ฮีโมโกลบินอิเล็กโตรโฟรีซิส

จุดไอโซอิเล็กทริกที่แตกต่างกันของฮีโมโกลบินต่างๆมีประจุบวกและลบต่างกันในบัฟเฟอร์พีเอชค่าหนึ่ง ข้อมูลพื้นฐาน การจำแนกผู้เชี่ยวชาญ: การจำแนกประเภทการเจริญเติบโตและการพัฒนา: การตรวจเลือด บังคับเพศ: ไม่ว่าจะเป็นผู้ชายและผู้หญิงใช้การอดอาหาร: การอดอาหาร เคล็ดลับ: ก่อนการตรวจอาหารจะเบาและห้ามดื่มแอลกอฮอล์ ค่าปกติ วิธีอิเล็กโทรโฟรีซิสคือ HbA 95%, HbA 21.1% ถึง 3.2% และ HbA 32% ถึง 3% วิธีการของนักร้องนั้นมี HbF <4% ความสำคัญทางคลินิก 1 ส่วนประกอบหลักคือ HbS และไม่มี HbB สามารถเห็นได้ในโรคฮีโมโกลบินเซลล์เคียว 2, HbS, HbF และ HbA2 เพิ่มขึ้นเล็กน้อยในขณะที่ HbA น้อยหรือหายไปรวมกับการสอบสวนสามารถวินิจฉัยว่าเป็นโรคโลหิตจาง HbS-β-marine พบมากในทะเลเมดิเตอร์เรเนียน 3 นอกเหนือไปจาก HbS ที่มี 10% -30% HbA และเพิ่มขึ้น HbF และ HbA2, HbS-β-ทางทะเลโรคโลหิตจางนอกจากนี้ยังสามารถได้รับการพิจารณา 4. HbS คิดเป็น 20% -30%, HbA คิดเป็น 65% -75% และมี HbF และ HbA2 ปกติซึ่งสามารถวินิจฉัยได้ว่าเป็น HbS-α-marine anemia 5, HbA หายไป HbC คิดเป็น 28% -44% ของฮีโมโกลบินรวมสามารถวินิจฉัยได้ว่าเป็นโรคฮีโมโกลบินพบมากในคนดำเซลล์เป้าหมายมากขึ้นสามารถมองเห็นได้ในเลือด 6 มี HbS HbD ก็ปรากฏขึ้นมีเซลล์เป้าหมายในภาพยนตร์เลือดสามารถวินิจฉัยว่าเป็นโรคฮีโมโกลบิน D ที่พบบ่อยในภาคเหนือของจีน 7 ผล HbE ในอิเล็กสามารถวินิจฉัยว่าเป็นโรคฮีโมโกลบิน E ส่วนใหญ่พบในเอเชียตะวันออกเฉียงใต้อินเดีย ฯลฯ จีนเป็นเรื่องธรรมดามากในภาคใต้ของมณฑลกวางตุ้ง ข้อควรระวัง เยื่อเมมเบรนเส้นใยอิเล็กโทรไลค Reagent: อิเล็กโตรโฟรีซิสกับไมโครเฮโมโกลบินของเยื่อเซลลูโลสอะซิเตท การดำเนินงาน: (1) เมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตทถูกตัดเป็น 1/3 (4 ซม. x 8 ซม.) ในบัฟเฟอร์ TEB นาน 10 นาทีหรือมากกว่า (2) นำฟิล์มเซลลูโลสอะซิเตทออกและใช้กระดาษกรองเพื่อกำจัดน้ำส่วนเกิน 10 μlของ 100 g / L เลือดละลายถูกดูดซึมโดยปิเปต Hb และนำไปใช้อย่างสม่ำเสมอกับขอบล่างของแก้วดันและวางอยู่บนด้านเคลือบที่ระยะ 1.5 ถึง 2.0 ซม. จากปลายแคโทดของฟิล์ม ทำสำเนาสองชุดของตัวอย่างแต่ละชิ้นพร้อมกัน (3) อิเล็กโตรโฟรีซิส: บัฟเฟอร์ถูกอิเลคโตรโฟเรสกับปริมาณฮีโมโกลบิน แรงดันไฟฟ้าคือ 180V และเวลา 40 นาที ~ 1 ชั่วโมง (เซลล์จะถูกแยกอย่างชัดเจนในแต่ละโซน) หลังจากอิเลคโตรเรสอิเล็กโทรดจะถูกแลกเปลี่ยนและสามารถใช้บัฟเฟอร์ได้ซ้ำ ๆ (4) การตัดและการนับปริมาณ HbA, HbA2 และเขตควบคุมที่สอดคล้องกับขนาดของ HbA2 ถูกตัดแยกต่างหาก หากโซน Hb ที่ผิดปกติ (HbX) ถูกตัดในเวลาเดียวกันก็จะถูกวางในหลอดที่เกี่ยวข้อง