B-lymfocytytmarkörer

Humoral immunfunktionstestning är en typ av test där laboratoriet utvärderar individuell humoral immunfunktion. Detekteringen av humoral immunfunktion är baserad på de grundläggande processerna för humoral immunitet, inklusive B-lymfocytdetektion, Ig-detektion och detektion av antikroppsproduktionsfunktioner. Grundläggande information Specialistklassificering: klassificering av tillväxt och utvecklingskontroll: immunologisk undersökning Tillämpligt kön: om män och kvinnor tillämpar fasta: inte fasta Tips: Om provet inte kan observeras dagen kommer cellerna att hängas i den fluorescerande antikroppskonserveringslösningen, lagras vid 4 ° C och räknas nästa dag. Normalt värde Medelmåttet IgM var 11,2 ± 6,0%; medelgen IgG var 7,5 ± 3,3%. Klinisk betydelse Minskningen i antalet B-celler är relaterad till den humorala immunbristen, och ökningen i antalet B-celler är relaterad till den maligna spridningen av B-celler. försiktighetsåtgärder (1) Närvaron av agglomererat IgG i det fluorescerande antikroppsreagenset och det agglomererade IgG kan vara falsk-positivt bundet till Fc-receptorn på ytan av B-cellen. För att undvika agglomerering av IgG är det därför nödvändigt att uppmärksamma: 1 Fluorescerande antikroppar med ett alltför stort F / P-molförhållande kan inte användas, och vanligtvis är 1 till 3 föredragna. 2 Fluorescerande antikroppar som innehåller proteiner med låg koncentration är instabila vid låg temperatur och bör inte vara lägre än 2 mg / ml. 3 Fluorescerande antikroppar lagrade vid låg temperatur bör inte frysa upptinas upprepade gånger och centrifugeras under 30 minuter vid 150 000 r / min före användning för att ta bort aggregat. (2) När levande lymfocyter används för immunfluorescensfärgning tillsätts NaN3 till alla reagens (märkt antikropp, Hank-lösning, etc.) för att begränsa cellmembranets fluiditet. Annars kommer cap-liknande fluorescens och fagocytos att inträffa, och det faktiska antalet fluorescerande celler kommer att minska. (3) När färgad med en anti-IgG fluorescerande antikropp binder immunkomplexet antigen-antikropp (IgG) som finns i provet till Fc-receptorn på ytan av B-cellen och är fluorescerande positivt. Av detta skäl har det föreslagits att färgas med fluorescerande märkt anti-F (ab) 2-antikropp för att utesluta Fc-receptorer från att färgas. På senare år, på grund av tillkomsten av monoklonala antikroppar mot B-cellyttspecifika molekyler (CD19, CD20, etc.), har det tenderat att använda fluoresceinmärkta monoklonala antikroppar mot CD19 eller CD20 för att direkt reagera med perifera blodlymfocyter; De monoklonala antikropparna (primära antikroppar) av CD19 och CD20 reageras först med lymfocyter, kombineras sedan med fluorescein-märkt kanin eller get-anti-mus-IgG (andra antikropp), räknas med fluorescensmikroskopi eller flödescytometri för att räkna perifert blod. B-lymfocyter. Inspektionsprocess (1) Ta heparin-antikoagulant 2 ml, tillsätt en lika stor mängd Hank-vätska och blanda väl. Upprepa skiktet på den stratifierade lösningen, 2000r / min, centrifugera i 20 min. Lymfocytskiktet togs ut, Hank-lösningen tillsattes, tvättades 3 gånger, 1200 r / min, centrifugerades under 10 minuter, lymfocytkoncentrationen justerades till 1 x 107 / ml och 0,1 ml fördelades i två rör. (2) Tvätta lymfocyt-suspensionen ännu en gång med Hanks lösning, kast bort supernatanten och använd filterpapperet för att ta bort den återstående vätskan från rörets innervägg, och tillsätt 2 droppar kanin anti-human IgG och anti-human IgM fluorescerande antikropp (cirka 0,08 ml). Efter försiktigt skakning, placera 37 ° C inkubatorn i 30 minuter. (3) Ta ut från inkubatorn och tvätta två gånger med Hank-lösning, centrifugera vid 1000 r / min under 10 min, absorbera försiktigt all supernatanten, tillsätt en droppe 50 ml PBS-buffrat glycerin till botten av röret, blanda och ta 1 droppe för att tillsätta Täck täckglaset på objektglaset och observera under ett fluorescensmikroskop. Inte lämplig för publiken Det finns inga tabuer. Biverkningar och risker Inga komplikationer eller faror.