β-N-acetilglucosaminidasa

La β-N-acetilglucosaminidasa (NAG) hidroliza la β-N-acetilglucosaminida y también hidroliza la β-N-acetilgalactosamina. La enzima está ampliamente presente en diversos tejidos, órganos, fluidos corporales y células sanguíneas, y es una hidrolasa ácida en los lisosomas. Los métodos de medición son colorimetría y fluorometría. Información básica Clasificación de especialistas: clasificación de examen urinario: examen bioquímico Género aplicable: si los hombres y las mujeres aplican el ayuno: ayuno Resultados de análisis: Debajo de lo normal: Rara Valor normal: Β-N-acetilglucosaminidasa sérica: 15.14-27.94 U / L Por encima de lo normal: La enfermedad tubular renal: los metales pesados ​​(mercurio, plomo, cadmio, etc.) y el daño renal inducido por fármacos, isquemia, hipoxia, pérdida de sangre, shock, etc. pueden causar un aumento en la actividad NAG. Negativo: Positivo: Consejos: De acuerdo con el estado nutricional de todo el cuerpo, se dan leche, huevos, frutas, leche de soya, etc. en la comida. Valor normal 1, método colorimétrico de p-nitrofenol: NAG en suero21.54 ± 6.4U / L, el NAG en orina se distribuye normalmente, la mediana es 9.13U / g de creatinina, el límite superior del percentil 95 es 16.10U / g Creatinina 2. Método de fluorescencia: Suero adulto: 9.94 ± 2.O7U / L. Orina adulta: 6.39 ± 3.19 U / LCre. Importancia clínica La determinación de la actividad NAG en sangre y orina es sensible a los cambios de las lesiones del parénquima renal, especialmente la lesión aguda y la enfermedad activa, y se utiliza principalmente para el monitoreo temprano de la lesión renal y la observación de la enfermedad. 1, la enfermedad tubular renal, los metales pesados ​​(mercurio, plomo, cadmio, etc.) y el daño renal inducido por fármacos, isquemia, hipoxia, pérdida de sangre, shock, etc. pueden causar un aumento en la actividad de los NAG. 2, el síndrome nefrótico NAG urinario a menudo aumentó significativamente, el período de remisión disminuyó, la recuperación rápida cuando la recurrencia, se puede utilizar como una indicación para la observación clínica. La fase aguda de la glomerulonefritis varía mucho, pero el cambio es menor que el de la lesión tubular renal. 3, la ubicación del diagnóstico de infección del tracto urinario de pielonefritis aguda y crónica aumento de NAG urinario, se puede distinguir de la cistitis simple. Puede usarse para el diagnóstico de infecciones tempranas del tracto urinario superior. 4, el rechazo del trasplante renal que controla el rechazo del trasplante renal temprano NAG puede aumentarse, más sensible que la proteína de orina, la creatinina sérica, el aclaramiento de creatinina. 5, diagnóstico temprano de nefropatía diabética, nefropatía diabética, NAG elevada en orina, el diagnóstico temprano de esta enfermedad es mejor que la albúmina urinaria y la microglobulina β2. Los resultados altos pueden ser enfermedades: síndrome nefrótico, infecciones del tracto urinario (1) método colorimétrico de p-nitrofenol: 1 El sustrato p-nitrofenol debe purificarse y preformarse a 50 ° C durante 24 h. La concentración se ajustó a 0.04 mmol / L con 10 mmol / L de NaOH, y la curva de absorción se escaneó con un espectrofotómetro de ancho de banda estrecho, λmax = 401 nm, de acuerdo con el estándar IFCC, Aλmax = 0.7316 a 0.7388, y Eλmax = 18380 ± 90 (25 ° C). 2 La solubilidad del sustrato es pequeña: cuando se prepara, debe ajustarse a una pasta con una cantidad apropiada de tampón pH 4.6 y luego agregar gradualmente el tampón a la cantidad requerida. 3 Cuando los resultados de la medición están en el rango ultra lineal, la muestra debe diluirse con solución salina fisiológica y volver a analizarse. El resultado se multiplica por el factor de dilución. 4 La concentración de enzimas en la orina se ve muy afectada por el volumen de orina, se debe retener el volumen de orina de 24 h. Si la tasa de excreción de enzimas se calcula por la proporción de NAG / g de creatinina, es decir, no se ve afectada por la concentración o la dilución de orina, y no es necesario dejar 24 horas de orina. (2) Método de fluorescencia: 1 El método de fluorescencia para medir NAG tiene un kit doméstico, que tiene una alta sensibilidad y no se ve afectado por la orina. 2 También se puede usar con la fábrica de instrumentos analíticos No.3 de Shanghai para producir un fotómetro de fluorescencia 930, un filtro de excitación 360 y un compuesto de filtro de emisión (400 + 450), con resultados satisfactorios. 