prueba de endotoxina bacteriana

La prueba de endotoxina bacteriana es para determinar si la endotoxina bacteriana en el artículo de prueba cumple con los requisitos. La endotoxina es un lipopolisacárido de la pared celular de las bacterias Gram negativas, y su componente tóxico es el lípido A. La bacteria murió después de la desintegración. La prueba de endotoxina bacteriana involucra dos métodos, un método de gel y un método fotométrico, el último incluye un método turbidimétrico y un método de sustrato cromogénico. Al probar la prueba, se puede usar cualquiera de los métodos para la prueba. Cuando los resultados de la medición son controvertidos, a menos que se especifique lo contrario, prevalecerán los resultados del método de gel. Información básica Categoría de especialista: Categoría de inspección: Examen microbiológico patogénico Género aplicable: si los hombres y las mujeres aplican el ayuno: ayuno Resultados de análisis: Debajo de lo normal: Valor normal: No Por encima de lo normal: Negativo: El gel no permanece intacto y es negativo desde la pared del tubo. Positivo: Los registros positivos que no se salieron de la pared fueron positivos. Consejos: La prueba de endotoxina bacteriana es determinar si la endotoxina bacteriana en el artículo de prueba cumple con los requisitos. Valor normal El tipo y la proporción de la flora en el cuerpo son normales, y el cuerpo humano está en un equilibrio dinámico. Importancia clínica El pirógeno es principalmente una endotoxina liberada por bacterias. El pirógeno ingresa al sistema de circulación sanguínea del cuerpo y causa una serie de reacciones adversas como fiebre. Por lo tanto, la prueba de inyección de endotoxina bacteriana o pirógena es un índice de calidad importante para garantizar la seguridad de la inyección. Resultado anormal Clínicamente, cuando se administra una gran cantidad de infusión por vía intravenosa, el paciente presenta síntomas de escalofríos, fiebre alta, sudoración, desmayos, vómitos dentro de 0.5 a 1 hora debido a la presencia de pirógenos en la solución del medicamento. La temperatura corporal puede alcanzar los 40 ° C durante la fiebre alta. Incluso pueden sorprender. El resultado positivo puede ser la enfermedad: consideraciones sobre enteritis por Bacillus licheniformis Al establecer el método de prueba de endotoxina bacteriana, al calcular el límite de endotoxina L, MVD y MVC, es necesario prestar atención a parámetros importantes como la dosis humana máxima, las especificaciones del producto, la sensibilidad del reactivo de esputo, etc., ya que los errores de cálculo conducirán a todos los esfuerzos posteriores. Todo falló. Los problemas comunes son: 1. La dosis clínica se determina incorrectamente. Solo se usa la dosis convencional. No se considera la dosis máxima posible y la vía de administración del cuerpo humano. En la fórmula de cálculo del límite L = K / M, debido a la definición del valor K y el valor M. El desenfoque hace que la asignación de los valores K y M sea inexacta, lo que finalmente conduce a un cálculo incorrecto de los límites. Por ejemplo, una inyección de un adulto clínico se administra de 40 a 80 mg por infusión intravenosa, y un bebé (tres meses o más) se administra por vía intravenosa de 10 a 20 mg cada vez. El límite de la dosis para adultos (peso corporal 60 kg) es de 3.75EU / mg, mientras que el peso del lactante es solo de aproximadamente 5 kg, el límite calculado es de aproximadamente 1.25EU / mg, si no se considera la dosis máxima por kilogramo de peso corporal, el límite de endotoxina bacteriana Habrá una gran diferencia. 2. El límite de endotoxina bacteriana de algunas variedades declaradas no se calcula con base en la dosis clínica, pero se calcula con base en la dosis del mismo tipo de prueba de pirógenos, lo que resulta en un error límite. 3. El límite de endotoxina bacteriana de algunas variedades se copió de la farmacopea extranjera, y no se consideró la diferencia entre la dosis de uso clínico del mercado interno y el peso de los chinos y los extranjeros, y el límite se determinó incorrectamente. 4. Cálculo falso de la dosis de dosificación diaria (dosificación múltiple en un día). 5. Cuando la especificación de variedad (concentración) cambia, el cálculo MVD no se ajusta. 