Chylomikronen

Die Chylomikronen sind die größten Lipoproteinpartikel in menschlichem Plasma, und CM ist der größte Teil des über die Nahrung aufgenommenen TG, der von der Dünndarmabsorptionsstelle an den systemischen Kreislauf abgegeben wird. Die CM-Clearing-Geschwindigkeit ist hoch, die Halbwertszeit beträgt 10 Minuten und die normale Person kann sie nach 12 Stunden Fasten nicht erkennen. Wenn das Lipoprotein elektrophoretisch behandelt wird, ist das CM am Ursprung. Es ist zu beachten, dass die Probe während der Serum-Lipoprotein-Elektrophorese frisch sein und nicht gefroren gelagert werden sollte. Grundlegende Informationen Fachklassifikation: Verdauungsuntersuchung Klassifikation: Blutuntersuchung Anwendbares Geschlecht: ob Männer und Frauen Fasten anwenden: Fasten Analyseergebnisse: Unter dem normalen Wert: Normalwert: Nein Überdurchschnittlich: Negativ: Normal. Positiv: Hyperlipoproteinämie Typ I, Hyperlipoproteinämie Typ V. Tipps: Vor der Untersuchung ist die Diät leicht und Alkohol verboten. Normalwert Negativ. Klinische Bedeutung Positive Hyperlipoproteinämie Typ I, Hyperlipoproteinämie Typ V. Positive Ergebnisse können Krankheiten sein: Hyperlipoproteinämie Typ I, Hyperlipoproteinämie Typ V Vorsichtsmaßnahmen 1. Immunturbidimetrische Trübungsmethode: (1) In Bezug auf Antiserum: Der turbidimetrische Assay stellt höhere Anforderungen an Antiserum als andere Methoden. Das turbidimetrische Verfahren ist vorzugsweise ein polyklonaler Antikörper. Antiserum muss frei von Antiserum sein. Das aus Humanserum extrahierte ApoA-I muss besonders beachtet werden, um Immunreinheit, chromatographische Reinheit und Elektrophorese-Reinheit zu erzielen, was im allgemeinen Labor nicht möglich ist. Der Antiserumtiter (Titer) sollte nicht unter 16 liegen. Gegenwärtig hat das ApoA-I-Antiserum in einigen im Handel erhältlichen Reagenzien einen sehr niedrigen Titer, weshalb beim Kauf des Kits Vorsicht geboten ist. Wenn Sie vor dem Kauf keine Erfahrung mit der Identifizierung der Antisera-Qualität haben, sollten Sie das qualifizierte Gerät bitten, diese zu identifizieren. (2) Die Probe in der oberen Methode (Serum) wird für den manuellen Betrieb 200-fach verdünnt (100 μl Probe), und wenn es sich um einen Präzisionsprobenehmer handelt, kann sie 20-fach verdünnt werden (unter Verwendung von 10 μl). Um sich an die Bedingungen verschiedener Laboratorien anzupassen (z. B. an verschiedene Arten von automatisierten Instrumenten), sollte der Anteil an Antigen-Antikörper beachtet werden, wenn geeignete Modifikationen vorgenommen werden. Es muss beachtet werden, dass das Reaktionssystem keinen Antigenüberschuss aufweist und die lineare Obergrenze nicht unter 2,5 g / l liegen sollte. Mit anderen Worten, die Menge an Antiserum muss ausreichend sein, andernfalls sind die Ergebnisse gering, wenn das ApoA-I in der Probe hoch ist. Gegenwärtig haben einige Hausarzneimittelkits nicht nur einen niedrigen Antiserumtiter, sondern die Dosierung der Proben bei der Operation ist zu hoch (wie 3 bis 5 & mgr; l), der Antikörper ist offensichtlich unzureichend und die gemessenen Ergebnisse sind unvermeidlich ungenau. (3) Um eine genaue Messung zu erreichen, müssen die Berechnungsergebnisse der Kalibrierungskurve in der turbidimetrischen ApoA-I- und B-Messung (Endpunktmethode) durchgeführt werden. Eine bestimmte Bereichskonzentration (niedrige Probendosis) (X) ist im Wesentlichen linear mit der Trübung (Y), und die lineare Regression berechnet einen bestimmten Achsenabschnitt auf der Y-Achse (A-Wert <0,1), sodass die Abweichung des Berechnungsergebnisses durch Einzelpunktkalibrierung berechnet wird. Größer, die gemessenen Ergebnisse können den Pegel von hoch (hoch niedrig, niedrig hoch) nicht genau wiedergeben. Vernachlässigen Sie wegen der Einfachheit der