การทดสอบการก่อตัวของเม็ดเลือดแดงของหนูแรท

ลิมโฟซัยต์บีมีส่วนเกี่ยวข้องในการสังเคราะห์แอนติบอดีและเป็นเซลล์เอฟเฟกต์ของการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันของร่างกาย พื้นผิวของเซลล์ B มีอิมมูโนโกลบูลิน (SmIg), ตัวรับเอฟซี, และตัวรับสัญญาณเสริม มันจับกับส่วน Fc ของคอมเพล็กซ์แอนติเจนและแอนติบอดี เซลล์เม็ดเลือดแดงไก่หรือแกะได้รับการคัดเลือกและไวต่อสารก่อภูมิแพ้ EA ที่มีแอนติบอดีต่อเม็ดเลือดแดงที่สอดคล้องกันตัวรับ Fc ของเซลล์ B สามารถสร้างพวงมาลัยกับ EA ซึ่งเรียกว่า EA มาลัย หากมีการเพิ่มคอมเพล็กซ์ EA เพื่อเติมเต็มและผูกกับตัวรับส่วนเติมของเซลล์ B จะมีการสร้างดอกกุหลาบ EAC ขึ้น มีตัวรับ RBC ของ murine บนพื้นผิวของเซลล์ B ซึ่งสามารถจับกับเมาส์ RBCs เพื่อสร้างเม็ดเลือดแดงของหนู (M-RFC) ซึ่งส่วนใหญ่ผูกติดกับเซลล์ B ที่มีตัวรับ IgM และ M-RFC ส่วนใหญ่จะไร้เดียงสาเซลล์ B การทดสอบนี้ส่วนใหญ่จะใช้เพื่อตรวจหาจำนวนของเซลล์เม็ดเลือดขาว B และเพื่อกำหนดระดับของภูมิคุ้มกันของร่างกาย ข้อมูลพื้นฐาน การจำแนกผู้เชี่ยวชาญ: การจัดหมวดหมู่การตรวจ: การตรวจเลือด บังคับเพศ: ไม่ว่าจะเป็นผู้ชายและผู้หญิงใช้การอดอาหาร: การอดอาหาร ผลการวิเคราะห์: ต่ำกว่าปกติ: อย่างไรก็ตามร้อยละของ rosettes ME ลดลงหรือขาดหายไปโดยไม่ต้อง agammaglobulinemia และภูมิคุ้มกันบกพร่องรวมกันอย่างรุนแรง ค่าปกติ: เปอร์เซ็นของ ME ในเลือดหญิง: 5% -10% เหนือปกติ: ร้อยละของพวงหรีด ME ในเลือดรอบข้างของผู้ป่วยโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวเรื้อรัง lymphocytic สูงถึง 60% ถึง 80% เชิงลบ: บวก: เคล็ดลับ: โปรดผ่อนคลายเมื่อตรวจสอบ ค่าปกติ ผลการนับ 200 เซลล์เม็ดเลือดขาวถูกนับภายใต้กล้องจุลทรรศน์เซลล์เม็ดเลือดขาวที่ดูดซับเซลล์เม็ดเลือดแดงของเมาส์ 3 เซลล์ขึ้นไปคือ B lymphocytes และคำนวณเปอร์เซ็นต์ของมาลัยเซลล์ของเมาส์ (ME wreaths) ร้อยละของดอกกุหลาบ ME ในเลือดมนุษย์ปกติอยู่ที่ 5% ถึง 10% ความสำคัญทางคลินิก ร้อยละของพวงหรีด ME ในเลือดรอบข้างของผู้ป่วยมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิด lymphocytic นั้นสูงถึง 60% ถึง 80% แต่ไม่มีโกลบูลิแกมมาแกมมา, ภูมิคุ้มกันบกพร่องรวมกันอย่างรุนแรง ฯลฯ และเปอร์เซ็นต์ของมาลัย ME จะลดลงหรือขาดหายไป ผลลัพธ์ที่ต่ำอาจเป็นโรค: X-linked no-gammaglobulinemia ในเด็ก, อุบัติการณ์สูงของโรคภูมิคุ้มกันบกพร่องในเด็ก