quilomicrones

Los quilomicrones son las partículas de lipoproteínas más grandes en el plasma humano, y la CM es la mayoría de los TG dietéticos entregados desde el sitio de absorción del intestino delgado a la circulación sistémica. La velocidad de eliminación de CM es rápida, la vida media es de 10 minutos y la persona normal no puede detectarla después de 12 horas en ayunas. Cuando la lipoproteína se electroforesis, el CM está en el origen. Cabe señalar que la muestra debe estar fresca durante la electroforesis de lipoproteínas en suero y no debe almacenarse congelada. Información básica Clasificación de especialistas: clasificación del examen digestivo: examen de sangre Género aplicable: si los hombres y las mujeres aplican el ayuno: ayuno Resultados de análisis: Debajo de lo normal: Valor normal: No Por encima de lo normal: Negativo: Normal Positivo: Hiperlipoproteinemia tipo I, hiperlipoproteinemia tipo V. Consejos: Antes del examen, la dieta es ligera y el alcohol está prohibido. Valor normal Negativo Importancia clínica Hiperlipoproteinemia positiva tipo I, hiperlipoproteinemia tipo V. Los resultados positivos pueden ser enfermedades: hiperlipoproteinemia tipo I, hiperlipoproteinemia tipo V precauciones 1. Método de turbidez inmunoturbidimétrica: (1) Con respecto al antisuero: el ensayo turbidimétrico tiene mayores requisitos de antisuero que otros métodos. El método turbidimétrico es preferiblemente un anticuerpo policlonal. El antisuero debe estar libre de antisuero. Debe prestar mucha atención a la apoA-I extraída del suero humano para lograr inmunopureza, pureza cromatográfica y pureza de electroforesis, lo que no es posible en el laboratorio general. El título de antisuero (título) no debe ser inferior a 16. En la actualidad, en algunos reactivos comerciales nacionales, el antisuero apoA-I tiene un título muy bajo, por lo que se debe tener cuidado al comprar el kit. Si no tiene experiencia en la identificación de la calidad de antisueros antes de la compra, debe solicitar a la unidad calificada que la identifique. (2) La muestra en el método superior (suero) se diluye 200 veces para operación manual (100 μl de muestra), y si es una muestra de precisión, se puede diluir 20 veces (usando 10 μl). Para adaptarse a las condiciones de diferentes laboratorios (como diferentes tipos de instrumentos automatizados), se debe prestar atención a la proporción de antígeno-anticuerpo al realizar las modificaciones apropiadas. Se debe tener en cuenta que no debe haber exceso de antígeno en el sistema de reacción, y el límite superior lineal no debe ser inferior a 2.5 g / L. En otras palabras, la cantidad de antisuero debe ser suficiente, de lo contrario los resultados son bajos cuando la apoA-I es alta en la muestra. En la actualidad, algunos kits de medicamentos domésticos no solo tienen un bajo título antisuero, sino que la dosis de las muestras en la operación es demasiado grande (como 3 ~ 5 μl), el anticuerpo es obviamente insuficiente y los resultados medidos son inevitablemente inexactos. (3) Para lograr una medición precisa, los resultados del cálculo de la curva de calibración deben realizarse en la medición turbidimétrica apoA-I y B (método de punto final). Una cierta concentración de rango (dosis de muestra baja) (X) es básicamente lineal con turbidez (Y), y la regresión lineal calcula una cierta intersección en el eje Y (valor A <0.1), por lo que la desviación del resultado del cálculo se calcula mediante calibración de punto único. Más grande, los resultados medidos no pueden reflejar con precisión el nivel de alto (alto bajo, bajo alto). No descuide la precisión de la medición debido a la simplicidad del método de punto único. Independientemente del tipo de instrumento automatizado, primero debe probar la curva de calibración. Si la prueba se repite bajo las condiciones del instrumento y las condiciones específicas, la intercepción de la línea de regresión no es obvia, entonces se puede usar el método de calibración de punto único. Cuando la cantidad de la muestra es de 3 a 5 μl, incluso si se aumenta la cantidad de antisuero, la concentración y la turbidez no son lineales, y solo pueden calcularse después de que la curva se convierte linealmente. (4) El principal factor de interferencia es la turbidez del suero en sí (como el suero rico en grasas), y los métodos de pretratamiento como la ultracentrifugación o la hidrólisis de lipasa no son prácticos. El efecto de la turbidez con tensioactivos también es limitado, por lo que se debe hacer un tubo en blanco en el ensayo. Además del método de dos puntos utilizado en el análisis automatizado, es un error utilizar manualmente un solo reactivo sin restar la muestra en blanco. Para reducir el efecto de los efectos de la matriz en la respuesta de turbidez, se debe usar suero de valor fijo como calibrador. Además, se deben excluir las interferencias como partículas de polvo y rasguños turbios de platos. (5) Algunos kits comerciales (incluidos algunos productos importados) tienen valores de suero de calibración inexactos, que son fuentes importantes de error. 