Lymfocyttoxicitetstest

När specifika effektor T-lymfocyter kontaktas med målceller in vitro, kan de uppvisa egenskapen att förstöra och lysera målceller, kallad lymfocytoxicitet. Målcellen kan vara en tumörcell eller annan vävnadscell. Hur lymfocyter dödar målceller kan förstöra målceller genom direkt dödande eller produktion av lymfokiner. Detta är lymfocyttoxicitetstestet. Vissa lymfocyter, såsom CTL, NK, LAK, etc. har direkt dödande effekt på målceller, och beroende på beskaffenheten hos effektorcellerna som ska detekteras, kan motsvarande målceller, såsom tumörceller, transplanterade givarceller, etc. väljas. Detta experiment kan användas i forskning om tumörimmunitet, transplantatavstötning, viral infektion och liknande. Metoder inkluderar: kromfrisättningsmetod, laktatdehydrogenas-frisättningsmetod och apoptotisk cellanalys. Grundläggande information Specialklassificering: Klassificering av onkologiundersökningar: immunundersökning Tillämpligt kön: om män och kvinnor tillämpar fasta: fasta Analysresultat: Under normala: Normalt värde: ingen Över normal: negativt: Normal. positivt: Inga relevanta uppgifter för närvarande. Tips: Håll ett normalt tankesätt. Normalt värde Den morfologiska undersökningsmetoden jämfördes mellan testgruppen och kontrollgruppen, P <0,05. 125I eller 51Cr metod P> 0,05. Klinisk betydelse Onormala resultat: Detta test kan användas som en indikator för att mäta cellulär immunitet hos tumörpatienter in vitro; det kan också bestämma prognosen för tumörpatienter genom att mäta immuncells förmåga att döda tumörceller och kan också identifiera funktionella subpopulationer av lymfocyter. Befolkningen som ska undersökas: Korsningstestet för lymfocyttoxicitet kallas också det komplementberoende cytotoxicitetstestet (CDC). Det är för att kontrollera om det finns en givare i organtransplantatmottagaren, eller givarens HLA-antikropp mot mottagaren, och måste utföra CDC-test före organtransplantation. försiktighetsåtgärder (1) Vid mätning av individens lymfocyters förmåga att attackera tumörceller tillsattes tumörceller och lymfocyter från försökspersonen till den experimentella gruppen och tumörmålceller och odlingsmedium sattes till kontrollgruppen. Om andra prover, såsom tumörantigener eller immunogener, terapeutiska läkemedel, etc. är involverade i cellulär immunitet, bör en tredje grupp läggas till. I denna testgrupp får lymfocyter först reagera med provet som ska testas, och tvättas och observeras sedan. Den cytotoxiska effekten av sensibiliserade lymfocyter på tumörmålceller. De två första grupperna blev kontrollgruppen vid denna tidpunkt. (2) Överlevnadshastigheten för målceller och lymfocyter bör vara i ett optimalt tillstånd, i allmänhet> 90%. (3) Kalvenserumet som tillsätts till odlingslösningen måste först testas för toxicitet. (4) Antalet inokulerade målceller och lymfocyter bör vara korrekt. (5) Experimentgruppen och kontrollgruppen bör arrangeras på samma bräde för att minska felet. (6) pH för odlingslösningen är mest föredraget 6,8 till 7,2. Inspektionsprocess (1) Inokulering av målceller: Välj tumörceller som kan växa vidhäftande, tvätta dem med Hank-lösning, smälta med 2,5 g / L trypsin i 2 till 3 minuter, häll trypsinlösningen (cellerna är fortfarande fästa vid flaskväggen) och använd Hank. Cellerna tvättades lätt 3 gånger och Hank-lösningen hälldes. De vidhäftande cellerna tvättades med RPMI1640-lösning innehållande 10% till 20% kalvserum, och cellpelleten avlägsnades genom filtrering genom ett 100-mesh-filter för att framställa en enda tumörcellsuspension av 1 x 106 / ml, och cellsuspensionen pipetterades med en droppare. Släpp i en 40-brunnars odlingsplatta, 1 droppe per brunn (cirka 100-150 celler) och placera plattan i en 5% CO2 inkubator vid 37 ° C under 20 timmar. Odlingsplattan togs ut och odlingslösningen avlägsnades. Efter Wrights färgning räknades det genomsnittliga antalet vidhäftande tumörceller per 10 brunnar. Om skillnaden mellan de två grupperna var> 1/3 var felet för stort för att användas och felet var inte stort. Odlingsplattan kan formellt testas. (2) Separation av lymfocyter: Ta heparin-antikoagulation 3 ml av personen, separera lymfocyterna med sackaros-diazepam-urlakningslösningen, tvätt dem sedan med Hank-lösning 3 gånger och bland dem sedan med RPMI1640-lösning (2 ~ 3) ) × 105 / ml cellsuspension. (3) Cytotoxicitetstest: lymfocyter och målceller blandas i ett förhållande av 200: 1, och (2 ~ 3) × 104 lymfocyter (i 0,1 ml volym) tillsättes till varje brunn, och cirka 20% kalvserum tillsätts per brunn. 0,1 ml RPMI 1640-lösning placerades i en 37 ° C 5% CO2-inkubator under 40 timmar. Odlingsplattan togs ut och odlingslösningen avlägsnades. Efter Wrights färgning räknades antalet målceller som var kvar vid botten av plattan under ett mikroskop. Inte lämplig för publiken Det finns inga tabuer. Biverkningar och risker Det finns inga relaterade komplikationer och faror.