เซรั่มโปรตีนอิเล็กโทรโฟรีซิส (SPE)

ชีวโมเลกุลเช่นโปรตีนมีประจุลบหรือประจุบวกในบัฟเฟอร์และเคลื่อนที่ไปยังขั้วบวกหรือขั้วลบในสนามไฟฟ้าซึ่งเรียกว่าอิเล็กโตรโฟรีซิส เนื่องจากคะแนนไอโซอิเล็กทริกที่แตกต่างกันขนาดโมเลกุลรูปร่างและอัตราส่วนประจุต่อมวลที่แตกต่างกันโมเลกุลโปรตีนที่แตกต่างกันจึงมีอิเลคโตรฟรีติคที่แตกต่างกันและโปรตีนต่าง ๆ สามารถแยกออกจากกันได้ เทคนิค electrophoresis ที่ใช้กันทั่วไป ได้แก่ เซลลูโลสอะซิเตทเมมเบรนอิเล็กโทรโฟเรส, agarose gel electrophoresis, polyacrylamide gel electrophoresis, และ immunoelectrophoresis นอกจากนี้หลาย myeloma มักจะมีแถบ M globulin ระหว่างภูมิภาคเบต้าโกลบูลินและภูมิภาคแกมมาโกลบูลิน; อัลบูมิเมียสองเท่าแสดงวงอัลบูมินสองเท่า ข้อมูลพื้นฐาน การจำแนกผู้เชี่ยวชาญ: การจำแนกประเภทการเจริญเติบโตและการพัฒนา: การตรวจสอบทางชีวเคมี บังคับเพศ: ไม่ว่าจะเป็นผู้ชายและผู้หญิงใช้การอดอาหาร: การอดอาหาร รวมถึงรายการ: ซีรั่ม micro2 microglobulin (β2-MG), เซรั่มα2-macroglobulin, เซรั่มα1-microglobulin เคล็ดลับ: การอดอาหาร 12 ชั่วโมง, การทดสอบเลือดดำ, ตัวอย่างจะต้องเป็นเลือดสด ก่อนการทดสอบคุณควรแจ้งให้แพทย์ทราบเกี่ยวกับยาที่คุณใช้เมื่อเร็ว ๆ นี้และการเปลี่ยนแปลงทางสรีรวิทยาล่าสุด ค่าปกติ เซลลูโลสอะซิเตทเยื่อ electrophoresis อัลบูมิน 0.61 ~ 0.71 (61% ~ 71%), α1โกลบูลิน 0.03 ~ 0.04 (3% ~ 4%), α2โกลบูลิน 0.06 ~ 0.10 (6% ~ 10%), เบต้าโกลบูลิน 0.07 ถึง 0.11 (7% ถึง 11%) และ gamma globulin 0.09 ถึง 0.18 (9% ถึง 18%) ความสำคัญทางคลินิก 1, การลดโปรตีนชนิดหนึ่งที่พบในโรคไวรัสตับอักเสบเรื้อรัง, โรคตับแข็ง, มะเร็งตับและอื่น ๆ 2, α1โกลบูลิน (ไกลโคโปรตีน) เพิ่มขึ้นในมะเร็งตับระยะแรก มันลดลงในตับอักเสบรุนแรง, โรคตับแข็งและอาการโคม่าตับและมีความสัมพันธ์เชิงบวกกับอัลบูมิ ความมุ่งมั่นของα1โกลบูลินในโรคตับมีค่าอ้างอิงสำหรับการตัดสินความรุนแรงและการพยากรณ์โรคของโรคไวรัสตับอักเสบ โดยทั่วไปการเพิ่มขึ้นของα1โกลบูลินบ่งชี้ว่าสภาพนั้นไม่รุนแรงและการลดลงของα1โกลบูลินบ่งชี้ว่าสภาพนั้นหนักกว่าในภาวะตับล้มเหลวอย่างรุนแรง 3. ไม่มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญในระยะแรกของไวรัสตับอักเสบα2 globulin และเพิ่มขึ้นเรื่อย ๆ หลังจากผ่านไปหนึ่งสัปดาห์ตับอักเสบกึ่งเฉียบพลันและเนื้อร้ายตับเฉียบพลันและตับแข็ง decompensated ลดลง 4, เบต้าโกลบูลินเพิ่มขึ้นในตับไขมัน, ไขมันในเลือดสูง, โรคไต, โรคเบาหวานที่มีไขมันในเลือดสูง, ดีซ่านอุดกั้น, เนื้องอกเนื้องอก ในโรคตับ cholestasis เนื้อหาของมันจะเพิ่มขึ้นขนานกับการเพิ่มขึ้นของα2 globulin ลดลงในไวรัสตับอักเสบเฉียบพลันและเรื้อรัง, โรคตับแข็งโดยเฉพาะอย่างยิ่งโรคตับแข็ง decompensated