Neutralizační test

Neutralizační test je založen na stanovení infekčnosti viru a schopnosti imunitního séra neutralizovat virus na základě srovnání zbytkové infekčnosti viru po neutralizaci imunitním sérem. Když je zvíře infikováno virem, produkuje se v těle specifická neutralizační protilátka a specificky se váže na odpovídající virion, čímž brání viru v adsorpci na citlivou buňku nebo inhibici jeho invaze, takže virus ztratí schopnost infikovat. Základní informace Specializovaná klasifikace: Vyšetření a klasifikace infekčních chorob: imunologické vyšetření Použitelné pohlaví: zda muži a ženy používají půst: ne půst Výsledky analýzy: Pod normální: Normální hodnota: Ne Nad normální: Negativní: Méně než 10 je negativní a žádný virus. 10 až 49 jsou podezřelé. Pozitivní: Obecně je neutralizační index větší než 50 považován za pozitivní a je přítomen virus. Tipy: Dávejte pozor na běžné stravovací návyky a věnujte pozornost osobní hygieně. Normální hodnota Metoda viru s ředěným sérovým ředěním: U virů je obvykle neutralizační index vyšší než 50 a 10 až 49 je podezřelých a méně než 10 je negativní. Normální hodnota neutralizačního testu: lidské tělo je v dynamické rovnováze a ve zdravém stavu. Klinický význam Tento test se používá hlavně k detekci protilátek z testovaného séra nebo k detekci virů z materiálu nemoci, a tím k diagnostice virových infekcí; 2 ke kontrole toxinů v materiálech s anti-toxinovým sérem nebo k identifikaci typu toxinů v bakteriích; Titr virového séra nebo anti-toxinu; 4 Identifikace a typizace nově izolovaných virů, neutralizační test lze provést nejen u vnímavých experimentálních zvířat, ale také na buněčných kulturách nebo embryích kuřat. Zkušební metody zahrnují zejména jednoduchý kvalitativní test, metodu viru s ředěným sérovým ředěním, metodu séra s ředěným virem a metodu redukce plaků. Pozitivními výsledky mohou být choroby: příušnice, AIDS, horečka dengue, japonská encefalitida, vyrážka viru Coxsackie, onemocnění slintavky a kulhavky, preventivní opatření proti vzteklině Před vyšetřením je zakázáno: Dbejte na běžné stravovací návyky a dbejte na osobní hygienu. Požadavky na kontrolu: Aktivně spolupracujte s lékařem. Proces inspekce (1) Jednoduchý kvalitativní neutralizační test Tato metoda se používá hlavně k detekci viru v materiálu nemoci a může být také zpočátku identifikována nebo dokončena. Testovaná zvířata (nebo kuřecí embrya, buněčná kultura) a cesty inokulace se nejprve vyberou na základě citlivosti na viry. Materiál je rozemlet a zředěn na určitou koncentraci (přibližně 100 LD50 ~ 1000 LD50 nebo TCID50). K kontaminovaným materiálům je třeba přidat antibiotika (200 až 1 000 jednotek penicilinu a streptomycinu) nebo zfiltrovat bakteriálním filtrem, smíchat se známým antisérem (vhodně naředěným nebo nezředěným) a zředit normálním sérem Pro srovnání. Po smíchání byly buňky naočkovány při 37 ° C po dobu 1 hodiny a alespoň 3 zvířata v každé skupině. Izolační krmení, sledování morbidity a mortality. Kontrolní zvířata uhynula, zatímco zvířata v neutralizační skupině nezemřela, což potvrdilo, že nemoc obsahovala virus odpovídající antiséru. Tuto metodu lze také použít k identifikaci a typizaci toxinů (jako jsou toxiny). (2) Metoda viru s ředěním séra V této metodě byl virus zředěn 10krát v krocích a umístěny dvě zkumavky, první kolona byla přidána s normálním sérem (kontrolní skupina) a druhá kolona byla přidána s testovaným sérem (testovací skupina). Po smíchání byly buňky naočkovány při 37 ° C po dobu 1 hodiny a každá směs zkumavek byla naočkována samostatně na vybraná testovaná zvířata a pro každé ředění byly použity 3 až 5 zvířat. Po naočkování pozorujte denně a zaznamenejte počet úmrtí.Po pozorování vypočtěte LD50 a neutralizační index (tabulka 7-1, tabulka 7-2) Tato metoda je použitelná pro detekci velkého počtu vzorků. Tato metoda se většinou používá k detekci neutralizačních protilátek v testovaném séru. U virů je neutralizační index obvykle vyšší než 50 a je pozitivní, 10 až 49 je podezřelých a méně než 10 je negativních. (3) Metoda stanovení sérového ředění viru Tato metoda se používá ke stanovení neutralizační ceny antivirového séra. Testované sérum se ředí 2krát a přidá se roztok viru se stejnou toxickou hodnotou (smíchaný se sérem, každá dávka obsahuje virus 100LD50), dobře protřepte. Testovaná zvířata byla naočkována při 37 ° C po dobu 1 hodiny. Poznámka: [1] Inokulační dávka 0,1 ml, obsahující virus 100LD50. [2] označuje ředění po smíchání s virem. [3] Jmenovatel je počet očkování a čitatel je počet ochrany. [4] PD50 je poloviční ochrana a metoda výpočtu je stejná jako výpočet LD50. (4) metoda redukce plaků Virový neutralizační test byl prováděn na buněčné kultuře a v posledních letech byla často používána metoda redukce plaků. Nejprve se virus zředí na vhodnou koncentraci, takže 80 až 100 PFU (jednotka pro tvorbu plaku) na 0,2 ml se smíchá s různými ředěními testovaného séra a umístí se při 37 ° C na 1 h až 2 h pro měření PFU. 50% sérové ​​ředění plaku je neutralizační cena séra. Viz tabulka 7-4. Tabulka 7-4 Příklad neutralizačního testu pro metodu redukce plaků Poznámka: [1] Sérum bylo ředěno ve čtyřnásobných krocích. [2] Plak je snížen o 50% ředění séra a metoda výpočtu je stejná jako výpočet LD50. Nevhodné pro dav Lidé se sníženou hematopoetickou funkcí, jako je leukémie, různá anémie, myelodysplastický syndrom nebo lidé s trombocytopenií, by měli věnovat pozornost odebírání krve a neměli by odebírat více či více krve. Nežádoucí účinky a rizika 1. Po odebrání krve netlačte do otvoru jehly, abyste zabránili podkožnímu hematomu. Pokud je v krvi malý kousek modřiny, je mírně něžný, prosím, nepropadejte panice, můžete provést horkou kompresi po 24 hodinách, abyste podpořili absorpci krve. Obecně malé množství přetížení se bude postupně absorbovat za 3 až 5 dní a barva se stane světlejší a vrátí se do normálu. 2. Po odběru krve by se příznaky, jako je závratě, závratě, únava atd., Měly okamžitě nacházet na zádech, vypít malé množství sirupu a poté, co se příznaky zmírní, podrobí se fyzickému vyšetření.