การทดสอบเอนโดท็อกซินของแบคทีเรีย

การทดสอบ endotoxin ของแบคทีเรียคือการตรวจสอบว่า endotoxin ของแบคทีเรียในบทความทดสอบตรงตามข้อกำหนดหรือไม่ Endotoxin เป็น lipopolysaccharide ของผนังเซลล์ของแบคทีเรียแกรมลบและส่วนประกอบที่เป็นพิษคือ lipid A แบคทีเรียเสียชีวิตหลังการแตกสลาย การทดสอบเอนโดท็อกซินในแบคทีเรียนั้นมีสองวิธีคือวิธีเจลและวิธีการวัดความเข้มแสง (photometric) วิธีหลังรวมถึงวิธีวัดความขุ่นและสารตั้งต้น chromogenic เมื่อทำการทดสอบวิธีใดวิธีหนึ่งสามารถใช้สำหรับการทดสอบได้ เมื่อผลการวัดมีความขัดแย้งเว้นแต่จะระบุไว้เป็นอย่างอื่นผลลัพธ์ของวิธีเจลจะมีผลเหนือกว่า ข้อมูลพื้นฐาน หมวดหมู่ผู้เชี่ยวชาญ: การตรวจสอบหมวดหมู่: การตรวจทางจุลชีววิทยาที่ทำให้เกิดโรค บังคับเพศ: ไม่ว่าจะเป็นผู้ชายและผู้หญิงใช้การอดอาหาร: การอดอาหาร ผลการวิเคราะห์: ต่ำกว่าปกติ: ค่าปกติ: ไม่ เหนือปกติ: เชิงลบ: เจลไม่คงสภาพเดิมและเป็นลบจากผนังของท่อ บวก: บันทึกเชิงบวกที่ไม่ได้หลุดออกมาจากผนังเป็นบวก เคล็ดลับ: การทดสอบ endotoxin ของแบคทีเรียคือการตรวจสอบว่า endotoxin ของแบคทีเรียในบทความทดสอบตรงตามข้อกำหนดหรือไม่ ค่าปกติ ชนิดและสัดส่วนของพืชในร่างกายเป็นเรื่องปกติและร่างกายมนุษย์อยู่ในสมดุล ความสำคัญทางคลินิก pyrogen ส่วนใหญ่เป็น endotoxin ที่ปล่อยออกมาจากแบคทีเรีย pyrogen เข้าสู่ระบบไหลเวียนโลหิตของร่างกายและทำให้เกิดชุดของอาการไม่พึงประสงค์เช่นมีไข้ดังนั้นการฉีด pyrogen หรือการทดสอบ endotoxin ของแบคทีเรียจึงเป็นดัชนีคุณภาพที่สำคัญเพื่อความปลอดภัยของการฉีด ผลที่ผิดปกติ ในทางคลินิกเมื่อได้รับยาทางหลอดเลือดดำจำนวนมากผู้ป่วยจะมีอาการหนาวสั่นมีไข้สูงเหงื่อออกเป็นลมอาเจียนภายใน 0.5 ถึง 1 ชั่วโมงเนื่องจากมี pyrogens ในสารละลายยาอุณหภูมิของร่างกายสามารถสูงถึง 40 ° C ในช่วงที่มีไข้สูง พวกเขาสามารถตกใจ ผลลัพธ์ในเชิงบวกอาจเป็นโรค: การ พิจารณาลำไส้อักเสบจากเชื้อแบคทีเรีย Bacillus licheniformis ในการจัดตั้งวิธีการทดสอบแบคทีเรียเอนโดท็อกซินเมื่อคำนวณขีด จำกัด เอนโดท็อกซิน L, MVD และ MVC จำเป็นต้องให้ความสนใจกับพารามิเตอร์ที่สำคัญเช่นปริมาณมนุษย์สูงสุดข้อมูลจำเพาะของผลิตภัณฑ์ความไวของเสมหะรีเอเจนต์เป็นต้นเนื่องจากข้อผิดพลาดในการคำนวณ ล้มเหลวทั้งหมด ปัญหาที่พบบ่อยคือ: 1. การกำหนดขนาดยาทางคลินิกไม่ถูกต้องมีการใช้ยาทั่วไปเท่านั้นไม่ได้รับการพิจารณาขนาดยาที่เป็นไปได้สูงสุดและเส้นทางการบริหารร่างกายมนุษย์ในสูตรการคำนวณขีด จำกัด L = K / M เนื่องจากคำจำกัดความของค่า K และค่า M