Vyšetření chromatinu buněk plodové vody

U rodin s rodinnou anamnézou recesivních dědičných chorob spojených s X je rodičovský fenotyp normální. Pokud je matka nositelem genu způsobujícího onemocnění, je pravděpodobnost syna dítěte 50%, dcera má normální fenotyp, ale polovina z toho. Může být dopravcem. Když je otec pacientem, jsou všichni synové normální a všechny dcery jsou nositeli vyšetření chromatinu buněk plodové vody, aby předpověděly pohlaví plodu, aby odhadly pravděpodobnost výskytu některých dědičných chorob. Základní informace Kategorie specialisty: Kontrola matek Kategorie: genetické testování (DNA) Použitelné pohlaví: zda se ženy postí: ne postní Výsledky analýzy: Pod normální: Normální hodnota: Ne Nad normální: Negativní: X chromatin:> 0,06 u ženského plodu a 0,05 u mužského plodu. Pozitivní: Pravděpodobnost recesivní recesivní choroby spojené s X je stanovena na základě výsledků. Tipy: Amniocentéza se obvykle provádí ve druhém trimestru (16–21 týdnů těhotenství). Normální hodnota X chromatin> 0,06 u ženských plodů, <0,05 u mužských plodů; Y chromatin> 0,05 je samec plodu a <0,04 je samice plodu. Klinický význam U rodin s rodinnou anamnézou recesivních dědičných chorob spojených s X je rodičovský fenotyp normální. Pokud je matka nositelem genu způsobujícího onemocnění, je pravděpodobnost syna dítěte 50%, dcera má normální fenotyp, ale polovina z toho. Může být dopravcem. Když je otec pacient, je syn normální a dcera je nositeli, jako je hemofilie A, hemofilie B, deficit glukózy-6-fosfát dehydrogenázy, červeno-zelená slepota, pseudohypertrofická svalová dystrofie Vrozený nedostatek gama globulinu. Pozitivními výsledky mohou být nemoci: hemofilie, vrozená hyperamonémie u dětí, barevná slepota Amniocentéza se obvykle provádí ve druhém trimestru (16–21 týdnů těhotenství). Moč by měla být před chirurgickým zákrokem vypuštěna oběma rukama na bocích a jemně otáčet kolem pasu a břicha. Poté na zádech použijte B-ultrazvuk k detekci polohy, vyberte bod vpichu a vpich za přísných aseptických podmínek. Obecně se odebere asi 20 ml plodové vody a umístí se do čisté a sterilizované centrifugační zkumavky pro okamžitou kontrolu. Proces inspekce (1) Vezměte 15 až 30 ml plodové vody po dobu 16 až 20 týdnů těhotenství a odstřeďte při 1000 r / ml po dobu 10 minut. (2) Přebytečný supernatant zlikvidujte, nechte 1 ml plodové vody a vysrážených buněk a jemně se rozptýlí do buněčné suspenze. (3) Přeneste do baňky o objemu 25 ml čtvercové kultury, přidejte 3 ml média o pH 6,5 až 6,8 (obsahujícího penicilin 100 U / ml, streptomycin 100 μg / ml) a 1 ml telecího séra a inkubujte v inkubátoru při 37 ° C. (4) Po 7 až 10 dnech kultivace bylo pozorováno velké množství kolonií podobných fibroblastům nebo epiteloidním buňkám. V tomto okamžiku lze čerstvé médium vyměnit. (5) Když jsou buněčné kolonie expandovány na kousky a existuje mnoho průsvitných buněk s kruhovým dělením, lze přidat kolchicin tak, aby výsledná koncentrace byla 0,1 až 0,3 μg / ml, a poté kultivovány v inkubátoru při 37 ° C po dobu 5 až 6 hodin. (Výše uvedené postupy jsou prováděny za aseptických podmínek). Standardy sklizně: 1 s fibroblasty jako hlavním typem, růst buněk, 2 s 10x