Einpunktmethode nicht die Genauigkeit der Messung. Unabhängig vom Typ des automatisierten Instruments müssen Sie zuerst die Kalibrierungskurve ausprobieren. Wenn der Test unter den Bedingungen des Instruments und den spezifischen Bedingungen wiederholt wird, ist der Schnittpunkt der Regressionslinie nicht offensichtlich, und es kann die Einpunkt-Kalibrierungsmethode verwendet werden. Beträgt die Probenmenge 3 bis 5 μl, sind die Konzentration und die Trübung nicht linear und können erst nach linearer Umrechnung der Kurve berechnet werden, auch wenn die Menge an Antiserum erhöht wird. (4) Der Hauptinterferenzfaktor ist die Trübung des Serums selbst (wie fettreiches Serum), und die Vorbehandlungsmethoden wie Ultrazentrifugation oder Lipasehydrolyse sind nicht praktikabel. Die Wirkung der Trübung mit Tensiden ist ebenfalls begrenzt, so dass im Assay ein Blindröhrchen hergestellt werden muss. Zusätzlich zu der in der automatisierten Analyse verwendeten Zweipunktmethode ist es ein Fehler, ein einzelnes Reagenz manuell zu verwenden, ohne den Probenrohling zu subtrahieren. Um die Auswirkung von Matrixeffekten auf die Trübungsreaktion zu verringern, muss ein festwertiges Serum als Kalibrator verwendet werden. Außerdem müssen Störungen wie Staubpartikel und trübe Geschirrkratzer ausgeschlossen werden. (5) Einige kommerzielle Kits (einschließlich einiger importierter Produkte) weisen ungenaue Kalibrierungsseren auf, die wichtige Fehlerquellen darstellen. 2. Raketenelektrophorese: (1) Die Auswahl des Antigenverdünnungsfaktors und der Antiserummenge sollte klar sein, die Steigung der Eichkurve sollte moderat sein und die Ausrichtungskurve sollte angemessen sein. Das Verfahren misst gleichzeitig ApoA-I und ApoB, und die Menge der beiden Antiseren sollte so eingestellt werden, dass die Peakhöhen der beiden unterschiedlich sind und die ApoB-Peakhöhe nicht weniger als 1 cm beträgt. (2) Antiseren aus verschiedenen Quellen (z. B. Kaninchen und Schafe), die zum entsprechenden Preis getestet wurden, weisen unterschiedliche Ergebnisse auf. Der ApoA-I-Assay ist vorzugsweise Kaninchen-Antiserum. Wenn das Kaninchenserum verwendet wird, ist die Peakform scharf und der vom Schafserum erzeugte Peak ist dick, die Peakspitze ist rund und stumpf, und manchmal erscheint ein Geisterbild vor dem Peak. Die Steigung der Eichkurve für das Eichserum ist ebenfalls unterschiedlich. Unabhängig davon, welches Antiserum verwendet wird, sind die quantitativen Ergebnisse nicht sehr unterschiedlich. (3) Elektrophorese Unter bestimmten Bedingungen ändert sich die Peakhöhe des Kalibrierungsserums mit verschiedenen Verdünnungen nicht wesentlich, und die Steigung der Kalibrierungskurve ist im wesentlichen dieselbe. Wenn die Peakhöhe der Probe den Kalibrierungskurvenbereich überschreitet, sollte der Probenverdünnungsfaktor angepasst und erneut getestet werden. Der interne Lebenslauf beträgt in der Regel weniger als 5%. (4) Ergebnisse der Raketenelektrophorese können durch Anfärben oder direkte visuelle Beobachtung des Raketenpeaks beobachtet werden. Ersteres verwendet weniger Proben und spart Antiserum, aber wenn die Proben und das Antiserum entsprechend erhöht werden, ist es bequemer, nicht zu färben. Die verwendete Agarose sollte elektroosmotisch oder hypotonisch sein. Durch Zugabe einer geeigneten Menge Dextran oder Polyethylenglykol zum Gel wird der Raketenpeak klarer. (5) Die Messung des Raketenpeaks kann die Fläche oder Peakhöhe berechnen, und die Fläche ist die Peakhöhe multipliziert mit der Peakbreite (der Breite auf der halben Höhe des Peaks). Die Messgenauigkeit beträgt vorzugsweise bis zu 0,1 mm. Es müssen mechanische oder elektronische Verstärkungsgeräte verwendet werden. Die Peakhöhe im Bereich der Standardkurve beträgt vorzugsweise 1 bis 4 cm. (6) Dieses Gesetz