การเบลอทำให้การกำหนดค่า K และ M ไม่ถูกต้องซึ่งนำไปสู่การคำนวณขีด จำกัด ที่ไม่ถูกต้องในที่สุด ตัวอย่างเช่นการฉีดของผู้ใหญ่คลินิกจะบริหาร 40 ถึง 80 มก. ต่อการฉีดเข้าเส้นเลือดดำและทารก (สามเดือนหรือมากกว่า) ฉีดเข้าเส้นเลือดดำโดย 10 ถึง 20 มก. ในแต่ละครั้ง ขีด จำกัด ของผู้ใหญ่ (น้ำหนักตัว 60 กก.) ปริมาณคือ 3.75EU / mg ในขณะที่น้ำหนักทารกเพียงประมาณ 5 กิโลกรัมขีด จำกัด ที่คำนวณได้คือ 1.25EU / mg หากไม่พิจารณาขนาดสูงสุดต่อกิโลกรัมของน้ำหนักร่างกายไม่ จำกัด ขีด จำกัด ของแบคทีเรียเอนโดท็อกซิน จะมีความแตกต่างใหญ่ 2. ขีด จำกัด endotoxin ของแบคทีเรียบางสายพันธุ์ที่ประกาศนั้นไม่ได้คำนวณตามปริมาณทางคลินิก แต่คำนวณจากปริมาณของการทดสอบ pyrogen ชนิดเดียวกันทำให้เกิดข้อผิดพลาดในการ จำกัด 3. การ จำกัด จำนวน endotoxin ของแบคทีเรียบางพันธุ์นั้นถูกคัดลอกมาจากตำรับยาต่างประเทศและความแตกต่างระหว่างปริมาณการใช้ยาทางคลินิกของตลาดในประเทศและน้ำหนักของชาวจีนและชาวต่างชาตินั้นไม่ได้รับการพิจารณา 4. การคำนวณปริมาณยารายวันที่ผิดพลาด (ใช้ยาหลายครั้งในหนึ่งวัน) 5. เมื่อข้อมูลจำเพาะของความหลากหลาย (ความเข้มข้น) เปลี่ยนแปลงการคำนวณ MVD จะไม่ถูกปรับ 6. ปริมาณสูงสุดที่จะใช้ในการสร้างวิธีการเกินขนาดที่ใช้ในคลินิก กระบวนการตรวจสอบ ก่อนการกำหนด titer มาตรฐาน endotoxin ของแบคทีเรียนั้นได้รับการสอบเทียบเพื่อเป็นเกณฑ์มาตรฐานในการกำหนดความแรงเทียบเท่าของน้ำหนักฐาน ค่า titer ต่อ 1 มก. ของมาตรฐานการทำงานควรไม่น้อยกว่า 2 EU, ไม่เกิน 50 EU และข้อมูลการทดลองที่มีความสม่ำเสมอและมีเสถียรภาพ เครื่องไตเตรทถูกกำหนดดังนี้: มีการใช้ตัวอย่างงานมาตรฐานอย่างน้อย 4 ชุดและใช้ชุดเสมหะรีเอเจนต์และมาตรฐานเดียวกัน แต่ละมาตรฐานการทำงานจะถูกเจือจางด้วยน้ำทดสอบ endotoxin * ตามน้ำหนักและผลิตภัณฑ์มาตรฐานชุดของการลดลงของ endotoxin 2 เท่าของการจัดทำและเตรียมการทำปฏิกิริยากับสารเคมีไฮดราซีนเมื่อลอการิทึมของจุดสิ้นสุดปฏิกิริยาของสี่มาตรฐานการทำงาน เมื่อค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน (S) ของค่าเฉลี่ยน้อยกว่า 0.365 ค่าเฉลี่ยเรขาคณิต (เป็น ng / mg) ของจุดสิ้นสุดปฏิกิริยาของสี่มาตรฐานการทำงานและจุดสิ้นสุดปฏิกิริยา (เป็น EU / mg) ของมาตรฐาน ประการที่สองการเตรียมการทดสอบ 1. เครื่องใช้ที่ใช้ในวิธีนี้จะได้รับการกำจัดเอนโดท็อกซินออกไปจากภายนอกการคั่วแบบแห้งที่ 250 ° C เป็นเวลา 30 นาทีหรือ 180 ° C เป็นเวลา 2 ชั่วโมงอาจใช้วิธีอื่นที่เหมาะสมก็ได้เช่นกัน