β-N-acetylglukosaminidáza

P-N-acetylglukosaminidáza (NAG) hydrolyzuje p-N-acetylglukosaminid a také hydrolyzuje p-N-acetylgalaktosamin. Enzym je široce přítomen v různých tkáních, orgánech, tělních tekutinách a krevních buňkách a je kyselou hydrolázou v lysozomech. Metody měření jsou kolorimetrie a fluorometrie. Základní informace Specializovaná klasifikace: klasifikace močových vyšetření: biochemické vyšetření Použitelné pohlaví: zda muži a ženy používají půst: půst Výsledky analýzy: Pod normální: Vzácné. Normální hodnota: Sérová p-N-acetylglukosaminidáza: 15,14-27,94 U / l Nad normální: Renální tubulární onemocnění těžké kovy (rtuť, olovo, kadmium atd.) A poškození ledvin vyvolané léky, ischemie, hypoxie, ztráta krve, šok atd. Mohou způsobit zvýšení aktivity NAG. Negativní: Pozitivní: Tipy: Podle výživového stavu celého těla se v jídle podává mléko, vejce, ovoce, sójové mléko atd. Normální hodnota 1, kolorimetrická metoda p-nitrofenolu: sérum NAG21,54 ± 6,4 U / l, NAG v moči je normálně distribuován, střední hodnota je 9,13 U / g kreatininu, horní hranice 95. percentilu je 16,10 U / g Kreatinin. 2. Fluorescenční metoda: Dospělé sérum: 9,94 ± 2 O7U / L. Dospělá moč: 6,39 ± 3,19 U / LCre. Klinický význam Stanovení aktivity NAG v krvi a moči je citlivé na změny renálních parenchymálních lézí, zejména akutního poškození a aktivního onemocnění, a používá se hlavně pro včasné sledování poškození ledvin a sledování onemocnění. 1, těžké kovy (rtuť, olovo, kadmium atd.), Tubulární onemocnění ledvin a léky způsobené poškození ledvin, ischemie, hypoxie, ztráta krve, šok atd. Mohou způsobit zvýšení aktivity NAG. 2, nefrotický syndrom močových NAG často významně vzrostl, doba remise se snížila, rychlé zotavení při recidivě, může být použita jako indikace pro klinické pozorování. Akutní fáze glomerulonefritidy se značně liší, ale změna je menší než u renálního tubulárního poškození. 3, umístění infekce močových cest infekce akutní a chronické pyelonefritidy vzestup NAG v moči, lze odlišit od jednoduché cystitidy. Lze použít k diagnostice časných infekcí horních cest močových. 4, renální odmítnutí transplantace ledviny monitorující včasné odmítnutí transplantace ledviny NAG může být zvýšeno, citlivější než protein v moči, kreatinin v séru, clearance kreatininu. 5, časná diagnóza diabetické nefropatie, diabetická nefropatie, zvýšená hladina NAG v moči, včasná diagnóza tohoto onemocnění je lepší než albumin v moči a β2-mikroglobulin. Vysokými výsledky mohou být nemoci: nefrotický syndrom, infekce močových cest (1) kolorimetrická metoda p-nitrofenolu: 1 Substrát p-nitrofenol by měl být vyčištěn a předem vytvořen při 50 ° C po dobu 24 hodin. Koncentrace byla upravena na 0,04 mmol / 1 pomocí 10 mmol / 1 NaOH a absorpční křivka byla skenována pomocí spektrofotometru s úzkou šířkou pásma, Amax = 401 nm, podle standardu IFCC, Amax = 0,7316 až 0,7388 a Emax = 18380 ± 90 (25 ° C). 2 Rozpustnost substrátu je malá. Při přípravě by měl být upraven na pastu s vhodným množstvím pufru o pH 4,6 a poté postupně přidávat pufr do požadovaného množství. 3 Pokud jsou výsledky měření v ultralineárním rozmezí, vzorek by měl být naředěn fyziologickým roztokem a znovu testován. Výsledek je vynásoben ředicím faktorem. 4 Koncentrace enzymu v moči je výrazně ovlivněna objemem moči, měl by být zachován objem moči po dobu 24 hodin. Pokud je rychlost vylučování enzymu vypočtena poměrem NAG / g kreatininu, to znamená, že není ovlivněna koncentrací nebo ředěním moči a není třeba nechávat 24 hodin moči. (2) Fluorescenční metoda: 1 Fluorescenční metoda pro měření NAG má domácí soupravu, která má vysokou citlivost a není ovlivněna močí. 2 Může být také použit v Shanghai No.3 Analytical Instrument Factory k výrobě fluorescenčního fotometru 930, excitačního filtru 360 a kompozitního emisního filtru (400 + 450) s uspokojivými výsledky. 