gilt für die Analyse einer kleinen Anzahl von Exemplaren. Auch zur Bestimmung von apoAII, CI, CII, CIII, D, E und Lp (a) geeignet. Inspektionsprozess 1. Immunturbidimetrische Trübungsmethode: (1) Die Probe sollte ein schnell trennbares Serum sein, das sich rechtzeitig trennen lässt und im Kühlschrank bei 2 bis 6 ° C, gemessen innerhalb einer Woche, ein halbes Jahr bei -20 ° C gelagert werden kann. (2) Bei Verwendung eines vollautomatischen Analysegeräts sollte das Verhältnis von Antigen zu Antikörper und die Reaktionszeit in angemessener Weise gemäß den verschiedenen Instrumentendesignparametern ausgewählt werden. Es kann auch als Ratenstreuungs-Nephelometrie-CM verwendet werden (z. B. Beckman-Trübungsmess-ICS oder Proteinarray-System). (3) Instrumente, die im manuellen Verfahren verwendet werden: Präzisionsphotometer mit 340-nm-Filter (oder Splitter), Probenvolumen beträgt vorzugsweise 0,5 ml (um Antiserum zu sparen), vorzugsweise mit Fließbecher. Die Probenverdünnung wird am besten verdünnt Sampler korrigiert. (4) Probenbehandlung: Die Serumprobe und das Qualitätskontrollserum werden 1: 200 mit einem Probenverdünnungsmittel verdünnt, dh zuerst 1:20 (5,0 μl Serum + 95 μl Verdünnungsmittel) und dann 1:10 ( Überschüssiges Serum 1:20 zur Bestimmung von apoB). Nach dem Mischen wurde es 30 Minuten bei 25 bis 37ºC stehengelassen und bei einer Wellenlänge von 340 nm trüb. Das Ergebnis wurde auf einer Standardkurve gemäß dem A-Wert von U-UB abgelesen. Diese Methode hat einen CV von <5%. (5) Kalibrierungskurve: Für jede Charge des manuellen und halbautomatischen Betriebs ist eine Kalibrierungskurve erforderlich, und das Kalibrierungsserum kann in vier Konzentrationen von 1: 100, 1: 200, 1: 300 und 1: 400 verdünnt werden, die mit der Probe identisch sind. Berechnen Sie die CM-Konzentration jedes Standardröhrchens anhand des festgelegten Werts und zeichnen Sie die Konzentration (X) mit dem entsprechenden A-Wert (Y) (berechnet durch lineare Regression) auf, der im Grunde gerade ist, aber einen bestimmten Schnittpunkt auf der Y-Achse aufweist. Sie können also keinen Einpunktstandard verwenden. Wenn die Operation genau ist, sollte der Korrelationskoeffizient zwischen der Konzentration und dem A-Wert über 0,985 liegen. Wenn drei Kalibrierungsseren in hoher, mittlerer und niedriger Konzentration vorliegen, kann sie auf die gleiche Weise wie die Probe betrieben und für die Dreipunktkalibrierung verwendet werden. Sie kann auch für die Fünfpunktkalibrierung verwendet werden (dh Serum mit hoher und mittlerer Konzentration, gleiches Mischen, mittlere und niedrige Konzentration) Serumkonzentrationen wurden in gleichen Mengen gemischt, um die beiden anderen Eichseren zu erhalten. Der lineare Bereich dieser Methode: 0,4 ~ 2,5 g / l. 2. Raketenelektrophorese: (1) Gießplatte: 10 g / l Agarose 10 ml pro Platte, im kochenden Wasserbad schmelzen, gut mischen, 50 μl CM-Antiserum und 8 μl apoB-Antiserum in kaltem Zustand auf 50 bis 55 ° C geben (die Menge hängt vom Antiserumtiter ab) ), schnell mischen und auf die auf der Wasserplattform voreingestellte Glasplatte gießen, abkühlen lassen und dann bei 4 ° C platzieren, nach 20 min Löcher stanzen, das Loch befindet sich am Kathodenende der Platte, der Lochdurchmesser beträgt 3 mm, der Lochabstand beträgt mindestens 5 mm und das Lochvolumen beträgt 5 μl. Legen Sie die Platte in den Elektrophoresebehälter und überbrücken Sie sie mit Filterpapier. (2) Verdünnung des Antigens: Das Kalibrierungsserum wurde mit 0,15 mol / l NaCl-Lösung auf 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 und 1: 400 (für die Kalibrierungskurve) verdünnt, und die Serumprobe betrug 1: In 200 verdünnt, den Kühlschrank nicht länger als 3 Tage auf 4 ° C stellen. (3) Beladung: 5 & mgr; l (genau) des verdünnten Serums und der