Aktivita telomerázy

Telomery jsou speciální strukturou na konci chromozomu v eukaryotech a sestávají z opakující se sekvence DNA bohaté na guanin a jeho asociované proteiny. Telomery jsou nezbytné pro stabilitu chromozomových konců. Udržování délky telomer vyžaduje přítomnost telomerasové aktivity. Endogenní cytokiny hrají důležitou roli v dlouhodobém přežití imortalizovaných buněk a nádorových buněk. Telomeráza je komplex RNA a bílkovin. Jedná se o specifickou reverzní transkriptázu závislou na RNA. Může syntetizovat telomerickou DNA na konci chromozomu z vlastní RNA, aby nahradila telomér během dělení buněk. Ztráta DNA, udržení délky telomer, udržování dynamické rovnováhy chromozomů a zvěčnění buněk. Od zavedení vysoce citlivých metod detekce telomerázy založených na PCR přitahovala telomeráza rozšířenou pozornost. Bylo zjištěno, že telomeráza má úzký vztah k buněčné proliferaci, diferenciaci a nesmrtelnosti a stala se jedním z hlavních bodů základního výzkumu nádorů a stárnutí. Základní informace Specializovaná klasifikace: Klasifikace onkologických vyšetření: imunitní vyšetření Použitelné pohlaví: zda muži a ženy používají půst: ne půst Výsledky analýzy: Pod normální: Normální hodnota: Ne Nad normální: Negativní: Normální hodnota je záporná. Pozitivní: (1) Pacienti s rakovinou jater mají vyšší míru pozitivní telomerázy (85%). (2) Telomeráza je vysoce exprimována ve většině maligních nádorových tkání, jako jsou neuroblastom (94%), rakovina prsu (93%), kolorektální rakovina (93%), rakovina žaludku (85%), rakovina prostaty. (84%), rakovina plic (80%) atd. Telomerázová aktivita úzce souvisí s klinickým stádiem a prognózou nádoru. (3) U několika benigních lézí (jako je hepatitida, cirhóza, benigní meningiom atd.) Může být slabá telomerasová aktivita. Tipy: U několika benigních lézí (jako je hepatitida, cirhóza, benigní meningiom atd.) Může být slabá aktivita telomerázy. Normální hodnota Negativní. Klinický význam 1, pacienti s rakovinou jater mají vyšší míru pozitivní telomerázy (85%), hladiny AFP pozitivní na telomerázovou aktivitu jsou výrazně vyšší než negativní aktivita telomerázy. Telomerázová aktivita nebyla významně spojena s velikostí nádoru, histologickým stupněm a metastázami nádoru. Telomeráza může být nádorovým markerem pro diagnostiku rakoviny jater. 2. Telomeráza je vysoce exprimována ve většině maligních nádorových tkání, jako je neuroblastom (94%), rakovina prsu (93%), kolorektální rakovina (93%), rakovina žaludku (85%) a rakovina prostaty ( 84%), rakovina plic (80%) atd. Telomerázová aktivita úzce souvisí s klinickým stádiem a prognózou nádoru. Proto je telomeráza v současné době nejkonkrétnějším a univerzálním nádorovým markerem. 3. U několika benigních lézí (jako je hepatitida, cirhóza, benigní meningiom atd.) Může být slabá aktivita telomerázy. Pozitivními výsledky mohou být nemoci: neuroblastom, rakovina tlustého střeva a konečníku, rakovina prsu, rakovina žaludku, rakovina jater, rakovina prostaty, rakovina tlustého střeva, rakovina ledvin, rakovina štítné žlázy V posledních letech byla „hypotéza telomerázy, telomerázy“ potvrzena stále více výzkumem, přičemž úroveň aktivity telomerázy byla použita jako biomarker a prognostický indikátor pro diagnostiku nádorů. 1. Dávejte pozor, abyste zabránili laboratorní kontaminaci a falešně pozitivní nebo falešně negativní. 2. Dávejte pozor, abyste odstranili inhibitor polymerázy obsažený ve vzorku tkáně, abyste snížili falešné negativy. 3. Technologie scintilační analýzy, metoda ELISA, metoda hybridizace in situ jsou spolehlivější než metoda TRAP. Proces inspekce Zkontrolujte provoz: Genomická DNA byla 0,1 μg; pufr obsahující 50 mmol / L chloridu draselného, ​​10 mmol / LTris-HCI (pH 8,4), 1,5 mmol / L chloridu hořečnatého, 100 μg želatiny; každý primer byl 0,25 μmol / l; dATP, dCTP, dGTP DTIP byl každý 200 μmol / l, DNA polymeráza byla 2,5 U a konečný objem byl 100 μl. Přidejte několik kapek tekutého parafinu, abyste zabránili odpařování. Reakční cyklus: 1 denaturace: 90 ° C 30 - 60 s; 2 teplota temperování primerů a templátů: 40 - 60 ° C 30 - 60 s; 3 prodloužení: 72 ° C 1 - 2 min. Po opakovaných cyklech 30 až 40krát bylo poslední prodloužení primeru 7 ° 72 ° C ukončeno po dobu 7 minut. Po odstranění tekutého parafinu je produkt k dispozici pro analýzu. Po elektroforéze na agarózovém gelu bylo barveno ethidiumbromidem a ozářením UV lampou byl pozorován fluorescenční proužek očekávané délky amplifikace. Produkt může být také hybridizován s Southern blot nebo spot blot s radioaktivně značenou nebo neradioaktivně značenou oligonukleotidovou sondou. Je vhodnější použít automatický přístroj PCR Po přidání reakčního činidla, templátu DNA a Taq-DNA polymerázy do zkumavky se provede upravený postup, tj. Požadovaná teplota, čas a prodloužení příslušné teploty a času a počet cyklů. Reakce se provádí v automatickém přístroji, aby se získal uspokojivý produkt amplifikace. Nevhodné pro dav Ti, kteří nemají vhodný test, by neměli být testováni. Nežádoucí účinky a rizika 1. Infekce: Při odběru krve věnujte pozornost aseptickým operacím, vyhněte se kontaminaci vody a dalších částí v místě odběru krve, abyste zabránili místní infekci. 2, krvácení: poté, co je krvi dána plná doba komprese, zejména koagulopatie, sklon ke krvácení, aby nedošlo k lokálnímu subkutánnímu vytekání, tvorbě modřin a otokům.