Electroforesis de proteínas séricas (SPE)

Las biomoléculas como las proteínas llevan una carga negativa o positiva en un tampón y se mueven hacia un ánodo o un cátodo en un campo eléctrico, que se llama electroforesis. Debido a sus diferentes puntos isoeléctricos, diferente tamaño molecular, forma y relación carga / masa, diferentes moléculas de proteína tienen diferente movilidad electroforética, y varias proteínas se pueden separar en un cierto medio de soporte. Las técnicas de electroforesis comúnmente utilizadas incluyen electroforesis con membrana de acetato de celulosa, electroforesis en gel de agarosa, electroforesis en gel de poliacrilamida e inmunoelectroforesis. Además, el mieloma múltiple a menudo tiene bandas de globulina M entre la región de la globulina beta y la región de la globulina gamma; la albúmina doble muestra una banda de albúmina doble. Información básica Clasificación de especialistas: clasificación de verificación de crecimiento y desarrollo: examen bioquímico Género aplicable: si los hombres y las mujeres aplican el ayuno: ayuno Incluyendo elementos: suero de β2 microglobulina (β2-MG), suero de α2-macroglobulina, suero de α1-microglobulina Consejos: ayuno de 12 horas, análisis de sangre venosa, las muestras deben ser sangre fresca. Antes de la prueba, debe informar al médico sobre los medicamentos que ha tomado recientemente y los cambios fisiológicos recientes. Valor normal Electroforesis en membrana de acetato de celulosa albúmina 0.61 ~ 0.71 (61% ~ 71%), α1 globulina 0.03 ~ 0.04 (3% ~ 4%), α2 globulina 0.06 ~ 0.10 (6% ~ 10%), beta globulina 0.07 a 0.11 (7% a 11%) y gammaglobulina 0.09 a 0.18 (9% a 18%). Importancia clínica 1, la reducción de albúmina se encuentra en hepatitis crónica, cirrosis, cáncer de hígado, etc. 2, la globulina α1 (glucoproteína) aumentó en el cáncer primario de hígado. Se reduce en hepatitis severa, cirrosis y coma hepático, y se correlaciona positivamente con la albúmina. La determinación de la globulina α1 en la enfermedad hepática tiene un valor de referencia para juzgar la gravedad y el pronóstico de la hepatitis. En general, el aumento de la globulina α1 indica que la afección es leve y la disminución de la globulina α1 indica que la afección es más pesada. En la insuficiencia hepática grave, el contenido sérico puede reducirse significativamente. 3. No hubo cambios significativos en la etapa inicial de la hepatitis viral α2 globulina, y aumentó gradualmente después de una semana. La hepatitis subaguda y la necrosis hepática aguda y la cirrosis descompensada se redujeron. 4, beta globulina aumentada en hígado graso, hiperlipidemia, síndrome nefrótico, diabetes con hipercolesterolemia, ictericia obstructiva, tumores malignos. En la enfermedad hepática de colestasis, su contenido aumenta, paralelamente al aumento de la globulina α2. Reducida en hepatitis aguda y crónica, la cirrosis, especialmente la cirrosis descompensada y la cirrosis necrótica, disminuyeron de manera más significativa. 5, la gammaglobulina aumentó en hepatitis crónica, cirrosis, enfermedad hepática y vesicular. La cirrosis típica se puede ver en la fusión de las bandas β y γ para formar un puente β-γ. Los cambios en la gammaglobulina en pacientes con enfermedad hepática pueden reflejar la gravedad de la afección. A medida que la afección mejora, su contenido puede caer gradualmente a la normalidad. Si continúa disminuyendo a un nivel alto, indica que la afección es grave, el pronóstico es malo y hay una tendencia a desarrollar hepatitis crónica y cirrosis. Además, la infección, la esquistosomiasis, el mieloma múltiple, la enfermedad del tejido conectivo, etc. también pueden elevarse. Reducir la incidencia de deficiencia de gammaglobulina, pacientes con quimioterapia parcial. Además, el mieloma múltiple a menudo tiene bandas de globulina M entre la región de la globulina beta y la región de la globulina gamma; la albúmina doble muestra una banda de albúmina doble. Los resultados bajos pueden ser enfermedades: los resultados altos de ictericia colestática pueden ser enfermedades: cirrosis hepática, cáncer primario de hígado, mieloma múltiple en ancianos 1, en ayunas 12 horas, análisis de sangre venosa, las muestras deben ser sangre fresca. 2. Antes de la prueba, debe informar al médico sobre los medicamentos que ha tomado recientemente y los cambios fisiológicos recientes. 