อาจเป็นโรค: ข้อควรระวังสำหรับโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวเรื้อรัง lymphocytic (1) ระยะเวลาการบ่ม: เปอร์เซ็นต์ของ ME เพิ่มขึ้นเรื่อย ๆ เมื่อเวลาการบ่มหลังจากบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงเปอร์เซ็นต์ ME คือ 7.4 ± 3.1% และการบ่มเพิ่มขึ้นเป็น 18.3 ± 3.8% หลังจาก 18 ชั่วโมงหลังจาก 72 ชั่วโมงจำนวนพวงมาลาเพิ่มขึ้น ลดลงเหลือ 3.4 ± 7.1% (2) การแก้ปัญหาวัฒนธรรม: มันเหมาะที่สุดที่จะใช้โซลูชันวัฒนธรรม Tc199 และผลลัพธ์และความสามารถในการทำซ้ำได้ดี การล้างและระงับเซลล์เม็ดเลือดขาวและเซลล์เม็ดเลือดแดงที่มีสื่อกลาง RPMl1640 ซึ่งเป็นบัฟเฟอร์ของ Hepes ส่งผลให้เซลล์มีแนวโน้มที่จะรวมตัวและก่อตัวเป็นเซลล์ขนาดใหญ่ส่งผลให้ผลลัพธ์ไม่น่าเชื่อถือ (3) เมื่ออัตราส่วนที่เหมาะสมของเซลล์เม็ดเลือดแดงต่อเซลล์เม็ดเลือดขาวคือประมาณ 35: 1, อัตราส่วนคือ> 60: 1 หรืออัตราส่วนคือ <25: 1 จำนวนของพวงหรีด ME จะลดลง (4) การเก็บรักษาวิธีการเพาะเลี้ยง MRBC: ในการแก้ปัญหาอัลซีเวอร์ MRBC เก็บไว้ที่ 4 ° C เป็นเวลา 1 สัปดาห์ยังคงผลิตมาลัยจำนวนคงที่ในขณะที่ MRBC เก็บไว้ใน PBS, น้ำเกลือหรืออาหารเลี้ยงเชื้อ Tc199 หลังจากการเก็บรักษาเป็นเวลา 72 ชั่วโมงสามารถมองเห็นเซลล์ขนาดเล็กหรือรูปการ์แลนด์ กระบวนการตรวจสอบ (1) ใช้เวลา 1 มิลลิลิตรของการระงับเซลล์เม็ดเลือดแดงของเมาส์ข้างต้นเพิ่ม 3 มล. ของน้ำเกลือทางสรีรวิทยาผสมกัน 1500r / นาทีปั่นเหวี่ยงเป็นเวลา 10 นาทีล้างทั้งหมด 3 ครั้งและในที่สุดเตรียม 1% เมาส์ระงับเซลล์เม็ดเลือดแดงด้วยน้ำเกลือทางสรีรวิทยา (ประมาณ 1.4 × 108 เซลล์ / มล.) (2) เฮปาริน 1.5 มล. สำหรับการแข็งตัวของเลือดลิมโฟไซต์ถูกแยกออกโดยการแบ่งชั้นของลิมโฟไซต์และความเข้มข้นของเซลล์ถูกปรับเป็น 2 × 10 7 / มล. ด้วยสารละลายแฮล์มเซรั่ม 20% (3) ใช้การระงับลิมโฟซัยต์ 0.1 มิลลิลิตรเพิ่มปริมาณเท่ากับ 1% เมาส์เซลล์เม็ดเลือดแดงแขวนและผสมในอ่างน้ำอุณหภูมิ 37 ° C เป็นเวลา 10 นาที 500 r / นาทีปั่นเหวี่ยง 10 นาทีใส่ตู้เย็น 4 ° C เป็นเวลา 2 ~ 3 ชั่วโมง (4) ปิเปตปริมาตร 0.05 มล. เพิ่มสารละลายสีน้ำเงิน 2 กรัม / ลิตร 1 หยดเบา ๆ หมุนให้ผสมใช้เวลา 1 หยดของส่วนผสมบนสไลด์ปิดฝาปิดหลังจากเซลล์จม ตรวจสอบด้วยกล้องจุลทรรศน์กำลังสูง ไม่เหมาะกับฝูงชน ไม่มีฝูงชนที่ไม่เหมาะสม ปฏิกิริยาและความเสี่ยงที่ไม่พึงประสงค์ เป็นการตรวจสอบที่ปลอดภัยและไม่เป็นอันตรายต่อร่างกาย