และโรคตับแข็งตายลดลงอย่างมีนัยสำคัญมากที่สุด 5, แกมมาโกลบูลิเพิ่มขึ้นในตับอักเสบเรื้อรัง, โรคตับแข็ง, ตับและโรคถุงน้ำดี โรคตับแข็งทั่วไปสามารถเห็นได้ในการรวมตัวของβและγแบนด์เพื่อสร้างสะพานβ-γ การเปลี่ยนแปลงของแกมม่าโกลบูลินในผู้ป่วยโรคตับสามารถสะท้อนความรุนแรงของอาการ เมื่อสภาพดีขึ้นเนื้อหาจะค่อยๆลดลงสู่ระดับปกติหากยังคงลดลงในระดับสูงแสดงว่าสภาพนั้นรุนแรงการพยากรณ์โรคไม่ดีและมีแนวโน้มที่จะพัฒนาโรคตับอักเสบเรื้อรังและโรคตับแข็ง นอกจากนี้การติดเชื้อ schistosomiasis หลาย myeloma โรคเนื้อเยื่อเกี่ยวพันและอื่น ๆ นอกจากนี้ยังสามารถยกระดับ ลดอุบัติการณ์ของการขาด gamma globulin ผู้ป่วยเคมีบำบัดบางส่วน นอกจากนี้หลาย myeloma มักจะมีแถบ M globulin ระหว่างภูมิภาคเบต้าโกลบูลินและภูมิภาคแกมมาโกลบูลิน; อัลบูมิเมียสองเท่าแสดงวงอัลบูมินสองเท่า ผลลัพธ์ที่ต่ำอาจเป็นโรค: ผลสูงของ ดีซ่าน cholestatic อาจเป็นโรค: โรคตับแข็ง, โรคมะเร็งตับมะเร็งตับปฐมภูมิ, myeloma หลายในผู้สูงอายุ 1 อดอาหาร 12 ชั่วโมงตรวจเลือดดำตัวอย่างต้องเป็นเลือดสด 2. ก่อนการทดสอบคุณควรแจ้งให้แพทย์ทราบเกี่ยวกับยาที่คุณใช้เมื่อเร็ว ๆ นี้และการเปลี่ยนแปลงทางสรีรวิทยาล่าสุด 3. ความสูงทางสรีรวิทยาอาจเกิดขึ้นในกรณีต่อไปนี้: (1) การเพิ่มขึ้นของα1-globulin สามารถมองเห็นได้หลังจากการตั้งครรภ์ 6 เดือน (2) การเพิ่มขึ้นของα2-globulin สามารถมองเห็นได้ในทารกที่เกิด 1-6 เดือนโดยเพิ่มขึ้นปานกลางใน 4 ถึง 6 เดือนของการตั้งครรภ์และเพิ่มขึ้นอย่างมากใน 7 ถึง 9 เดือน (3) การเพิ่มระดับ glo-globulin ในทารกหลังคลอด 4 ถึง 6 เดือนของการตั้งครรภ์ (4) การเพิ่มขึ้นของ glo-globulin เกิดขึ้นหลังจากการฉีดวัคซีนป้องกันการฉีดวัคซีน กระบวนการตรวจสอบ 1. เพิ่มบัฟเฟอร์ลงในถังอิเล็กโทรโฟเรซิสและปรับบัฟเฟอร์ในถังทั้งสองด้านเพื่อให้อยู่ในระนาบเดียวกัน 2. การเตรียมฟิล์มเซลลูโลสอะซิเตท: ใช้ฟิล์มเซลลูโลสอะซิเตท (2 ซม. x 8 ซม.) และวาดเส้นแนวนอนด้วยดินสอที่ 1.5 ซม. (ด้านหนึ่งของด้านลบ) ของพื้นผิวขรุขระเพื่อทำเครื่องหมายประ หลังจากกำหนดหมายเลขและระบุขั้วไฟฟ้าบวกและลบฟิล์มจะจุ่มลงในสารละลายบัฟเฟอร์โซเดียม barbiturate-barbital และหลังจากที่อิ่มตัวอย่างเพียงพอ (ปกติ 20 นาที) บัฟเฟอร์ส่วนเกินจะถูกลบออกโดยประกบกระดาษกรองที่สะอาด 3. ขนฟิล์มเซลลูโลสอะซิเตทติดอยู่กับที่ยึดถังอิเล็กโตรโฟรีซิสและยืดให้ตรง ปิเปต 3 ~ 5μlของเซรุ่มที่ไม่ใช่ hemolytic ด้วย micropipette และเพิ่มตามแนวนอนที่เส้นแนวนอนตัวอย่างควรเก็บไว้ในระยะห่างจากขอบของฟิล์มเพื่อหลีกเลี่ยงการเสียรูปของโปรตีนในรูปแบบอิเล็กโตรโฟรีซีส เมื่อด้านที่มีแสงหงายขึ้นให้ติดมันราบกับโครงตัวถังอิเล็กโทรโฟรีซิสและเชื่อมต่อปลายทั้งสองของฟิล์มเข้ากับบัฟเฟอร์ด้วยกระดาษกรองสองชั้นหรือผ้าโปร่งสี่ชั้นและรอสักครู่ 