3. La elevación fisiológica puede ocurrir en los siguientes casos: (1) El aumento de α1-globulina se puede ver después de 6 meses de gestación. (2) El aumento de α2-globulina se puede ver en los bebés nacidos de 1 a 6 meses, con un aumento moderado en 4 a 6 meses de embarazo y un aumento significativo en 7 a 9 meses. (3) la elevación de la β-globulina se observa en el bebé después del nacimiento, de 4 a 6 meses de embarazo. (4) El aumento de γ-globulina se observa después de la vacunación de vacunación. Proceso de inspección 1. Agregue el tampón al tanque de electroforesis y ajuste el tampón en los tanques a ambos lados para que estén en el mismo plano. 2. Preparación de la película de acetato de celulosa: tome una película de acetato de celulosa (2 cm × 8 cm) y dibuje una línea horizontal con un lápiz a 1,5 cm (un lado del lado negativo) de la superficie rugosa para hacer una marca punteada. Después de numerar e indicar los electrodos positivo y negativo, la película se sumergió en la solución de tampón de sodio barbiturato-barbital, y después de estar suficientemente saturada (generalmente 20 minutos), el exceso de tampón se eliminó intercalando el papel de filtro limpio. 3. El cabello de la película de acetato de celulosa se une al soporte del tanque de electroforesis y se endereza. Pipetee 3 ~ 5μl de suero no hemolítico con una micropipeta y agréguelo a lo largo de la línea horizontal en la línea horizontal. La muestra debe mantenerse a cierta distancia del borde de la película para evitar la deformación de la banda de proteína en el patrón de electroforesis. Después de que el suero penetra en la película, la película se invierte. Con el lado luminoso hacia arriba, pégalo en el soporte del tanque de electroforesis y conecta los dos extremos de la película al tampón con papel de filtro de doble capa o cuatro capas de gasa, y espera un momento. 4, encienda la alimentación, preste atención a los electrodos positivo y negativo en la película de acetato de celulosa, no conecte mal. Voltaje 90 ~ 150v, corriente 0.4 ~ 0.6mA / cm (se requiere un voltaje de electroforesis diferente, la corriente puede ser diferente, debe ser flexible), energía de verano 45 minutos, tiempo de encendido en invierno es un poco más largo, aproximadamente 60 minutos, expansión de la zona de electroforesis aproximadamente 25 ~ 35 mm puede ser. 5, teñido: después de completar la energía, retire la película y sumerja directamente en la solución de tinte Lichunhong S o la solución de tinción amino black 10B, manche durante 5 a 10 minutos (por la zona de albúmina), luego enjuague el resto en la solución de enjuague. Tinte hasta que el fondo sea incoloro. 6, cuantitativo: 1 método colorimétrico: seque la película enjuagada, corte el área de proteína teñida en el tubo correspondiente, agregue 0.6 ml / L de hidróxido de sodio 6 ml en el tubo de albúmina (calcule la absorbancia multiplicada por 2), el resto Agregue 3 ml a cada tubo, agítelo varias veces y colóquelo en un tanque de agua a 37 ° C durante 20 minutos para que su color se filtre. Tinción con Amino Black 10B Se leyó la absorbancia de cada tubo a 620 nm usando un espectrofotómetro, y luego se calculó el contenido de cada tubo (control simultáneo del tubo en blanco). Cuando el Lichunhong S se tiñó, el lixiviado se trató con hidróxido de sodio 0,1 mol / L, y la cantidad fue la misma que anteriormente. Después de 10 minutos, agregue 0.6 ml de ácido acético 400 ml / L al tubo de albúmina (multiplique la absorbancia por 2), y agregue 0.3 ml a los otros tubos para neutralizar parte del hidróxido de sodio para que el color sea más profundo. Si es necesario, centrifugue y tome el sobrenadante. La absorbancia de cada tubo se leyó a 520 nm mediante un espectrofotómetro (control de blanco simultáneo), y luego se calcularon los contenidos respectivos. 2 Método de escaneo del densitómetro: A. Transparente: aspire el líquido de enjuague en la película (para evitar que el líquido transparente se diluya para afectar el resultado transparente), sumerja la película en el líquido transparente durante 2 a 3 minutos, luego sáquela y aplánela rodando. Limpie la pieza de vidrio sin arañazos (no cree burbujas), coloque el portaobjetos por un tiempo, retire el exceso de líquido transparente, colóquelo en un horno a una temperatura constante de 90 ° C a 100 ° C, hornee durante 10 a 15 minutos, retire y enfríe a A temperatura ambiente, las áreas de proteínas transparentes por este método son distintas, la película es plana y puede escanearse directamente y conservarse permanentemente (transparente con naftaleno de hidrógeno o parafina líquida. La película enjuagada debe secarse y ser transparente, y la película transparente no puede ser transparente) Dura mucho tiempo y es propenso a las arrugas). B. Cuantificación de escaneo: La película transparente se coloca en un densitómetro completamente automático u otra caja oscura de densitómetro para el análisis de escaneo. No apto para la multitud. No Reacciones adversas y riesgos No