2. Electroforesis de cohetes: (1) La selección del factor de dilución del antígeno y la cantidad de antisuero debe ser clara, la pendiente de la curva de calibración es moderada y la curva de alineación es adecuada. El método mide simultáneamente apoA-I y apoB, y la cantidad de los dos antisueros debe ajustarse para que las alturas máximas de los dos sean diferentes, y la altura máxima de apoB no sea inferior a 1 cm. (2) Antisueros de diferentes tipos de fuentes (como conejos y ovejas), probados al precio equivalente, los resultados serán diferentes. El ensayo apoA-I es preferiblemente antisuero de conejo. Cuando se usa el suero de conejo, la forma del pico es nítida y el pico producido por el suero de oveja es grueso, la punta del pico es redonda y roma, y ​​a veces aparece una imagen fantasma antes del pico. La pendiente de la curva de calibración para el suero de calibración también es diferente. Sin embargo, no importa qué antisuero se use, los resultados cuantitativos no son muy diferentes. (3) Electroforesis bajo ciertas condiciones, la altura máxima del suero de calibración de diferentes diluciones no cambiará significativamente, y la pendiente de la curva de calibración es básicamente la misma. Si la altura del pico de la muestra excede el rango de la curva de calibración, el factor de dilución de la muestra se debe ajustar y volver a analizar. El CV entre placas suele ser inferior al 5%. (4) Los resultados de la electroforesis en cohetes se pueden ver mediante tinción u observación visual directa del pico del cohete. El primero usa menos muestras y ahorra antisuero, pero si las muestras y el antisuero se incrementan adecuadamente, es más conveniente no manchar. La agarosa utilizada debe ser electroosmótica o hipotónica estándar. Agregar la cantidad adecuada de dextrano o polietilenglicol al gel aclarará el pico del cohete. (5) La medición del pico del cohete puede calcular el área o la altura del pico, y el área es la altura del pico multiplicada por el ancho del pico (el ancho a la mitad de la altura del pico). La precisión de la medición es preferiblemente de hasta 0,1 mm. Se deben utilizar equipos de amplificación mecánica o electrónica. La altura del pico en el rango de la curva estándar es preferiblemente de 1 a 4 cm. (6) Esta Ley se aplica al análisis de un pequeño número de especímenes. También es adecuado para la determinación de apoAII, CI, CII, CIII, D, E y Lp (a). Proceso de inspección 1. Método de turbidez inmunoturbidimétrica: (1) La muestra debe ser un suero de separación rápida que pueda separarse a tiempo, puede almacenarse en un refrigerador a una temperatura de 2 a 6 ° C, medirse en 1 semana y almacenarse a -20 ° C durante medio año. (2) Cuando se utiliza un analizador completamente automático, la proporción de antígeno a anticuerpo y el tiempo de reacción deben seleccionarse razonablemente de acuerdo con diferentes parámetros de diseño del instrumento. También se puede utilizar como un CM de nefelometría de dispersión de frecuencia, como el sistema de turbidímetro Beckman ICS o el sistema de proteinarray). (3) Instrumentos utilizados en el método manual: fotómetro de precisión con filtro de 340 nm (o divisor), el volumen de muestra es preferiblemente de 0,5 ml (para ahorrar antisuero), preferiblemente con copa de flujo, la dilución de la muestra se diluye mejor Muestra corregida. (4) Tratamiento de la muestra: la muestra de suero y el suero de control de calidad se diluyen 1: 200 con un diluyente de muestra, es decir, primero diluido 1:20 (5,0 μl de suero + 95 μl de diluyente) y luego diluido 1:10 ( Exceso de suero 1:20 para la determinación de apoB). Después de mezclar, se dejó reposar a una temperatura de 25 a 37 ° C durante 30 minutos, y se volvió turbio a una longitud de onda de 340 nm. El resultado se leyó en una curva estándar de acuerdo con el valor A de U-UB. Este método tiene un CV de <5%. (5) Curva de calibración: para cada lote de operación manual y semiautomática, se requiere una curva de calibración, y el suero de calibración se puede diluir en cuatro concentraciones de 1: 100, 1: 200, 1: 300 y 1: 400, que son las mismas que la muestra. Operación, calcule la concentración de CM de cada tubo estándar de acuerdo con el valor fijo y grafique la concentración (X) con su correspondiente valor A (Y) (calculado por regresión lineal), que es básicamente recto, pero tiene una cierta intersección en el eje Y. Por lo tanto, no puede usar un estándar de punto único. Cuando la operación es precisa, el coeficiente de correlación entre la concentración y el valor A debe estar por encima de 0.985. Si hay tres sueros de calibración en concentraciones altas, medias y bajas, se puede operar de la misma manera que la muestra y se puede usar para la calibración de tres puntos. También se puede usar para la calibración de cinco puntos (es decir, mezcla de suero de concentración media-alta