เพิ่มบัฟเฟอร์ TEB 10 มิลลิลิตรไปยังหลอด HbA เพิ่มบัฟเฟอร์ TEB 2 มิลลิลิตรลงในหลอดแต่ละหลอดแช่ทิ้งไว้ 30 นาทีเขย่าอย่างต่อเนื่อง หลังจากที่ถูกชะออกอย่างสมบูรณ์ eluate ผสมและ 721 spectrophotometer ที่มีความยาวคลื่น 413 nm ว่างเปล่าเป็นศูนย์และวัดการดูดกลืนแสงของแต่ละหลอด กระบวนการตรวจสอบ (1) อิเล็กโทรโฟซิสของฮีโมโกลบินติดตาม: 1 Dip film: ฟิล์มเซลลูโลสอะซิเตทลอยบนพื้นผิวของบัฟเฟอร์ TEB และสามารถใช้งานได้เป็นเวลาอย่างน้อย 20 นาทีหลังจากแช่และจมอย่างสม่ำเสมอ วิธีนี้จะช่วยป้องกันไม่ให้เกิดฟองอากาศ 2 จุด: เอาฟิล์มเซลลูโลสอะซิเตทออกและใช้กระดาษกรองเพื่อกำจัดน้ำส่วนเกิน สารละลายฮีโมโกลบินถูกดูดเข้าไปในไมโครพิเทตและวางในร่องเว้าของอุปกรณ์หลายตัวอย่างสารละลายเฮโมโกลบินถูกถ่ายโดยปิเปตแบบหลายตัวอย่าง 1.5 ถึง 2 ซม. จากปลายแคโทดจำนวนการจำประมาณ 3 ถึง 5 ไมโครลิตรและสารละลายฮีโมโกลบินปกติที่ตำแหน่งขนานถูกใช้เป็นตัวควบคุม 3 Electrophoresis: เติมสารละลายบัฟเฟอร์ BB ในปริมาณที่เท่ากันในถังบัฟเฟอร์ทั้งสองด้านของถังไมโครอิเล็กโทรโฟเรซิสและใช้กระดาษกรองสองชั้นเป็นสะพานเกลือบนแผ่นรองรับเซลลูโลสอะซิเตท ฟิล์มถูกเคลือบด้านล่างและขั้วไฟฟ้าเชิงลบถูกยกเลิกโดยจุดและปรับสมดุลเป็นเวลา 5 นาที เปิดเครื่อง แรงดันไฟฟ้าคือ 180V, ปริมาณกระแสประมาณ 0.2mA / cm, และเวลาอิเลคโตรโฟรีซิสคือ 20-30 นาที สามารถใช้บัฟเฟอร์ในถังได้อีกครั้งหลังจากเปลี่ยนขั้วไฟฟ้า 4 การย้อมสี: ฟิล์มอิเล็กโทรโฟเรเซสถูกนำออกมาในสารละลายย้อมสีแดง Ponceau เป็นเวลาประมาณ 10 นาทีและล้างด้วยกรดอะซิติก 3% หลายครั้งจนกระทั่งพื้นหลังเป็นสีขาวและแห้ง 5 โปร่งใส: ฟิล์มเซลลูโลสอะซิเตทถูกแช่ในของเหลวใสยึดติดกับแผ่นกระจกที่สะอาดและฟองอากาศระหว่างทั้งสองจะถูกเอาออกโดยแท่งแก้ว กรดอะซิติกจำนวนเล็กน้อยถูกเทลงในกระบอกสูบโครมาโตกราฟฟีและแผ่นแก้วถูกครอบกลับด้านบนกระบอกสูบโครมาโตกราฟี (โดยฟิล์มหันเข้าด้านใน) ควันด้วยกรดอะซิติกน้ำแข็งระเหยเป็นเวลา 10 ถึง 20 นาทีและเอาฟิล์มออกเมื่อมีความโปร่งใส (2) เซลลูโลสอะซิเตทเมมเบรน electrophoresis การย้อมสีวิธีการสี: 1 นำเมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตท 4 ซม. x 6 ซม. แช่ในบัฟเฟอร์ TEB และซับน้ำส่วนเกินด้วยกระดาษกรอง ที่ระยะห่างจากปลายแคโทด 1.5 ซม. ของผิวเคลือบประมาณ 5 μlของสารละลาย 50 g / L Hb จะถูกบรรจุในแนวตรงและเต็มไปด้วยปิเปตเฮโมโกลบินหลังจากที่สารละลายฮีโมโกลบินทะลุผ่านเยื่อกรอง 2 อิเล็กโทร: แรงดัน 180V, เวลา 30 ~ 40 นาที, ภายใต้การแยกโซน Hb โดยสมบูรณ์ อิเล็กโทรดจะถูกแลกเปลี่ยนหลังจากอิเล็กโตรโฟรีซิสและอิเล็กโตรโฟรีซิสบัฟเฟอร์สามารถใช้ได้หลายครั้ง 