okulárky a 20x objektivní pozorování, rostoucí buněčné klony pokrývají 1 nebo více úplných zorných polí, 3 viz více než 10 průsvitných Kulaté buňky a více než 10 dvojitých kulatých jasných dělicích buněk. (6) Pokud buňky nerostou energicky, růstový cyklus není jednotný nebo buňky stárnou a není dosaženo standardu sklizně, subkultura může pokračovat v původní lahvi. Metoda: Za sterilních podmínek byl nejprve kultivační roztok nalit a bylo přidáno několik kapek 2,5 g / l sterilního roztoku trypsinu a směs byla protřepána a nalita. Dále bylo přidáno 5 až 10 kapek trypsinu a jemně třepáno při 37 ° C po dobu asi 5 minut, aby adherované buňky vypadly. Přidaly se 4 ml čerstvého média obsahujícího telecí sérum a kultura se nechala stát při 37 ° C po dobu 4 až 5 hodin. Pečlivě vyměňte kultivační médium a pokračujte v kultivaci, může být sklizeno 3 až 5 dní po průchodu. (7) Přeneste kultivační roztok do odměrné centrifugační zkumavky, přidejte do baňky 1 ml roztoku ED-TA-trypsinu, umístěte jej do inkubátoru při 37 ° C po dobu 5 minut a poté opláchněte adherentní buňky loketní pipetou (lze použít také 2,5 g /). L trávení trypsinového roztoku). Buňky oddělené od stěny láhve byly nality do centrifugační zkumavky, smíchány s původní kultivační kapalnou fází a kultivační baňka byla promyta malým množstvím teplého fyziologického roztoku a promyté buňky byly také nality do centrifugační zkumavky a centrifugovány při 1000 r / min po dobu 10 minut. (8) Supernatant se odsaje, přidá se 3 až 5 ml 0,075 mol / l KCl hypotonického roztoku předem zahřátého na 37 ° C a nastaví se na 37 ° C po dobu 10 až 15 minut. (9) Předběžná fixace, fixace a příprava jsou stejné jako metoda přípravy vzorků chromozomů z periferní krve. Nevhodné pro dav Tabu lidé: 1. Během těhotenství se objevily známky potratu. 2. Když tělesná teplota překročí 37,5 ° C. 3. Včasná exfoliace placenty, břišní infekce a hnisavé. Nežádoucí účinky a rizika (1) Poranění matky: vpíchněte jehlu bodnoucí krevní cévy způsobené hematomem břišní stěny, suberosálním hematomem dělohy. Amniotická tekutina občas vstupuje do mateřského krevního oběhu z propíchnuté díry a způsobuje embolii amniotické tekutiny. Před propíchnutím nebyl močový měchýř vyprázdněn a močový měchýř byl zraněn. (2) Poranění plodu, placenty a pupeční šňůry: vpichovací jehla může poškodit plod a může způsobit krvácení a placenta a pupeční šňůra může také způsobit krvácení nebo hematom. Při krvácení do plodové vody by proto měl být identifikován zdroj krvácení. Pokud máte podezření, že jste z plodu, měli byste i nadále poslouchat fetální srdce. (3) Únik plodové vody: pooperační plodová voda uniká z dírky, způsobuje příliš málo plodové vody, ovlivňuje vývoj plodu a dokonce způsobuje potrat nebo předčasný porod. (4) potrat nebo předčasný porod: incidence potratu nebo předčasného porodu je 0,1% - 0,2%, často se vyskytuje během jednoho týdne po chirurgickém zákroku, dokonce i po propíchnutí vede k předčasnému prasknutí membrán k předčasnému porodu. (5) nitroděložní infekce: po operaci může být mateřská horečka. Intrauterinní infekce může způsobit abnormální vývoj plodu nebo dokonce smrt plodu. Amniocentéza by proto měla být přísně aseptická.