kvinnlig 46, XX. Klinisk betydelse Onormalt kromosomnummer såsom Downs syndrom (trisomi 21), trisomi 18, trisomi, trisomi 38, trisomi 21, medfødt testikulär hypoplasiasyndrom, XXY-syntes Tecken, Turnersyndrom, X-trisomisyndrom och multipelt X-kroppssyndrom. Abnormal kromosomstruktur såsom 4p partiellt monomersyndrom, 5p partiellt monomersyndrom, 9p partiellt trisomisyndrom, 9q partiellt monomersyndrom, 21q partiellt monomersyndrom, 22q partiellt monomersyndrom, 22q partiellt trisomisyndrom Syndrom, etc. Positiva resultat kan vara sjukdomar: medfødt ovariehypoplasi, pediatrisk cerebral pares, pediatrisk Downs syndrom, pediatrisk cerebral pares, pediatrisk pascal syndrom, Diggolger syndrom, pediatrisk meow syndrom, pediatrisk medfödd testikelutveckling Ofullständiga genetiska överväganden 1. Kromosomundersökning bör ta amniotiska vätskeprover vid 16-20 veckors graviditet. 2 har dessa medfödda genetiska sjukdomar ökat, saknas, translokering, inversion och andra kvantitativa och strukturella avvikelser, ofta manifesterade som ett syndrom. De flesta fall, såsom flera missbildningar, tillväxthämning och mental retardering, leder till fosterabort, för tidig födsel eller förlossning. Inspektionsprocess (1) Ta 15 till 30 ml fostervatten under 16 till 20 veckor av graviditeten och centrifugera vid 1000 r / ml under 10 minuter. (2) Kassera överskottet av supernatanten, lämna 1 ml fostervatten och utfällda celler och fördela försiktigt i en cellsuspension. (3) Överför till en 25 ml kvadratkultur, tillsätt 3 ml av ett medium med ett pH av 6,5 till 6,8 (innehållande penicillin 100 U / ml, streptomycin 100 μg / ml) och 1 ml kalvserum och inkuberas i en 37 ° C inkubator. (4) Ett stort antal fibroblastliknande eller epitelioida cellkolonier observerades efter 7-10 dagars odling. Det färska mediet kan bytas ut just nu. (5) När cellkolonierna expanderas i bitar och det finns många genomskinliga cirkulära uppdelande celler, kan colchicin tillsättas för att göra den slutliga koncentrationen 0,1-0,3 μg / ml och sedan odlas i en 37 ° C inkubator under 5-6 timmar. (Ovanstående procedurer utförs alla under aseptiska förhållanden). Skördsnormer: 1 med fibroblaster som huvudtyp, cellernas tillväxt, 2 med 10x okular och 20x objektiv observation, de växande cellklonerna täcker 1 eller fler kompletta synfält; 3 se mer än 10 genomskinliga Runda celler och mer än 10 dubbla runda ljusa uppdelande celler. (6) Om cellerna inte växer kraftigt, tillväxtcykeln inte är enhetlig eller cellerna åldras och skörden inte uppnås kan subkulturen fortsättas i den ursprungliga flaskan. Metod: Under sterila betingelser hälldes först kulturlösningen och några droppar 2,5 g / 1 steril trypsinlösning tillsattes och blandningen skakades och hälldes. Vidare tillsattes 5 till 10 droppar trypsin och skakades försiktigt vid 37 ° C under cirka 5 minuter för att få de vidhäftande cellerna att falla av. 4 ml färskt medium innehållande kalvserum tillsattes och odlingen fick stå vid 37 ° C under 4 till 5 timmar. Ändra försiktigt kulturmediet och fortsätt kulturen. Det kan skördas 3 till 5 dagar efter passagen. (7) Överför odlingslösningen till ett graderat centrifugrör, tillsätt 1 ml ED-TA-trypsinlösning till kolven, placera i en 37 ° C inkubator under 5 minuter och skölj sedan de vidhäftande cellerna med en armbågspipett (2,5 g / kan också användas) L trypsinlösningsmältning). Cellerna som lossades från flaskväggen hälldes i ett centrifugrör, blandades med den ursprungliga odlingsvätskefasen, och odlingsflaskan tvättades med en liten mängd varm fysiologisk saltlösning, och de tvättade cellerna hälldes också i centrifugröret och centrifugerades vid 1000 r / min under 10 minuter. (8) Aspirera supernatanten, tillsätt 3 till 5 ml 0,075 mol / L KCl-hypotonlösning förvärmd vid 37 ° C och ställ in på 37 ° C under 10 till 15 minuter. (9) Prefixering, fixering och beredning är desamma som beredningsmetoden för perifera kromosomprov från blodkroppar. Inte lämplig för publiken 1. Det fanns tecken på abort under graviditeten. 2. När kroppstemperaturen överstiger 37,5 ° C. 3. Tidig peeling av moderkakan, bukinfektion och purulent. Biverkningar och risker (1) Moderskada: punktering nålsticka sårblodkärl orsakade av bukvägg hematom uterus hematom. Ibland kommer amniotisk vätska in i moders blodcirkulation från punkteringshålet och orsakar fostervattenemboli. Blåsan tömdes inte före punkteringen, och urinblåset skadades. (2) Skada på fostret, morkakan och navelsträngen: punkteringsnålen kan skada fostret och kan orsaka blödning, och morkakan och navelsträngen kan också orsaka blödning eller hematom. Därför bör blödningskällan identifieras när man tar hemorragisk fostervatten. Om du misstänker att du kommer från ett foster bör du fortsätta att lyssna på fosterhjärtat. (3) Läckage av fostervatten: postoperativ fostervatten läcker från nålhålen, orsakar för lite fostervatten, påverkar fostrets utveckling och till och med orsakar missfall eller för tidig födsel. (4) abort eller för tidig födsel: förekomsten av abort eller för tidig förlossning är 0,1% -0,2%, inträffar ofta inom en vecka efter operationen, även efter punkteringen, för tidigt bristning av membran leder till för tidig förlossning. (5) intrauterin infektion: det kan finnas mödrarfeber efter operationen. Intrauterin infektion kan orsaka onormal fosterutveckling eller till och med fosterdöd. Därför bör amniocentes vara strikt aseptisk.