Enzymkopplad immunosorbentanalys

Den enzymbundna immunosorbentanalysen är en enzymbunden immunosorbentanalys. Det används för att detektera antigenet (eller antikroppen) som ska testas som är belagt i brunnen på den fasta fasplattan. Det vill säga antikroppen är märkt med ett enzym, och den kända antigenen eller antikroppen adsorberas på ytan av fastfasbäraren, och antigen-antikroppsreaktionen utförs på ytan av fastfasbäraren, och den fria komponenten i vätskefasen tvättas bort genom tvättning och slutligen påverkas av enzymet. Färgen utvecklas efter underlaget för att bedöma resultatet. Djupet i färgreaktionen är proportionell mot mängden av motsvarande antikropp eller antigen i provet. Denna färgreaktion kan bestämmas kvantitativt av en ELISA-detektor, som kombinerar känsligheten för enzymkemisk reaktion med specificiteten för antigen-antikroppsreaktionen, vilket gör ELISA-metoden till både specifik och känslig detektionsmetod. Grundläggande information Specialistklassificering: klassificering av tillväxt och utvecklingskontroll: immunologisk undersökning Tillämpligt kön: om män och kvinnor tillämpar fasta: inte fasta Analysresultat: Under normala: Normalt värde: ingen Över normal: negativt: Normal. positivt: Människokroppen är i en dynamisk jämvikt och ohälsosamt tillstånd. Tips: Koppla av medan du kontrollerar. Normalt värde Florans typ och andel av kroppen är normal och människokroppen är i ett tillstånd av dynamisk balans och hälsa. Klinisk betydelse Den enzymbundna immunosorbentanalysen är den mest använda tekniken vid enzymimmunoanalys. Vanligt använda ELISA-metoder inkluderar en dubbel antikroppssandwichmetod och en indirekt metod, den förra för att detektera makromolekylära antigener och den senare för att mäta specifika antikroppar. När det gäller parasitiska sjukdomar används den för serologisk diagnos av Plasmodium, Amoeba, Liegemann, Trypanosoma, Schistosomiasis, cysticercosis, Toxoplasma, Schistosomiasis, leverfluka, blodmask, trikinos Detta är viktigt för både läkare och veterinärer. Det har använts för att upptäcka antikroppar mot Streptococcus, Salmonella, Brucella, Mycobacterium tuberculosis, Haemophilus, Vibrio cholerae, Neisseria gonorrhoeae, Candida, etc., och kan också användas för stivkrampantitoxin och Vibrio cholerae antitoxin. Bestämning och detektion av antikroppar mot rickettsia rickettsiainfektion kan diagnostiseras. Rickettsia kan också användas för att identifiera nära besläktade arter. Det finns också rapporter för att undersöka antikroppar mot Chlamydia psittaci. Influensavirus, kusmavirus, mässling, rubella, rotavirus, herpesvirus, cytomegalovirus, EB-virus, adenovirus, enterovirus, encefalitvirus, gulfebervirus, rabies Giftigt och poliovirus, etc., är mer känsliga än de inspektionsmetoder som för närvarande används. Vid immunologiska sjukdomar finns det test för detektering av autoimmuna sjukdomar och diagnos av allergier, såsom antikroppar mot olika allergener, DNA-antikroppar och tyroglobulinantikroppar, erythematosus-antikroppar och liknande. När det gäller hygien kan det användas för att upptäcka stafylokock enterotoxin och salmonellatoxin i livsmedel. Positiva resultat kan vara sjukdomar: förvärvad bullous epidermolys, trypanosomiasis, schistosomiasis och hepatobiliary sjukdomar, toxoplasmos sklerit, Gestman syndrom, neonatal medfödd toxoplasmos, leverfluke, Siberian rickettsia upptäckt feber, tarmpiriflagellat, turistdiarréförsiktighetsåtgärder 1. Substrat: Olika enzymer har specificitet för substratet, så användningen av olika typer av enzymer kräver olika substrat. När enzymkonjugatet har bestämts (t.ex. AP eller HRP) är området för tillgängliga substrat mycket begränsat. Hur man väljer ett lämpligt substrat inom ramen för detta begränsade substrat bör väljas enligt följande villkor: (1) Substratet ska vara färglöst innan det katalyseras av enzymet och ha uppenbar färg efter att det har katalyserats av enzymet. Ändra så att resultaten tydligt kan urskiljas. (2) färgen är lätt att torka och eluera; (3) produkten efter färgutveckling krävs för att vara stabil, det färgade ämnet som produceras i den kvantitativa bestämningen bör vara lösligt, (4) priset Billig, lätt att få och giftfri. För AP-enzymkonjugatet används därför vanligtvis nitrofenylfosfat, och färgen är orange efter färgutveckling, och färgen är stabil. Reaktionen avslutas med 2 mol / L NaOH, och OD-värdet kan mätas vid en våglängd av 403 nm. 2. Tvättmedel och tunnare: För att maximera mängden antikropp specifikt bunden, bör antigenet belagt i mikroplattans brunn vara något överskott. Under inkubation eller tvättning kan emellertid en del av det adsorberade antigenet tvättas bort från den fasta bäraren. Därför kommer proteinet annat än den specifika antikroppen som tillsatts till testserumet sannolikt att adsorbera till ämnet i den ursprungliga antigenbelagda gropen, öka bakgrundsfärgen och generera en falsk positiv reaktion, vilket är en faktor som begränsar ELISA: s specificitet. Många forskare har lagt till olika skyddande medel till utspädningsmedel och tvättmedel för att hämma den konkurrerande adsorptionen av icke-specifika proteiner. Inspektionsprocess Den grundläggande metoden är att adsorbera en känd antigen eller antikropp på ytan av en fast fasbärare (polystyrenmikro-reaktionsplatta), reagera den enzymmärkta antigen-antikroppsreaktionen på ytan av den fasta fasen och tvätta de fria komponenterna i vätskefasen genom tvätt. dessutom. Enligt den fastfasbärare som används i ELISA är den uppdelad i tre typer: den ena är ELISA med hjälp av polystyrenmikroplatta som bärare, vilket är ELISA (mikroplatta ELISA) som vi vanligtvis hänvisar till, den andra använder nitrocellulosamembran som bärare. ELISA kallas spot ELISA (Dot-ELISA), den andra är ELISA som använder hydrofob polyesterduk som bärare, kallas trasa ELISA (C-ELISA). I mikroplattan ELISA är den vidare uppdelad i indirekt ELISA, dubbel antikroppssandwich ELISA, dubbel sandwich ELISA, konkurrens ELISA, blockering av ELISA och antikroppsupptagning ELISA enligt dess egenskaper. Inte lämplig för publiken Det finns inga speciella tabuer. Biverkningar och risker Det finns inga relaterade komplikationer och faror.