Izolace a identifikace anaerobních bakterií

Izolace a identifikace anaerobních bakterií je testem na separaci a identifikaci bakterií s vysokou citlivostí na kyslík, protože anaerobní mikroorganismy jsou v přírodě široce distribuovány a mají širokou škálu, jejich fyziologickým funkcím byla věnována zvýšená pozornost. Povinné anaerobní bakterie jsou velmi citlivé na kyslík, a proto klíčem k jejich separaci, kultivaci a životaschopnosti je poskytnout kultivační prostředí bez kyslíku a nízkého redoxního potenciálu. Základní informace Odborná klasifikace: klasifikace kontroly růstu a vývoje: biochemické vyšetření Použitelné pohlaví: zda muži a ženy používají půst: půst Tipy: Pokud je kolonie příliš malá, pozorujte kolonie pomocí lupy. Normální hodnota Druh a podíl flóry v těle jsou normální a lidské tělo je ve stavu dynamické rovnováhy a zdraví. Klinický význam Technologie anaerobních válcovacích trubek Hengate, technologie anaerobních válcových trubek Hengate je technologie anaerobních kultur, kterou poprvé navrhl americký mikrobiolog Hengate v roce 1950 a použil se pro výzkum anaerobních mikroorganismů v bachoru. Abnormální výsledky: zvláštní choroby způsobené anaerobiky Clostridium, jako je plynová gangréna, tetanus, botulismus atd. Lidé, kteří musí být vyšetřeni: pacienti s cukrovkou, těžkým onemocněním jater, cirhózou, urémií, hemoroidovými vředy, gangréna končetiny, botulismus a další příznaky. Opatření Při procesu separace a identifikace anaerobních bakterií je třeba poznamenat následující skutečnosti: (1) Anaerobní vzorky musí být během sběru a přepravy izolovány od vzduchu a musí být dokončeny do 30 minut, aby se zabránilo kontaminaci normální flóry. (2) Médium by se mělo připravovat čerstvě. Pokud je médium skladováno příliš dlouho, kyslík je rozpuštěn na povrchu nebo peroxid je v médiu, což nevede k růstu anaerobních bakterií. (3) Pokud je kolonie příliš malá, měla by být kolonie pozorována pomocí lupy. (4) Pro provedení testu tolerance na kyslík je nutné z každé agarové destičky odebrat 4 až 5 kolonií různých znaků, naočkovat aerobní a anaerobní destičky s krevním agarem a umístit je do aerobního prostředí, oxidu uhličitého a anaerobního prostředí. (5) Pokud provádíte identifikaci extracelulárních enzymů, musíte mít dostatečnou bakteriální koncentraci. Proces inspekce Separace (1) číslo Vezměte pět sterilních zkumavek na vodu a označte je značkou, aby se označilo 10-1, 10-2, ... 10-5. (2) ředění V neo kyslíkové sterilní ultračisté anaerobní rukavicové krabičce použijte sterilní stříkačku k odebrání 1 ml dobře promíchaného kapalného vzorku, přidejte jej do anaerobní zkumavky obsahující předem redukovaný fyziologický roztok a rovnoměrně promíchejte s oscilátorem. Proveďte ředění 10-1. Zředění 1 ml 10-1 bylo pipetováno do oddělené anaerobní zkumavky obsahující 9 ml fyziologického roztoku chloridu sodného za použití sterilní stříkačky, aby bylo dosaženo zředění 10-2. Zředí se sériově 10krát na 10-6, aby se dosáhlo různých ředění vzorků. Počet zkumavek se obvykle volí třemi ředěními 10-4, 10-5 a 10-6. (3) Oddělení válců 1) Válcová trubka Anaerobní sterilní agarové médium bylo rozpuštěno ve vroucí vodní lázni, umístěno do vodní lázně při konstantní teplotě 46 až 50 ° C a použito, a když bylo médium vyjmuto z láhve, bylo nahuštěno N2 v médiu. Poté se naplní N2 ve zkumavce, odstraní se veškerý vzduch uvnitř zkumavky, poté se do zkumavky přidá médium a zátka se okamžitě uzavře. Když je zátka zasunuta do zkumavky, nafukovací jehla je vytažena včas. Pipetujte 0,1 ml každého z ředění 10-4, 10-5 a 10-6 do zkumavky, která se má použít, a poté ji položte naplocho na porcelánovou destičku obsahující ledovou vodu a rychle se otáčejte. Rozpustný agar vytvoří ztuhlou vrstvu bezprostředně na vnitřní stěně zkumavky. 