4 เปิดไฟให้ความสนใจกับขั้วบวกและขั้วบวกบนฟิล์มเซลลูโลสอะซิเตทไม่ได้เชื่อมต่อที่ไม่ถูกต้อง แรงดันไฟฟ้า 90 ~ 150v ปัจจุบัน 0.4 ~ 0.6mA / cm (อิเล็กโทรที่แตกต่างกันที่ต้องการแรงดันไฟฟ้าในปัจจุบันอาจจะแตกต่างกันควรจะมีความยืดหยุ่น) พลังงานฤดูร้อน 45 นาทีเวลาเปิดฤดูหนาวในเวลานานอีกเล็กน้อยประมาณ 60 นาทีขยายโซนอิเล็ก ~ 35 มม. สามารถ 5, การย้อมสี: หลังจากเสร็จสิ้นการใช้พลังงาน, เอาฟิล์มและแช่ในสารละลายสีย้อม Lichunhong S หรือสารละลายย้อมสีอะมิโนสีดำ 10B, ย้อมเป็นเวลา 5 ถึง 10 นาที (โดยโซนอัลบูมิน) จากนั้นล้างส่วนที่เหลือในการล้าง ย้อมจนกระทั่งพื้นหลังไม่มีสี 6 เชิงปริมาณ: 1 วิธีสี: หยดฟิล์มล้างตัดพื้นที่สีย้อมลงไปในหลอดที่เกี่ยวข้องเพิ่ม 0.6ml / L โซเดียมไฮดรอกไซด์ 6ml ในหลอดอัลบูมิน (คำนวณค่าการดูดซับคูณ 2) ส่วนที่เหลือ เติม 3 มิลลิลิตรลงในหลอดแต่ละหลอดเขย่าหลาย ๆ ครั้งแล้ววางในถังเก็บน้ำ 37 ° C เป็นเวลา 20 นาทีเพื่อให้สีล้างออก การย้อมสีอะมิโนแบล็ก 10B การดูดกลืนแสงของหลอดแต่ละหลอดอ่านที่ 620 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องสเปคโทรโฟโตมิเตอร์แล้วคำนวณหาเนื้อหาของหลอดแต่ละหลอด (การควบคุมหลอดเปล่าแบบพร้อมกัน) เมื่อ Lichunhong S ถูกย้อมสีน้ำชะขยะจะได้รับการบำบัดด้วยโซเดียมไฮดรอกไซด์ 0.1 mol / L และปริมาณก็เหมือนกันกับด้านบน หลังจากผ่านไป 10 นาทีให้เติมกรดอะซิติกขนาด 0.6 มล. 400 มล. / ลิตรลงในหลอดอัลบูมิน (เพิ่มการดูดซับ 2 เท่า) และเพิ่ม 0.3ml ลงในหลอดอื่น ๆ เพื่อปรับโซเดียมไฮดรอกไซด์ให้เป็นกลาง อ่านค่าการดูดกลืนแสงของแต่ละหลอดที่ 520 นาโนเมตรโดยสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ (การควบคุมช่องว่างพร้อมกัน) จากนั้นทำการคำนวณเนื้อหาที่เกี่ยวข้อง 2 วิธีการสแกน Densitometer: A. โปร่งใส: ดูดของเหลวที่ล้างออกบนฟิล์ม (เพื่อป้องกันไม่ให้ของเหลวใสเจือจางเพื่อส่งผลกระทบต่อผลลัพธ์ที่โปร่งใส) จุ่มฟิล์มลงในของเหลวใสเป็นเวลา 2 ถึง 3 นาทีจากนั้นนำออกมาและทำให้แบนในลักษณะกลิ้ง ทำความสะอาดชิ้นส่วนที่ไม่มีรอยขีดข่วน (อย่าสร้างฟองอากาศ) ตั้งค่าสไลด์สักครู่นำของเหลวใสส่วนเกินออกวางในเตาอบที่อุณหภูมิคงที่ 90 ° C ถึง 100 ° C นำเข้าอบประมาณ 10 ถึง 15 นาทีนำออกและเย็นเพื่อ ที่อุณหภูมิห้องพื้นที่โปรตีนโปร่งใสด้วยวิธีนี้จะแตกต่างกันฟิล์มแบนและสามารถสแกนและเก็บรักษาโดยตรงอย่างถาวร (โปร่งใสด้วยไฮโดรเจนแนฟทาลีนหรือพาราฟินเหลวฟิล์มล้างควรจะแห้งและโปร่งใสและฟิล์มใสไม่โปร่งใส) มันเป็นเวลานานและมีแนวโน้มที่จะเกิดริ้วรอย) B. ปริมาณการสแกน: ฟิล์มใสวางอยู่ในเครื่อง densitometer อัตโนมัติหรือกล่องดำ densitometer อื่น ๆ สำหรับการวิเคราะห์การสแกน ไม่เหมาะกับฝูงชน ไม่มีเลย ปฏิกิริยาและความเสี่ยงที่ไม่พึงประสงค์ ไม่มีเลย