6. La dosis máxima que se utilizará para establecer el método ha excedido la dosis utilizada en la clínica. Proceso de inspección Primero, la determinación del título Los patrones de endotoxinas bacterianas se calibran como puntos de referencia para determinar la potencia equivalente del peso base. El título por 1 mg de estándar de trabajo debe ser no menos de 2 UE, no más de 50 UE, y datos experimentales con uniformidad y estabilidad. El título se determina de la siguiente manera: se usan al menos 4 muestras de cada lote de estándar de trabajo, y se usa el mismo lote de reactivo de esputo y el mismo estándar. Cada estándar de trabajo se diluye con agua de prueba de endotoxina * de acuerdo con el peso y el producto estándar. Se prepara una serie de diluciones de 2 veces de solución de endotoxina y se hace reaccionar con reactivo de hidrazina. Cuando el logaritmo del punto final de la reacción de los cuatro estándares de trabajo Cuando la desviación estándar (S) de la media es menor que 0.365, se calcula la media geométrica (en ng / mg) de los puntos finales de reacción de los cuatro estándares de trabajo y el punto final de reacción (en EU / mg) del estándar. Segundo, preparación de prueba 1. Los utensilios utilizados en este método se tratan para eliminar cualquier endotoxina exógena que pueda estar presente. También se puede tostar en seco a 250 ° C durante 30 minutos o 180 ° C durante 2 horas. También se pueden utilizar otros métodos adecuados. La operación de prueba debe evitar la contaminación microbiana. 2. Verifique el valor de la etiqueta de sensibilidad del número de lote 鲎 reactivo antes de la prueba, que debe cumplir con los requisitos. Añadir la cantidad de reactivo de hidrazina solvente. Después de la disolución, es una solución de reactivo de guanidina y está lista para usar. 3. Dilución de la muestra de prueba: cuando el valor de la marca de sensibilidad del reactivo número de lote 鲎 es menor que el límite interno de veneno de la muestra de prueba, calcúlelo con la siguiente fórmula y use el agua de prueba de endotoxina * para diluir el reactivo para inspección. Factor de dilución de la muestra de prueba = X / λ X: límite de endotoxina limitado por endotoxina (UE / ml) λ: valor de sensibilidad del agente de prueba para el agente de prueba (UE / ml) Tercero, verifique Tubo de ensayo de 4 × 75 mm (o 0.1 ml / juego de ampolla original de reactivo de esputo) que contiene 0.1 ml de solución de reactivo de esputo, 2 de los cuales se agregan con 0.1 ml para el tubo de ensayo y 1 para el estándar de trabajo de endotoxina 2 λ Se usaron 0,1 ml como tubo de control positivo y se agregaron 0,1 ml de una solución de reactivo de esputo como tubo de control negativo. Después de mezclar suavemente los tubos de ensayo, el tubo se cerró y se colocó verticalmente en un baño de agua a 37 ± 1 ° C durante 60 ± 2 minutos. Tenga cuidado al sostener el tubo y al tomarlo para evitar resultados negativos debido a la vibración. (4) Juicio de resultados El tubo se retiró suavemente del baño de agua y se invirtió lentamente a 1800. El gel del tubo no se deformaba. El positivo no se deslizó de la pared del tubo. (+) El gel no podía permanecer intacto y era negativo de la pared del tubo. (1) Si el tubo de ensayo 2 es (1), se considerará que cumple con las regulaciones, y no se realizará la prueba del método de prueba de pirógenos (método de conejo). Si ambos tubos son (+), se debe considerar que no cumplen con las regulaciones. Por ejemplo, 1 tubo en 2 tubos es (+) y 1 tubo es (1). Según el método descrito, se vuelven a analizar 4 tubos. Un tubo en 4 tubos es (+), lo que significa que no está en conformidad con las regulaciones. Salvo que se indique lo contrario en el texto, los artículos de prueba que cumplan con los requisitos se probarán mediante el método de prueba de pirógenos (el método del conejo) y se juzgarán de acuerdo con los resultados. El límite de endotoxina bacteriana en el artículo de prueba deberá estar de acuerdo con las disposiciones de los respectivos artículos. El control positivo fue (1) o el control negativo fue (+), y la prueba fue ineficaz. Accesorio: Prueba de endotoxina bacteriana para agua estéril inyectable, agua inyectable, inyección de cloruro de sodio, 5% y 10% de inyección de glucosa. No apto para la multitud. Generalmente no hay tabúes. Reacciones adversas y riesgos En general no hay daño.