2) Separace a čištění Výsledné kolonie je třeba sbírat a zkoumat na jejich morfologii a čistotu. Pokud nebyla získána čistá kultura, zkumavka se zředí znovu a kolon se znovu sbírá, dokud se nezíská čistá kultura. Jednotlivé kolonie, které mají být sbírány, se předběžně pozorují pod lupou a označí se. Zkumavka se středním médiem se poté připevní k vhodnému držáku a gumová zátka se zkumavkou se otevře a do zkumavky se rychle vloží dusíková jehla naplněná plynem se správným proudem vzduchu a bakteriemi usmrcenými plamenem. Současně se z gumové zátky vyjme další kapalinová anaerobní trubice a vloží se do další sterilizované odvzdušňovací jehly. Připravené kapiláry loktů opatrně vložte do pevného média, identifikujte kolonie, které mají být odebrány, jemně je aspirujte, přeneste je do zkumavky s kapalinou a uzavřete. Kultura byla kultivována při 37 ° C po dobu 24 hodin nebo déle nebo po kontrole zákalu kultivačního roztoku a byla zkoumána čistota izolované kultury. 3) Oddělování pomlček Jeden konec gumové zátky zkumavky se spálí na plameni a k ​​ucpání trysky se použije plynová sací jehla. Před rychlým sejmutím jehly se vzduch nechá ventilovat po dobu 15 až 20 s a jeden konec zkumavky se na chvíli plamenem. Utáhněte šroubovou zátku a stočená trubka je vztyčená a izolovaná Použijte CO2: H2 = 80: 20. Protože CO2 je těžší než vzduch, nebude mít zátka po otevření po otevření zbytky vzduchu. Rýsovací trubice může být pěstována při 34-37 stupních za účelem růstu kolonií. Identifikace kmenů 1 zkouška na kvašení cukru Experimenty s fermentací cukru jsou nejčastěji používanými biochemickými reakcemi a jsou zvláště důležité při identifikaci střevních bakterií. Většina bakterií může použít cukr jako zdroj uhlíku a zdroj energie, ale mají velké rozdíly v jejich schopnosti rozkládat cukr. Některé bakterie mohou rozkládat cukr a produkovat kyselinu (jako je kyselina mléčná, kyselina octová, kyselina propionová atd.) A plyn (například Vodík, metan, oxid uhličitý atd. Některé bakterie produkují pouze kyselinu a neprodukují plyn. Například Escherichia coli může rozkládat laktózu a glukózu za vzniku kyseliny a produkovat plyn; Salmonella typhimurium může rozkládat glukózu za vzniku kyseliny a neprodukovat plyn a nemůže rozkládat laktózu; obyčejný Proteus rozkládá glukózu za vzniku kyseliny a produkuje plyn, který nemůže rozkládat laktózu. Produkce kyseliny může být stanovena pomocí indikátoru. Bromokrezolová purpurová [pH 5,2 (žlutá) - 6,8 (fialová)] byla přidána předem, když bylo médium připraveno, a když byla kyselina produkována fermentací, bylo médium změněno z fialové na žlutou. Výroba plynu může být doložena přítomností nebo nepřítomností bublin v obrácené Dehanově zkumavce ve fermentační zkumavce. Konkrétní experimentální kroky: 1 Bakteriální kapalina se vhodně zředí a poté se ve sterilním prostředí injikuje určité množství zředěného roztoku do biochemické identifikační zkumavky a uzavře se sterilním těsnícím filmem. 2 Vložte naočkovanou identifikační zkumavku do anaerobní nádrže a umístěte ji do inkubátoru s konstantní teplotou 37 ° C s dostatečným množstvím dusíku. Po 324 hodinách byla pozorována změna barvy a produkce plynu v každé zkumavce. 2 experiment rozkladu proteinů 1 Bakteriální kapalina se vhodně zředí a poté se ve sterilním prostředí injikuje určité množství zředěného roztoku do biochemické identifikační zkumavky a uzavře se sterilním těsnícím filmem. 2 Vložte naočkovanou identifikační zkumavku do anaerobní nádrže a umístěte ji do inkubátoru s konstantní teplotou 37 ° C s dostatečným množstvím dusíku. Po 324 hodinách byly zkumavky podrobeny Mirrenově reakci, hydrazinové reakci, žluté reakci a reakci ústní vody. 3 experiment hydrolýzy škrobu 1 Bakteriální kapalina se vhodně zředí a poté se ve sterilním prostředí injikuje určité množství zředěného roztoku do biochemické identifikační zkumavky a uzavře se sterilním těsnícím filmem. 2 Vložte naočkovanou identifikační zkumavku do anaerobní nádrže a umístěte ji do inkubátoru s konstantní teplotou 37 ° C s dostatečným množstvím dusíku. Po 324 hodinách bylo do každé zkumavky přidáno odpovídající množství Lugolova jodového roztoku, aby se sledovala hydrolýza škrobu. Nevhodné pro dav Žádné relevantní informace. Nežádoucí účinky a rizika Nebyly nalezeny žádné související komplikace a rizika.