igual, medio y bajo Las concentraciones de suero se mezclaron en cantidades iguales para convertirse en los otros dos sueros de calibración). El rango lineal de este método: 0.4 ~ 2.5g / L. 2. Electroforesis de cohetes: (1) placa de vertido: 10 g / L de agarosa 10 ml por placa, derretir en baño de agua hirviendo, mezclar bien, agregar 50 μl de antisuero CM y antisuero apoB 8 μl cuando esté frío a 50 ~ 55 ° C (la cantidad depende del título de antisuero) ), mezcle rápidamente y vierta sobre la placa de vidrio preestablecida en la plataforma de agua, enfríe y luego coloque a 4 ° C, después de 20 minutos, perfore orificios, el orificio está en el extremo del cátodo de la placa, el diámetro del orificio es de 3 mm, la separación del orificio es de al menos 5 mm y la capacidad del orificio es de 5 μl. Coloque la placa en el tanque de electroforesis y el puente con papel de filtro. (2) Dilución del antígeno: el suero de calibración se diluyó a 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 y 1: 400 (para la curva de calibración) con solución de NaCl 0,15 mol / L, y la muestra de suero fue 1: Diluido en 200, coloque el refrigerador a 4 ° C durante no más de 3 días. (3) Carga: 5 μl (exacto) del suero diluido y las muestras se tomaron en un estado de baja corriente (10 mA / placa) y se agregaron bien a la muestra de gel de agarosa. Cada placa tiene que hacer una serie de estándares. (4) Encendido: flujo constante 24 mA / placa, voltaje terminal 6 ~ 8V / cm, enfriamiento con agua corriente para mantener la agarosa 15 ° C, electroforesis 3 ~ 4h. (5) Desproteinización y película seca: la placa de agarosa después de la electroforesis se sumergió en 0,15 mol / l de NaCl durante 30 minutos, y la película se colocó sobre la película de poliéster y se secó a presión ligera con un papel de filtro multicapa. La humedad en el pegamento se seca naturalmente con el papel de filtro, la película y la película de poliéster, o se seca con un soplador de aire caliente.Después del secado, la película se separa naturalmente del papel de filtro y la película de poliéster. (6) Teñido: la película de agarosa se sumergió en la solución de tinción durante 20 a 30 minutos. (7) Descolorización: Remoje la película teñida con una solución decolorante hasta que el pico del cohete esté claro y el fondo sea básicamente incoloro. Se puede sujetar en dos piezas de celofán en agua y se puede almacenar durante mucho tiempo después del secado. También se puede remojar en agua corriente para eliminar el fondo. Nota: 1 La relación de dilución del antígeno y la cantidad de antisuero deben seleccionarse de modo que el pico del cohete sea claro, la pendiente de la curva de calibración sea moderada y la línea sea adecuada. El método mide simultáneamente apoA-I y apoB, y la cantidad de los dos antisueros debe ajustarse para que las alturas máximas de los dos sean diferentes, y la altura máxima de apoB no sea inferior a 1 cm. 2 Los diferentes tipos de antisueros (como conejos y ovejas) se prueban al precio equivalente, y los resultados serán diferentes. El ensayo apoA-I es preferiblemente antisuero de conejo. Cuando se usa el suero de conejo, la forma del pico es nítida y el pico producido por el suero de oveja es grueso, la punta del pico es redonda y roma, y ​​a veces aparece una imagen fantasma antes del pico. La pendiente de la curva de calibración para el suero de calibración también es diferente. Sin embargo, no importa qué antisuero se use, los resultados cuantitativos no son muy diferentes. 3 Electroforesis bajo ciertas condiciones, la altura máxima del suero de calibración de diferentes diluciones no cambiará significativamente, y la pendiente de la curva de calibración es básicamente la misma. Si la altura del pico de la muestra excede el rango de la curva de calibración, el factor de dilución de la muestra se debe ajustar y volver a analizar. El CV entre placas suele ser inferior al 5%. 4 Los resultados de la electroforesis en cohetes se pueden observar mediante tinción u observación visual directa del pico del cohete. El primero usa menos muestras y ahorra antisuero, pero si las muestras y el antisuero se incrementan adecuadamente, es más conveniente no manchar. La agarosa utilizada debe ser electroosmótica o hipotónica estándar. Agregar la cantidad adecuada de dextrano o polietilenglicol al gel aclarará el pico del cohete. 5 La medición del pico del cohete puede calcular el área o la altura del pico, y el área es la altura del pico multiplicada por el ancho del pico (el ancho a la mitad de la altura del pico). La precisión de la medición es preferiblemente de hasta 0,1 mm. Se deben utilizar equipos de amplificación mecánica o electrónica. La altura del pico en el rango de la curva estándar es preferiblemente de 1 a 4 cm. 6 Este método es aplicable al análisis de una pequeña cantidad de muestras. También es adecuado para la determinación de apoAII, CI, CII, CIII, D, E y Lp (a). No apto para la multitud. No Reacciones adversas y riesgos No