Proben wurden in einem Niedrigstromzustand (10 mA / Platte) entnommen und zu der Agarosegel-Probenvertiefung gegeben. Jedes Board muss eine Reihe von Standards erfüllen. (4) Einschalten: Gleichmäßiger Fluss 24 mA / Platte, Klemmenspannung 6 ~ 8 V / cm, Kühlung mit fließendem Wasser, um Agarose 15 ° C aufrechtzuerhalten, Elektrophorese 3 ~ 4 h. (5) Deproteinisierung und Trockenfilm: Die Agaroseplatte wurde nach der Elektrophorese 30 Minuten in 0,15 mol / l NaCl getaucht, und der Film wurde auf den Polyesterfilm gelegt und durch leichten Druck unter einem mehrschichtigen Filterpapier getrocknet. Die Feuchtigkeit im Leim wird dann auf natürliche Weise mit dem Filterpapier, der Folie und der Polyesterfolie getrocknet oder durch ein Heißluftgebläse getrocknet. Nach dem Trocknen wird die Folie auf natürliche Weise vom Filterpapier und der Polyesterfolie getrennt. (6) Färben: Der Agarosefilm wurde 20 bis 30 Minuten in die Färbelösung getaucht. (7) Entfärbung: Tränken Sie den gefärbten Film mit einer Entfärbungslösung, bis der Raketenpeak klar und der Hintergrund im Wesentlichen farblos ist. Es kann in zwei Stück Cellophan in Wasser eingespannt und nach dem Trocknen lange gelagert werden. Es kann auch in fließendem Wasser eingeweicht werden, um den Hintergrund zu entfernen. Hinweis: 1 Das Verdünnungsverhältnis des Antigens und die Menge an Antiserum sollten so gewählt werden, dass der Raketenpeak klar ist, die Steigung der Kalibrierungskurve moderat ist und die Linie geeignet ist. Das Verfahren misst gleichzeitig ApoA-I und ApoB und die Menge der beiden Antiseren sollte so eingestellt werden, dass die Peakhöhen der beiden unterschiedlich sind und die ApoB-Peakhöhe nicht weniger als 1 cm beträgt. 2 Verschiedene Arten von Antiserums (wie Kaninchen und Schafe) werden zum entsprechenden Preis getestet, und die Ergebnisse sind unterschiedlich. Der ApoA-I-Assay ist vorzugsweise Kaninchen-Antiserum. Wenn das Kaninchenserum verwendet wird, ist die Peakform scharf und der vom Schafserum erzeugte Peak ist dick, die Peakspitze ist rund und stumpf, und manchmal erscheint ein Geisterbild vor dem Peak. Die Steigung der Eichkurve für das Eichserum ist ebenfalls unterschiedlich. Unabhängig davon, welches Antiserum verwendet wird, sind die quantitativen Ergebnisse nicht sehr unterschiedlich. 3 Elektrophorese Unter bestimmten Bedingungen ändert sich die Peakhöhe des Kalibrierungsserums mit verschiedenen Verdünnungen nicht wesentlich und die Steigung der Kalibrierungskurve ist im Wesentlichen dieselbe. Wenn die Peakhöhe der Probe den Kalibrierungskurvenbereich überschreitet, sollte der Probenverdünnungsfaktor angepasst und erneut getestet werden. Der interne Lebenslauf beträgt in der Regel weniger als 5%. 4 Ergebnisse der Raketenelektrophorese können durch Anfärben oder direkte visuelle Beobachtung des Raketenpeaks beobachtet werden. Ersteres verwendet weniger Proben und spart Antiserum, aber wenn die Proben und das Antiserum entsprechend erhöht werden, ist es bequemer, nicht zu färben. Die verwendete Agarose sollte elektroosmotisch oder hypotonisch sein. Durch Zugabe einer geeigneten Menge Dextran oder Polyethylenglykol zum Gel wird der Raketenpeak klarer. 5 Die Messung des Raketenpeaks kann die Fläche oder Peakhöhe berechnen. Die Fläche ist die Peakhöhe multipliziert mit der Peakbreite (der Breite in der halben Höhe des Peaks). Die Messgenauigkeit beträgt vorzugsweise bis zu 0,1 mm. Es müssen mechanische oder elektronische Verstärkungsgeräte verwendet werden. Die Peakhöhe im Bereich der Standardkurve beträgt vorzugsweise 1 bis 4 cm. 6 Diese Methode ist auf die Analyse einer kleinen Menge von Proben anwendbar. Auch zur Bestimmung von apoAII, CI, CII, CIII, D, E und Lp (a) geeignet. Nicht für die Menge geeignet Nr Nebenwirkungen und Risiken Nr