3 Koncentrace každé složky v enzymovém reakčním roztoku je: 1,33 mmol / l substrátu, 20 mmol / l kyseliny citrónové a 432 mmol / l Na2HPO. 4 Rozpouštědla použitá v činidlech by měla být destilovaná voda, substrát by neměl obsahovat 4-MU, BSA by měl být bez enzymu nebo zahříván při 50 ° C po dobu 2 hodin. 5 NAG v séru je stabilní po dobu několika hodin až několika dnů při 4 ° C a stabilní po dobu několika měsíců při -20 ° C. Vzorek moči byl stabilní při 4 ° C po dobu 1 týdne a byla také použita citrátová antikoagulovaná plazma. 6β-N-acetylglukosaminid může být katalyzován dvěma enzymy, jedním je β-N-acetylglukosaminidáza (EC 3.2.1.30) a druhým je β-N-acetylglukosidáza (EC3). .2.1.52) Pro čištěné enzymy lze definovat pouze EC3.2.1.30 nebo EC3.2.1.52. NAG, který je často uváděn v domácí literatuře, je striktně pojmenován podle použitého substrátu, spíše než specifičnosti enzymu pro substrát. Proto je současná zahraniční literatura často označována jako p-N-acetylglukosaminidáza. Proces inspekce (1) kolorimetrické míchání p-nitrofenolu při vlnové délce 405 nm, optická cesta 1 cm, nulová destilovaná voda, odečte absorbanci každé zkumavky a zkontrolujte standardní křivku s rozdílem (AU-AC). 1 Substrát p-nitrofenol by měl být vyčištěn a předem vytvořen při 50 ° C po dobu 24 hodin. Koncentrace byla upravena na 0,04 mmol / 1 pomocí 10 mmol / 1 NaOH a absorpční křivka byla skenována pomocí spektrofotometru s úzkou šířkou pásma, Amax = 401 nm, podle standardu IFCC, Amax = 0,7316 až 0,7388 a Emax = 18380 ± 90 (25 ° C). Molární absorpční koeficient podle p-nitrofenolu 2 Rozpustnost substrátu je malá. Při přípravě by měl být upraven na pastu s vhodným množstvím pufru o pH 4,6 a poté postupně přidávat pufr do požadovaného množství. 3 Pokud jsou výsledky měření v ultralineárním rozmezí, vzorek by měl být naředěn fyziologickým roztokem a znovu testován. Výsledek je vynásoben ředicím faktorem. 4 Koncentrace enzymu v moči je výrazně ovlivněna objemem moči, měl by být zachován objem moči po dobu 24 hodin. Pokud je rychlost vylučování enzymu vypočtena poměrem NAG / g kreatininu, to znamená, že není ovlivněna koncentrací nebo ředěním moči a není třeba nechávat 24 hodin moči. (2) Fluorescenční spektrofotometrie: nejprve zředěné sérum nebo moč s pufrem neobsahujícím hovězí sérový albumin (BSA), Smíchejte, excitační vlnová délka je 364 nm, emisní vlnová délka je 448 nm, aby se zastavilo nastavení nulové tekutiny, a intenzita fluorescence 6 μmol / L 4-MU zkumavky se upravila na 100 a měří se intenzita fluorescence prázdné zkumavky a měřicí zkumavky. 1 Fluorescenční metoda pro měření NAG má domácí soupravu, která má vysokou citlivost a není ovlivněna močí. 2 Může být také použit v Shanghai No.3 Analytical Instrument Factory k výrobě fluorescenčního fotometru 930, excitačního filtru 360 a kompozitního emisního filtru (400 + 450) s uspokojivými výsledky. 3 Koncentrace každé složky v enzymovém reakčním roztoku je: 1,33 mmol / l substrátu, 20 mmol / l kyseliny citrónové a 432 mmol / l Na2HPO. 4 Rozpouštědla použitá v činidlech by měla být destilovaná voda, substrát by neměl obsahovat 4-MU, BSA by měl být bez enzymu nebo zahříván při 50 ° C po dobu 2 hodin. 5 NAG v séru je stabilní po dobu několika hodin až několika dnů při 4 ° C a stabilní po dobu několika měsíců při -20 ° C. Vzorek moči byl stabilní při 4 ° C po dobu 1 týdne a byla také použita citrátová antikoagulovaná plazma. 6β-N-acetylglukosaminid může být katalyzován dvěma enzymy, jedním je β-N-acetylglukosaminidáza (EC 3.2.1.30) a druhým je β-N-acetylglukosidáza (EC3). .2.1.52) Pro čištěné enzymy lze definovat pouze EC3.2.1.30 nebo EC3.2.1.52. NAG, který je často uváděn v domácí literatuře, je striktně pojmenován podle použitého substrátu, spíše než specifičnosti enzymu pro substrát. Proto je současná zahraniční literatura často označována jako p-N-acetylglukosaminidáza.