Kromosomundersøgelse af fostervandscellekultur

På grund af skadelige kemikalier, røntgeneksponering, miljøfaktorer, avanceret graviditet, nære slægtninge osv., Hvilket fører til sygdomme forårsaget af variation i antal, morfologi, struktur og kombination af kromosomer under graviditet. Kromosomundersøgelse af fostervandsceller har stor specifik betydning for prenatal diagnose af kromosomale sygdomme. Grundlæggende information Specialkategori: Morundersøgelse Tjek kategori: genetisk testning (DNA) Gældende køn: om kvinder er faste: faste Analyseresultater: Under det normale: Normal værdi: ingen Over normal: Negativ: Samlet antal kromosomer: 46. Autosom: 22 par (nummer 1-22). Sexkromosomer: XY for mænd og XX for kvinder. Mandlig karyotype: 46, XY. Karyotype til kvinder: 46, XX. positiv: Resultater, der adskiller sig fra normale værdier, er positive, hvilket antyder en medfødt misdannelse eller anden medfødt sygdom. Tips: Kromosomundersøgelse skal tage amniotisk væskeprøver ved 16-20 ugers drægtighed. Normal værdi Det samlede antal kromosomer er 46. 22 par autosomer (nummereret 1 til 22). Kønskromosommanden er XY og kvinden er XX. Mandlig karyotype 46, XY. Kvindelig karyotype 46, XX. Klinisk betydning Unormalt kromosomnummer, såsom Downs syndrom (trisomi 21), trisomi 18, trisomi, trisomi 38, trisomi 21, medfødt testikulært hypoplasiasyndrom, XXY-syntese Tegn, Turner syndrom, X trisomisyndrom og multiple X kropsyndrom. Unormal kromosomstruktur, såsom 4p partielt monomersyndrom, 5p partielt monomersyndrom, 9p partielt trisomisyndrom, 9q partielt monomersyndrom, 21q partielt monomersyndrom, 22q partielt monomersyndrom, 22q partielt trisomisyndrom Syndrom osv. Positive resultater kan være sygdomme: medfødt ovariehypoplasi, pædiatrisk cerebral parese, pædiatrisk Downs syndrom, pædiatrisk cerebral parese, pædiatrisk pascal syndrom, Diggolger syndrom, pædiatrisk meow syndrom, pædiatrisk medfødt testikeludvikling Ufuldstændige genetiske sygdomsovervejelser 1. Kromosomundersøgelse bør tage fosterdyrsprøver ved 16-20 ugers drægtighed. 2 er disse medfødte genetiske sygdomme øget, mangler, translokation, inversion og andre kvantitative og strukturelle abnormiteter, ofte manifesteret som et syndrom. De fleste tilfælde, såsom flere misdannelser, væksthæmning og mental retardering, fører til fosterabort, for tidlig fødsel eller dødfødsel. Inspektionsproces (1) Tag 15 til 30 ml fostervand i 16 til 20 ugers graviditet, og centrifuger ved 1000 r / ml i 10 minutter. (2) Bortskaf overskydende supernatant, efterlad 1 ml fostervand og udfældede celler, og spred forsigtigt i en cellesuspension. (3) Overfør til en 25 ml firkantet kulturkolbe, tilsæt 3 ml af et medium med en pH-værdi på 6,5 til 6,8 (indeholdende penicillin 100 U / ml, streptomycin 100 μg / ml) og 1 ml kalveserum og inkuberes i en 37 ° C inkubator. (4) Et stort antal fibroblastlignende eller epithelioidcellekolonier blev observeret efter 7-10 dages kultur. Det friske medium kan udveksles på dette tidspunkt. (5) Når cellekolonierne udvides i stykker, og der er mange gennemskinnelige cirkulære opdelende celler, kan colchicin tilsættes for at gøre den endelige koncentration 0,1-0,3 μg / ml og derefter dyrkes i en 37 ° C inkubator i 5-6 timer. (Ovenstående procedurer udføres alle under aseptiske forhold). Høststandarder: 