3 การย้อมสี: ภาพยนตร์ถูกจุ่มลงในสารละลายการย้อมต้องย้อมเป็นเวลา 2 ชั่วโมงในฤดูหนาวและ 25 ~ 30 °ซในฤดูร้อนสามารถย้อมได้ประมาณ 30 นาทีเท่านั้น โปรดทราบว่าหากการย้อมสีไม่โปร่งใส (เช่นเวลาสั้นเกินไปหรือสารละลายฮีโมโกลบินเข้มข้นเกินไป) หรือแรงดันไฟฟ้าสูงเกินไปแถบ HbA นั้นเข้มข้นเกินไปและริบบิ้นหลุดง่ายซึ่งมีผลต่อความแม่นยำของการวัดปริมาณ ล้างด้วยน้ำยาฟอกสีฟันหลายครั้งจนกระทั่งพื้นหลังล้างออก 4 การหาปริมาณ: เมมเบรนที่ล้างออกแล้วและแต่ละโซนถูกตัดและมีการวางโซนควบคุมที่สอดคล้องกับขนาดของ HbA2 ในแต่ละหลอดทดลองที่เกี่ยวข้อง น้ำชะขยะ 10 มล. ถูกเติมลงในหลอด HbA และหลอดที่เหลือจะถูกแช่ใน 2 มล. แช่ 20 นาทีและเขย่าเป็นครั้งคราว ทำให้ริบบิ้นหลุดออกอย่างสมบูรณ์ (โปรดทราบว่าที่อุณหภูมิสูงกว่าเวลาการกำจัดไม่ควรยาวเกินไปมิฉะนั้นสีน้ำเงิน eluent จะลดลงและค่อยๆเปลี่ยนเป็นสีม่วง) eluate ถูกผสมและการดูดซับของแต่ละหลอดวัดโดยใช้ 721 spectrophotometer ที่ความยาวคลื่น 620 นาโนเมตรและ zeroing โดยไม่มีช่องว่าง 5 การคำนวณ: colorimetry โดยตรงเดียวกัน เยื่อเมมเบรนเส้นใยอิเล็กโทรไลค Reagent: อิเล็กโตรโฟรีซิสกับไมโครเฮโมโกลบินของเยื่อเซลลูโลสอะซิเตท การดำเนินงาน: (1) เมมเบรนเซลลูโลสอะซิเตทถูกตัดเป็น 1/3 (4 ซม. x 8 ซม.) ในบัฟเฟอร์ TEB นาน 10 นาทีหรือมากกว่า (2) นำฟิล์มเซลลูโลสอะซิเตทออกและใช้กระดาษกรองเพื่อกำจัดน้ำส่วนเกิน 10 μlของ 100 g / L เลือดละลายถูกดูดซึมโดยปิเปต Hb และนำไปใช้อย่างสม่ำเสมอกับขอบล่างของแก้วดันและวางบนด้านเคลือบที่ระยะ 1.5 ถึง 2.0 ซม. จากปลายแคโทดของฟิล์ม ทำสำเนาสองชุดของตัวอย่างแต่ละชิ้นพร้อมกัน (3) อิเล็กโตรโฟรีซิส: อิเล็กโตรโฟรีซิสของบัฟเฟอร์และไมโครเฮโมโกลบิน แรงดันไฟฟ้าคือ 180V และเวลา 40 นาที ~ 1 ชั่วโมง (เซลล์จะถูกแยกอย่างชัดเจนในแต่ละโซน) หลังจากอิเลคโตรเรสอิเล็กโทรดจะถูกแลกเปลี่ยนและสามารถใช้บัฟเฟอร์ได้ซ้ำ ๆ (4) การตัดและการนับปริมาณ HbA, HbA2 และเขตควบคุมที่สอดคล้องกับขนาดของ HbA2 ถูกตัดแยกต่างหาก หากโซน Hb ที่ผิดปกติ (HbX) ถูกตัดในเวลาเดียวกันก็จะถูกวางในหลอดที่เกี่ยวข้อง เพิ่มบัฟเฟอร์ TEB 10 มิลลิลิตรไปยังหลอด HbA เพิ่มบัฟเฟอร์ TEB 2 มิลลิลิตรลงในหลอดแต่ละหลอดแช่ทิ้งไว้ 30 นาทีเขย่าอย่างต่อเนื่อง หลังจากที่ถูกชะออกอย่างสมบูรณ์ eluate ผสมและ 721 spectrophotometer ที่มีความยาวคลื่น 413 nm ว่างเปล่าเป็นศูนย์และวัดการดูดกลืนแสงของแต่ละหลอด ไม่เหมาะกับฝูงชน ไม่มีข้อห้าม ปฏิกิริยาและความเสี่ยงที่ไม่พึงประสงค์ ความเสี่ยงของการติดเชื้อ: หากคุณใช้เข็มที่ไม่สะอาดคุณอาจเสี่ยงต่อการติดเชื้อ