β-N-acetylglucosaminidase

ß-N-acetylglucosaminidase (NAG) hydrolyserer ß-N-acetylglucosaminid og hydrolyserer også ß-N-acetylgalactosamin. Enzymet er bredt til stede i forskellige væv, organer, kropsvæsker og blodceller og er en sur hydrolase i lysosomer. Målemetoderne er kolorimetri og fluorometri. Grundlæggende information Specialistklassificering: urinundersøgelsesklassificering: biokemisk undersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: faste Analyseresultater: Under det normale: Sjælden. Normal værdi: Serum ß-N-acetylglucosaminidase: 15,14-27,94 U / L Over normal: Tungmetaller i renal tubulær sygdom (kviksølv, bly, cadmium osv.) Og medikamentinduceret nyreskade, iskæmi, hypoxi, blodtab, chok osv. Kan forårsage en stigning i NAG-aktivitet. Negativ: positiv: Tip: I henhold til ernæringstilstanden for hele kroppen gives mælk, æg, frugter, sojamælk osv. I måltidet. Normal værdi 1, p-nitrophenol kolorimetrisk metode: serum NAG21,54 ± 6,4 U / L, urin NAG fordeles normalt, medianen er 9,13U / g creatinin, den 95. procentile øvre grænse er 16,10U / g kreatinin. 2. Fluorescensmetode: Voksent serum: 9,94 ± 2,77U / L. Voksen urin: 6,39 ± 3,19 U / LCre. Klinisk betydning Bestemmelsen af ​​blod- og urin-NAG-aktivitet er følsom over for ændringer i nyreparenkymale læsioner, især akut skade og aktiv sygdom, og bruges hovedsageligt til tidlig monitorering af nyreskader og sygdomsobservation. 1, renal tubulær sygdom tungmetaller (kviksølv, bly, cadmium osv.) Og medikamentinduceret nyreskade, iskæmi, hypoxi, blodtab, chok osv. Kan forårsage en stigning i NAG-aktivitet. 2, nefrotisk syndrom urinisk NAG steg ofte markant, remissionsperioden faldt, hurtig bedring ved gentagelse, det kan bruges som en indikation til klinisk observation. Den akutte fase af glomerulonephritis varierer meget, men ændringen er mindre end den for nyretubularskade. 3, placeringen af ​​urinvejsinfektionsdiagnose af akut og kronisk pyelonephritis urin-NAG-stigning, kan skelnes fra simpel cystitis. Kan bruges til diagnose af tidlige urinvejsinfektioner. 4, afvisning af nyretransplantation overvågning af nedsættelse af nyretransplantation tidligt NAG kan øges, mere følsom end urinprotein, serumkreatinin, kreatininclearance. 5, tidlig diagnose af diabetisk nefropati, diabetisk nefropati, forhøjet urin-NAG, den tidlige diagnose af denne sygdom er bedre end urinalbumin og β2-mikroglobulin. Høje resultater kan være sygdomme: nefrotisk syndrom, urinvejsinfektioner (1) p-nitrophenol kolorimetrisk metode: 1 Underlaget p-nitrophenol skal renses og forformes ved 50 ° C i 24 timer. Koncentrationen blev indstillet til 0,04 mmol / L med 10 mmol / L NaOH, og absorptionskurven blev scannet med et smalt båndbreddespektrofotometer, Xmax = 401 nm, ifølge IFCC-standarden, Amamax = 0,7316 til 0,7388 og Emamax = 18380 ± 90 (25 ° C). 2 Opløseligheden af ​​substratet er lille. Ved klargøring skal det justeres til en pasta med en passende mængde pH 4,6-buffer, og derefter gradvis tilsættes bufferen til den krævede mængde. 3 Når måleresultaterne er inden for det ultralineære område, skal prøven fortyndes med fysiologisk saltvand og testes igen. Resultatet ganges med fortyndingsfaktoren. 4 Urinenzymkoncentration påvirkes meget af urinvolumen, 24 timers urinvolumen skal opretholdes. Hvis enzymudskillelseshastigheden beregnes ved forholdet mellem NAG / g creatinin, det vil sige, det påvirkes ikke af koncentration eller fortynding af urin og behøver ikke at efterlade 24 timers urin. (2) Fluorescensmetode: 1 Fluorescensmetode til måling af NAG har et hjemligt kit, der har høj følsomhed og ikke påvirkes af urin. 2 Det kan også bruges med Shanghai No.3 Analytical Instrument Factory til at fremstille 930 fluorescensfotometer, excitationsfilter 360 og emission filter (400 + 450) komposit, med tilfredsstillende resultater. 