1 med fibroblaster som hovedtype, væksten af ​​cellerne, 2 med 10x okularer og 20x objektiv observation, de voksende cellekloner dækker 1 eller flere komplette synsfelter; 3 se mere end 10 gennemskinnelige Runde celler og mere end 10 dobbeltrunde lyse opdelende celler. (6) Hvis cellerne ikke vokser kraftigt, er vækstcyklussen ikke ensartet, eller cellerne ældes, og høststandarden ikke nås, kan subkulturen fortsættes i den originale flaske. Fremgangsmåde: Under sterile betingelser blev kulturopløsningen først hældt, og et par dråber 2,5 g / l steril trypsinopløsning blev tilsat, og blandingen blev rystet og hældt. Yderligere blev 5 til 10 dråber trypsin tilsat og omrystet forsigtigt ved 37 ° C i ca. 5 minutter for at få de vedhæftede celler til at falde af. 4 ml frisk medium indeholdende kalveserum blev tilsat, og kulturen fik lov at henstå ved 37 ° C i 4 til 5 timer. Skift omhyggeligt kulturmediet og fortsæt kulturen. Det kan høstes 3 til 5 dage efter passagen. (7) Overfør kulturopløsningen til et gradueret centrifugerør, tilsæt 1 ml ED-TA-trypsinopløsning til kolben, anbring i en 37 ° C inkubator i 5 minutter, og skyl derefter de vedhæftede celler med en albue-pipette (2,5 g / kan også bruges) L fordøjelse af trypsinopløsningen). Cellerne, der blev løsnet fra flaskevæggen, blev hældt i et centrifugerør, blandet med den oprindelige kulturvæskefase, og dyrkningskolben blev vasket med en lille mængde varm fysiologisk saltopløsning, og de vaskede celler blev også hældt i centrifugerøret og centrifugeret ved 1000 r / min i 10 minutter. (8) Aspirer supernatanten, tilsæt 3 til 5 ml 0,075 mol / L KCl-hypotonopløsning, der er forvarmet til 37 ° C, og indstil til 37 ° C i 10 til 15 minutter. (9) Forudfiksering, fiksering og forberedelse er de samme som fremstillingsmetoden til perifere blodcellekromosomeksempler. Ikke egnet til mængden 1. Der var tegn på abort under graviditet. 2. Når kropstemperaturen overstiger 37,5 ° C. 3. Tidlig eksfoliering af placenta, maveinfektion og purulent. Bivirkninger og risici (1) Moderskade: punktering nålestik sårede blodkar forårsaget af abdominalvægts hematoma uterus-subserosal hæmatom. Lejlighedsvis kommer amniotisk væske ind i moders blodcirkulation fra punkteringshullet og forårsager fostervandsemboli. Blæren blev ikke tømt før punkteringen, og blæren blev såret. (2) Skader på fosteret, placenta og navlestrengen: Stiknålen kan beskadige fosteret og kan forårsage blødning, og placenta og navlestrengen kan også forårsage blødning eller hæmatom. Derfor skal blødningskilden identificeres, når man tager hæmoragisk fostervand. Hvis du har mistanke om, at du kommer fra et foster, skal du fortsætte med at lytte til fosterets hjerte. (3) Lækage af fostervandet: postoperativ fosterdyr lækker fra pinhullet, forårsager for lidt fostervand, påvirker fosterets udvikling og endda forårsager spontanabort eller for tidlig fødsel. (4) abort eller for tidlig fødsel: forekomsten af ​​abort eller for tidlig fødsel er 0,1% -0,2%, forekommer ofte inden for en uge efter operationen, selv efter punkteringen fører for tidligt brud på membraner til for tidlig fødsel. (5) intrauterin infektion: der kan være moderfeber efter operationen. Intrauterin infektion kan forårsage unormal fosterudvikling eller endda føtal død. Derfor bør fostervandet være aseptisk.