3 La concentración de cada componente en la solución de reacción enzimática es: 1.33 mmol / L de sustrato, 20 mmol / L de ácido cítrico y 432 mmol / L de Na2HPO. 4 Los disolventes utilizados en los reactivos deben ser agua destilada, el sustrato debe estar libre de 4-MU, BSA debe estar libre de la enzima o calentar a 50 ° C durante 2 h. 5 NAG en suero es estable durante varias horas a varios días a 4 ° C, y estable durante varios meses a -20 ° C. La muestra de orina fue estable a 4 ° C durante 1 semana, y también se utilizó plasma anticoagulado con citrato. La 6β-N-acetilglucosaminida puede ser catalizada por dos enzimas, una es la β-N-acetilglucosaminidasa (EC 3.2.1.30) y la otra es la β-N-acetilglucosidasa (EC3) .2.1.52) Solo EC3.2.1.30 o EC3.2.1.52 pueden definirse para enzimas purificadas. El NAG, que a menudo se menciona en la literatura nacional, lleva el nombre estricto del sustrato utilizado, en lugar de la especificidad de la enzima para el sustrato. Por lo tanto, la literatura extranjera actual a menudo se conoce como β-N-acetilglucosaminidasa. Proceso de inspección (1) Mezcla colorimétrica de p-nitrofenol, a una longitud de onda de 405 nm, trayectoria óptica de 1 cm, agua destilada cero, lea la absorbancia de cada tubo y verifique la curva estándar con la diferencia de (AU-AC). 1 El sustrato p-nitrofenol debe purificarse y preformarse a 50 ° C durante 24 h. La concentración se ajustó a 0.04 mmol / L con 10 mmol / L de NaOH, y la curva de absorción se escaneó con un espectrofotómetro de ancho de banda estrecho, λmax = 401 nm, de acuerdo con el estándar IFCC, Aλmax = 0.7316 a 0.7388, y Eλmax = 18380 ± 90 (25 ° C). Coeficiente de absorción molar según p-nitrofenol 2 La solubilidad del sustrato es pequeña: cuando se prepara, debe ajustarse a una pasta con una cantidad apropiada de tampón pH 4.6 y luego agregar gradualmente el tampón a la cantidad requerida. 3 Cuando los resultados de la medición están en el rango ultra lineal, la muestra debe diluirse con solución salina fisiológica y volver a analizarse. El resultado se multiplica por el factor de dilución. 4 La concentración de enzimas en la orina se ve muy afectada por el volumen de orina, se debe retener el volumen de orina de 24 h. Si la tasa de excreción de enzimas se calcula por la proporción de NAG / g de creatinina, es decir, no se ve afectada por la concentración o la dilución de orina, y no es necesario dejar 24 horas de orina. (2) Espectrofotometría de fluorescencia: primero diluya el suero o la orina con un tampón que no contenga albúmina de suero bovino (BSA), Mezcle, la longitud de onda de excitación es 364 nm, la longitud de onda de emisión es 448 nm, para detener el ajuste de cero líquido, y la intensidad de fluorescencia del tubo 6 μmol / L 4-MU se ajusta a 100, y la intensidad de fluorescencia del tubo en blanco y el tubo de medición se miden respectivamente. 1 El método de fluorescencia para medir NAG tiene un kit doméstico, que tiene una alta sensibilidad y no se ve afectado por la orina. 2 También se puede usar con la fábrica de instrumentos analíticos No.3 de Shanghai para producir un fotómetro de fluorescencia 930, un filtro de excitación 360 y un compuesto de filtro de emisión (400 + 450), con resultados satisfactorios. 3 La concentración de cada componente en la solución de reacción enzimática es: 1.33 mmol / L de sustrato, 20 mmol / L de ácido cítrico y 432 mmol / L de Na2HPO. 4 Los disolventes utilizados en los reactivos deben ser agua destilada, el sustrato debe estar libre de 4-MU, BSA debe estar libre de la enzima o calentar a 50 ° C durante 2 h. 5 NAG en suero es estable durante varias horas a varios días a 4 ° C, y estable durante varios meses a -20 ° C. La muestra de orina fue estable a 4 ° C durante 1 semana, y también se utilizó plasma anticoagulado con citrato. La 6β-N-acetilglucosaminida puede ser catalizada por dos enzimas, una es la β-N-acetilglucosaminidasa (EC 3.2.1.30) y la otra es la β-N-acetilglucosidasa (EC3) .2.1.52) Solo EC3.2.1.30 o EC3.2.1.52 pueden definirse para enzimas purificadas. El NAG, que a menudo se menciona en la literatura nacional, lleva el nombre estricto del sustrato utilizado, en lugar de la especificidad de la enzima para el sustrato. Por lo tanto, la literatura extranjera actual a menudo se conoce como β-N-acetilglucosaminidasa.