การดำเนินการทดสอบควรป้องกันการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ 2. ตรวจสอบค่าความไวของฉลากหมายเลขชุดน้ำยาทดสอบก่อนการทดสอบซึ่งควรเป็นไปตามข้อกำหนด เพิ่มปริมาณของตัวทำละลายน้ำยาไฮดราซีน หลังจากการละลายมันเป็นน้ำยาน้ำยากัวนิดีนและพร้อมใช้งาน 3. การเจือจางของตัวอย่างทดสอบ: เมื่อค่าเครื่องหมายความไวของชุดหมายเลข鲎รีเอเจนต์น้อยกว่าขีด จำกัด พิษภายในของตัวอย่างทดสอบให้คำนวณโดยสูตรต่อไปนี้และใช้น้ำทดสอบ endotoxin * เพื่อเจือจางรีเอเจนต์สำหรับตรวจสอบ ปัจจัยเจือจางของตัวอย่างทดสอบ = X / λ X: Endotoxin จำกัด Endotoxin จำกัด (EU / ml) λ: ค่าความไวของเอเจนต์ทดสอบสำหรับเอเจนต์ทดสอบ (EU / ml) ประการที่สามตรวจสอบ หลอดทดลองขนาด 4 × 75 มม. (หรือ 0.1 มล. / ชุดของหลอดบรรจุเสมหะรีเอเจนต์ดั้งเดิม) ที่มีสารละลายรีเอเจนต์เสมหะ 0.1 มล. ซึ่ง 2 หลอดจะถูกเพิ่มด้วย 0.1 มล. สำหรับหลอดทดลองและ 1 สำหรับมาตรฐานการทำงาน 2 λ endotoxin ใช้ 0.1 มิลลิลิตรเป็นหลอดควบคุมบวกและเติมสารละลายเสมหะ 0.1 มิลลิลิตรเป็นหลอดควบคุมเชิงลบ หลังจากผสมหลอดทดลองเบา ๆ หลอดจะถูกปิดและวางในแนวตั้งในอ่างน้ำอุณหภูมิ 37 ± 1 °ซเป็นเวลา 60 ± 2 นาที ระวังเมื่อถือหลอดและจับหลอดเพื่อหลีกเลี่ยงผลลบเนื่องจากการสั่นสะเทือน (4) การตัดสินผลลัพธ์ หลอดถูกนำออกจากอ่างน้ำเบา ๆ และกลับด้านอย่างช้า ๆ ที่ 1800 เจลในหลอดไม่ได้เปลี่ยนรูปส่วนที่เป็นบวกไม่หลุดจากผนังท่อ (+) เจลไม่สามารถคงอยู่อย่างสมบูรณ์และติดลบจากผนังหลอด (ก) หากหลอดทดลอง 2 คือ (1) จะต้องได้รับการพิจารณาว่าเป็นไปตามข้อบังคับและจะไม่ดำเนินการทดสอบ pyrogen (วิธีกระต่าย) หากทั้งสองหลอดเป็น (+) พวกเขาควรได้รับการพิจารณาว่าไม่สอดคล้องกับข้อบังคับ ตัวอย่างเช่น 1 หลอดใน 2 หลอดคือ (+) และ 1 หลอดคือ (1) ตามวิธีที่อธิบายไว้จะทำการทดสอบซ้ำ 4 หลอดหนึ่งหลอดใน 4 หลอดคือ (+) ซึ่งหมายความว่าไม่สอดคล้องกับระเบียบ ยกเว้นที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่นในข้อความบทความทดสอบที่ตรงตามข้อกำหนดจะต้องทดสอบโดยวิธีการทดสอบ pyrogen (วิธีกระต่าย) และตัดสินตามผล ขีด จำกัด ของ endotoxin ของแบคทีเรียในบทความทดสอบให้เป็นไปตามบทบัญญัติของบทความที่เกี่ยวข้อง การควบคุมเชิงบวกคือ (1) หรือการควบคุมเชิงลบคือ (+) และการทดสอบไม่ได้ผล เอกสารแนบ: การทดสอบแบคทีเรียเอนโดท็อกซินสำหรับน้ำที่ผ่านการฆ่าเชื้อสำหรับฉีด, น้ำสำหรับฉีด, การฉีดโซเดียมคลอไรด์, การฉีดกลูโคส 5% และ 10% ไม่เหมาะกับฝูงชน โดยทั่วไปไม่มีข้อห้าม ปฏิกิริยาและความเสี่ยงที่ไม่พึงประสงค์ โดยทั่วไปไม่เป็นอันตราย