3 Koncentrationen af ​​hver komponent i enzymreaktionsopløsningen er: 1,33 mmol / L substrat, 20 mmol / L citronsyre og 432 mmol / L Na2HPO. 4 Opløsningsmidler, der anvendes i reagenserne, skal være destilleret vand, underlaget skal være frit for 4-MU, BSA skal være fri for enzymet eller opvarmes til 50 ° C i 2 timer. 5 NAG i serum er stabilt i flere timer til flere dage ved 4 ° C og stabilt i flere måneder ved -20 ° C. Urinprøven var stabil ved 4 ° C i 1 uge, og citratantikoaguleret plasma blev også anvendt. 6β-N-acetylglucosaminid kan katalyseres af to enzymer, den ene er ß-N-acetylglucosaminidase (EC 3.2.1.30), og den anden er β-N-acetylglucosidase (EC3) .2.1.52) Kun EC3.2.1.30 eller EC3.2.1.52 kan defineres for oprensede enzymer. NAG, der ofte omtales i den indenlandske litteratur, er strengt opkaldt efter det anvendte underlag snarere end specificiteten af ​​enzymet til underlaget. Derfor omtales den aktuelle udenlandske litteratur ofte som ß-N-acetylglucosaminidase. Inspektionsproces (1) p-nitrophenol kolorimetrisk blanding ved 405 nm bølgelængde, 1 cm optisk bane, destilleret vand nul, aflæs absorbansen i hvert rør, og kontroller standardkurven med forskellen på (AU-AC). 1 Underlaget p-nitrophenol skal renses og forformes ved 50 ° C i 24 timer. Koncentrationen blev indstillet til 0,04 mmol / L med 10 mmol / L NaOH, og absorptionskurven blev scannet med et smalt båndbreddespektrofotometer, Xmax = 401 nm, ifølge IFCC-standarden, Amamax = 0,7316 til 0,7388 og Emamax = 18380 ± 90 (25 ° C). Molær absorptionskoefficient ifølge p-nitrophenol 2 Opløseligheden af ​​substratet er lille. Ved klargøring skal det justeres til en pasta med en passende mængde pH 4,6-buffer, og derefter gradvis tilsættes bufferen til den krævede mængde. 3 Når måleresultaterne er inden for det ultralineære område, skal prøven fortyndes med fysiologisk saltvand og testes igen. Resultatet ganges med fortyndingsfaktoren. 4 Urinenzymkoncentration påvirkes meget af urinvolumen, 24 timers urinvolumen skal opretholdes. Hvis enzymudskillelseshastigheden beregnes ved forholdet mellem NAG / g creatinin, det vil sige, det påvirkes ikke af koncentration eller fortynding af urin og behøver ikke at efterlade 24 timers urin. (2) Fluorescensspektrofotometri: først fortyndes serum eller urin med en puffer, der ikke indeholder bovint serumalbumin (BSA), Bland, excitationsbølgelængden er 364 nm, emissionsbølgelængden er 448 nm, for at stoppe væskens nuljustering, og fluorescensintensiteten af ​​6 μmol / L 4-MU røret justeres til 100, og fluorescensintensiteten af ​​det bløde rør og målerøret måles. 1 Fluorescensmetode til måling af NAG har et hjemligt kit, der har høj følsomhed og ikke påvirkes af urin. 2 Det kan også bruges med Shanghai No.3 Analytical Instrument Factory til at fremstille 930 fluorescensfotometer, excitationsfilter 360 og emission filter (400 + 450) komposit, med tilfredsstillende resultater. 3 Koncentrationen af ​​hver komponent i enzymreaktionsopløsningen er: 1,33 mmol / L substrat, 20 mmol / L citronsyre og 432 mmol / L Na2HPO. 4 Opløsningsmidler, der anvendes i reagenserne, skal være destilleret vand, underlaget skal være frit for 4-MU, BSA skal være fri for enzymet eller opvarmes til 50 ° C i 2 timer. 5 NAG i serum er stabilt i flere timer til flere dage ved 4 ° C og stabilt i flere måneder ved -20 ° C. Urinprøven var stabil ved 4 ° C i 1 uge, og citratantikoaguleret plasma blev også anvendt. 6β-N-acetylglucosaminid kan katalyseres af to enzymer, den ene er ß-N-acetylglucosaminidase (EC 3.2.1.30), og den anden er β-N-acetylglucosidase (EC3) .2.1.52) Kun EC3.2.1.30 eller EC3.2.1.52 kan defineres for oprensede enzymer. NAG, der ofte omtales i den indenlandske litteratur, er strengt opkaldt efter det anvendte underlag snarere end specificiteten af ​​enzymet til underlaget. Derfor omtales den aktuelle udenlandske litteratur ofte som ß-N-acetylglucosaminidase.