Telomerase aktivitet

Telomerer er en speciel struktur i slutningen af ​​et kromosom i eukaryoter og består af en gentagende DNA-sekvens rig på guanin og dets associerede proteiner. Telomerer er essentielle for stabiliteten af ​​kromosomender. Vedligeholdelse af telomerlængden kræver tilstedeværelsen af ​​telomeraseaktivitet. Endogene cytokiner spiller en vigtig rolle i den langsigtede overlevelse af udødelige celler og tumorceller. Telomerase er et kompleks af RNA og protein. Det er en specifik RNA-afhængig revers transkriptase.Det kan syntetisere telomer DNA ved slutningen af ​​kromosom fra sit eget RNA for at kompensere for telomer under celledeling. Tab af DNA, opretholdelse af telomererens længde, opretholdelse af den dynamiske balance i kromosomer og gøre celler udødeliggjort. Siden etableringen af ​​meget følsomme PCR-baserede metoder til påvisning af telomerase har telomerase tiltrukket bred opmærksomhed. Det har vist sig, at telomerase har et tæt forhold til celleproliferation, differentiering og udødelighed og er blevet et af hotspotsne i grundlæggende forskning i tumor og aldring. Grundlæggende information Specialistklassificering: Onkologisk undersøgelse: immunundersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: ikke faste Analyseresultater: Under det normale: Normal værdi: ingen Over normal: Negativ: Den normale værdi er negativ. positiv: (1) Patienter med leverkræft har en højere telomerase-positiv rate (85%). (2) Telomerase udtrykkes stærkt i de fleste ondartede tumorvæv, såsom neuroblastoma (94%), brystkræft (93%), kolorektal kræft (93%), gastrisk kræft (85%), prostatacancer. (84%), lungekræft (80%) osv. Telomerase-aktivitet er tæt forbundet med tumorens kliniske fase og prognose. (3) Der kan være svag telomeraseaktivitet i nogle få godartede læsioner (såsom hepatitis, cirrhosis, godartet meningioma osv.). Tip: Der kan være svag telomeraseaktivitet i nogle få godartede læsioner (såsom hepatitis, cirrhosis, godartet meningioma osv.). Normal værdi Negativ. Klinisk betydning 1, leverkræftpatienter har en højere telomerase-positiv hastighed (85%), telomeraseaktivitetens positive AFP-niveauer er signifikant højere end telomeraseaktivitet negativ. Telomerase-aktivitet var ikke signifikant forbundet med tumorstørrelse, histologisk kvalitet og tumormetastase. Telomerase kan være en tumormarkør til diagnose af leverkræft. 2. Telomerase udtrykkes meget i de fleste ondartede tumorvæv, såsom neuroblastoma (94%), brystkræft (93%), kolorektal kræft (93%), gastrisk kræft (85%) og prostatacancer ( 84%), lungekræft (80%) osv. Telomerase-aktivitet er tæt forbundet med tumorens kliniske fase og prognose. Derfor er telomerase i øjeblikket den mest specifikke og universelle tumormarkør. 3. Der kan være svag telomeraseaktivitet i nogle få godartede læsioner (såsom hepatitis, cirrhosis, godartet meningioma osv.). Positive resultater kan være sygdomme: neuroblastoma, tyktarmskræft, brystkræft, mavekræft, leverkræft, prostatacancer, tyktarmskræft, nyrecellekarcinom, skjoldbruskkirtelkræft I de senere år er "telomer, telomerase-hypotese" blevet bekræftet ved mere og mere forskning, hvor telomerase-aktivitetsniveau anvendes som en biomarkør og prognostisk indikator til tumordiagnose. 1. Vær opmærksom for at forhindre laboratoriekontaminering og falsk positiv eller falsk negativ. 2. Vær opmærksom på at fjerne polymeraseinhibitoren i vævsprøven for at reducere falske negativer. 3. Scintillationsanalyseteknologi, ELISA-metode, hybridiseringsmetode in situ er mere pålidelige end TRAP-metoden. Inspektionsproces Kontroller funktionen: Genomisk DNA var 0,1 μg; puffer indeholdende 50 mmol / L kaliumchlorid, 10 mmol / LTris-HCI (pH 8,4), 1,5 mmol / L magnesiumchlorid, 100 μg gelatine; hver primer var 0,25 μmol / L; dATP, dCTP, dGTP DTIP var 200 μmol / L hver; DNA-polymerasen var 2,5 U, og det endelige volumen var 100 μl. Tilsæt et par dråber flydende paraffin for at forhindre fordampning. Reaktionscyklus: 1 denaturering: 90 ° C 30 ~ 60 s; 2 primer- og skabelonglødningstemperatur: 40 ~ 60 ° C 30 ~ 60s; 3 forlængelse: 72 ° C 1-2 min. Efter gentagne cyklusser på 30 til 40 gange blev den sidste 7 ° 72 ° C primerforlængelse afsluttet i 7 minutter. Efter fjernelse af den flydende paraffin er produktet tilgængeligt til analyse. Efter elektroforese på agarosegel blev den farvet med ethidiumbromid, og en fluorescerende strimmel med forventet amplifikationslængde blev observeret ved bestråling med en UV-lampe. Produktet kan også hybridiseres til en Southern blot eller en spot blot med en radiomærket eller ikke-radiomærket oligonukleotidprobe. Det er mere praktisk at bruge det automatiske PCR-instrument. Efter tilsætning af reaktionsreagens, DNA-skabelon og Taq-DNA-polymerase til reagensglasset sættes det i den justerede procedure, det vil sige den krævede temperatur, tid og forlængelse af den respektive temperatur og tid og antallet af cykler. Reaktionen udføres i et automatisk instrument til opnåelse af et tilfredsstillende amplifikationsprodukt. Ikke egnet til mængden De, der ikke har en passende test, bør ikke testes. Bivirkninger og risici 1. Infektion: Vær opmærksom på aseptisk operation, når blod opsamles, undgå forurening af vand og andre dele på blodopsamlingsstedet for at undgå lokal infektion. 2, blødning: efter at blodet har fået en komplet komprimeringstid, især koagulopati, blødningstendens, for at undgå lokal subkutan oser, blå mærker og hævelse.